ГОСТ Р 51440-99

ГОСТ Р 51440-99
                                                                        (ИСО 8 1 2 8 - 2 - 9 3 )


                     Г О СУ ДА Р СТ ВЕ Н Н Ы Й СТАНДАРТ Р О С С И Й С К О Й   ФЕДЕРАЦИИ




                                 СОК Я БЛ О Ч Н Ы Й ,
                     СОК Я БЛ О ЧН Ы Й КО Н Ц ЕН ТРИ РО ВА Н Н Ы Й
                            И НАПИТКИ, СОДЕРЖ АЩ ИЕ
                                  Я Б Л О Ч Н Ы Й СОК

                      Метод определения содержания патулина с помощью
                                тонкослойной хроматографии


                                                Издание официальное




                                               ГОССТАНДАРТ РОССИИ
                                                     Москва




технический надзор

ГОСТ Р 51440-99

                                       Предисловие

    1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овоше-
сушильной промышленности (ВНИИКОП)

     ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов
и опошей*

     2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря
1999 г. № 595-ст

     3 Стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128—2:1993 «Сок
яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение
содержания патулина. Часть 2. Метод тонкослойной хроматографии», кроме приложения «Библио­
графия*

     4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ




     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Р оссии

                                                      © И ПК Издательство стандартов, 2000
                                                              © СТАНДАРТИНФОРМ, 2008
                                                 Переиздание (по состоянию на июль 2008 г.)
II

ГОСТ Р 51440-99
                                                                                    (ИСО 8 1 2 8 - 2 - 9 3 )
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                      СТАНДАРТ              РОССИЙСКОЙ                   Ф ЕД Е Р АЦ И И

       СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ,
                       СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

        Метод определения содержания патулина с помощью тонкослойной хроматографии

                  Apple juice, apple juice concentrates and dnnks containing apple juice.
                Method lor determination o f patulin content using thin-layer chromatography




                                                                                  Дата введения 2001—01—01



     1 Область применения

     Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочных соках,
концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок. с помощью тонкослой­
ной хроматографии.
     Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 25 мкг/дм’ при условии, что
взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 50 см1.

     2 Сущность метода

     Патулнн экстрагируют из исследуемой пробы смесью этнлаиетата с хлороформом (3:2 по
объему). Экстракт очищают на колонке с силикагелем. Количественный и качественный анализ
экстракта проводят с помошыо двумерной тонкослойной хроматографии (ТСХ) при проявлении
пятен раствором гидрохлорида гидразона З-метил-2-бензотиазолина (МБТГ).

     3 Реактивы

     Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для хроматографии*.
     ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — При работе с бензолом и хлороформом следует соблюдать особую
осторожность, поскольку эти растворители токсичны и взрывоопасны.
     3.1 Растворители: этилацетат. хлороформ и толуол.
     3.2 Подвижные фазы для двумерной ТСХ:
     бензол/метанол/уксусная кислота (массовой долей S0 %) (19:2:1 по объему);
     толуол/ этила цетат/м уравь ипая кислота (массовой долей 90 %) (5:4:1 по объему).
     3.3 Силикагель для колоночной хроматографии с размером частиц от 0,063 до 0,2 мм.
     3.4 Элюирующий раствор: смесь толуола с этилацетатом (75:25 но объему).
     3.5 Стандартный раствор патулина (С7Нь0 4)
     3.5.1 Приготовление стандартного раствора патулина
     Навеску патулина массой 10,0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с
одной отметкой вместимостью 100 см3 в этилацетате (3.1). Объем содержимого в колбе доводят до
отметки этилацетатом.
     Пипеткой переносят 10,0 см3 приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной
отметкой вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до отметки этилацетатом.
Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около
10 мкг/см3.


Издание официальное
                                                                                                           1

ГОСТ Р 51440-99

    Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходя­
щем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.
    3.5.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина
    Концентрацию стандартного раствора патулина (3.5.1) рр„ мгк/см3. рассчитывают по формуле

                                             . A U НЮЦ С                                    (1)
                                       Р("        АУ,
где Л — оптическая плотность стандартного раствора патулина;
 Л,.ь ~ молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм,
         дм’ моль-1 • с м -‘ (у42?6 = 14600);
    М — молярная масса патулина. г/моль:
    С — постоянная прибора (обычно С = 1).
     3.6 Приготовление раствора гидрохлорида МБТГ
     Навеску моногидрата гидрохлорида гидразона З-метил-2-бенэотиазолина (МБТГ) массой 0,5 г
растворяют в 100 см' воды.
     Пригото&ленный раствор хранят в холодильнике. Срок годности раствора — 3 сут.


     4 Приборы и лабораторное оборудование

      Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия
конце!гтрации 10 г/см'.
     Обычное лабораторное оборудование, в частности, следующее:
     4.1 Хроматографическая колонка длиной 300 мм. внутренним диаметром 22 мм, с резервуаром
вместимостью 250 см3 и запорным краном, снабженная с выходного конца пористым стеклянным
диском.
     4.2 Оборудование для ТСХ: стеклянные хроматографические камеры, длинноволновая ультра­
фиолетовая лампа (360 нм) и устройство для опрыскивания.
     4.3 Флюороденситометр.
     4.4 Пластинки для ТСХ размером 20x20 см, покрытые силикагелем (3.3) толщиной слоя
0.25 мм, без флюоресцентного индикатора.
     4.5 Сушильный шкаф с принудительной вентиляцией, пригодный для работы при (130± 1) *С.


     5 Отбор проб

     Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или
изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.


     6 Проведение испытаний

     6.1 Приготовление испытуемого раствора
      При испытании концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Даль­
нейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.
      Пробу объемом 50 см* экстрагируют порцией смеси этилацетага с хлороформом (3:2 по объему)
объемом 50 см3 в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза той же смесью
новыми порциями объемом по 50 см'. Экстракты объединяют и фильтруют на воронке с пористым
стеклянным фильтром через слой безводного сульфата натрия толщиной I см, фильтрат собирают
в отгонную колбу вместимостью 250 см3.
      Экстракт упаривают на ротационном испарителе под вакуумом досуха, остаток количественно
переносят в мерный цилиндр вместимостью 100 см3, ополаскивая колбу четырьмя порциями эти-
лаиетата объемом по 5 см3. Объем содержимого в цилиндре доводят сначдла до 25 см3 этилацетатом,
затем до 100 см ’ толуолом.
     6.2 Колоночная хроматография
      В основание колонки (4.1) помешают ватный тампон. В колонку вносят 25 см3 толуола и
2