ГОСТ Р 51258-99

ГОСТ Р 51258-99
                                                               (ДИН 10326-86)


                     ГОСУДАРСТВЕННЫЙ   СТАНДАРТ      РОССИЙСКОЙ   ФЕДЕРАЦИИ




                        М ОЛОКО И М О Л О Ч Н Ы Е ПРО ДУКТЫ

                           Метод определения сахарозы и глюкозы


                                        Издание официальное




                                              Стщцляфчш
                                                   2009




георадарная съемка

ГОСТ Р 51258-99

                                          Предисловие

     1 РЛЗРЛБО ГЛН Московским государственным университетом пищевых производств

     ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромыш­
ленной продукции на безопасность*

    2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 12 апреля 1999 г.
№ 120

      3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИ Н
10326—86 «Ферментативное определение сахарозы и глюкозы в молочных продуктах и мороженом* с
дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 3, 4. 5,
6 и 7)

     4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

     5 ИЗДАНИЕ (август 2009 г.) с Поправкой (8—2009).




     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения
Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
II

ГОСТ Р 51258-99
                                                                                  (ДИН 10326-86)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                    СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ                            ФЕДЕРАЦИИ



                           МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

                             Метод определения сахарозы и глюкозы

                                       Milk and milk products.
                       Method Гог determination of sucrose and glucose content




                                                                             Дата введения 2000—01—01

     1 Область применения
     Настоящий стандарт распространяется на молоко, молочный напиток, молочные продукты, слад­
кий плавленый сыр и устанавливает метод определения массовых долей сахарозы и глюкозы в молоке
и молочных продуктах.
     (Поправка).

     2 Нормативные ссылки
     В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
     ГОСТ 3652—69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия
     F'OCT 3769—78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия
     ГОСТ 4174—77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия
     ГОСТ 4328—77 Реактивы. Натрия пироокись. Технические условия
     ГОСТ 4523—77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия
     ГОСТ 6709—72 Водадистиллированная. Технические условия
     ГОСТ 26809—86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки
проб к анализу

     3 Определения, обозначения н сокращения
     3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:
     массовые доли сахарозы и глюкозы: Массовые доли сахарозы и глюкозы в молоке и молочных
продуктах, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в г/100 г.
     3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:
     ФР        — Р-фруктозилаза;
     АТФ       — аденозин-5-трнфосфат;
     АДФ       — аденозин-5 -дифосфат;
     ГК        — гексокиназа:
     Г-6-Ф     — глюкозо-6-фосфорная кислота;
     Г6Ф-ДГ — глюкозо-6-фосфатдегндрогеназа;
     Н.ЛДФ — р-11и копи ымидаден иIин нуклеотид<£юсфат:
     Н.ЛДФН — р-никотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма);
     ГЛ-6-Ф — глюконат-6-фосфорная кислота;
     Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит
катализатором для превращения при 25 "С 1 мкмоля вещества в минуту.


Издание официальное

                                                                                                    1

ГОСТ Р 51258-99

     4 Сущность метода и реакции
     4.1 Сущность метода
     Метод определения глюкозы основан на фосфорилировании глюкозы, содержащейся в освобож­
денном от жира it белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, под действием
ЛТФ в присутствии фермента ГК. окислении образовавшейся Г-6-Ф под действием НЛДФ в присут­
ствии фермента Г'бФ-ДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НЛДФН.
эквивалентной массовой доле глюкозы в пробе (свободная глюкоза).
     Метод определения сахарозы основан на гидролизе сахарозы, содержащейся в освобожденном от
жира и белка подлом экстракте пробы молока или молочных продуктов, в присутствии фермента ФР
до глюкозы и фруктозы, фосфорилировании и окислении имеющейся в пробе глюкозы (обшая глю­
коза — свободная глюкоза плюс образовавшаяся при гидролизе сахарозы) под действием ЛТФ в
присутствии фермента ГК. окислении образовавшейся Г-6-Ф под действием НЛДФ в присутствии
фермента Г6Ф-ДГ, фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НЛДФН, эквивален­
тной массовой доле глюкозы, и расчете содержания сахарозы по разности оптических плотностей
данного раствора и раствора, используемого при определении свободной глюкозы.
     4.2 Реакции
     В фотометрической кювете протекают следующие ферментативные реакции:

                          сахароза + Н.О —      - глюкоза + фруктоза;                          (1)


                            глюкоза + ЛТФ — — —►Г-6-Ф + АДФ;                                   (2)


                       Г-6-Ф + НЛДФ-             ГЛ-6-Ф + НЛДФН + Н*.                          (3)

     5 Реактивы
      При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
      Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллнрованной.
      Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.
      Допускается использование имеющихся в продаже готовых наборов реактивов дтя определения
сахарозы и глюкозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.
      Препараты динатриевой соли р-никотинамидадениндинуклеотндфосфата ф-НЛДФ -Na,) и ди-
натрневой соли аденозин-5 -трифосфата (А ТФ -№ ,Н,хЗН,0) должны содержать не менее 90 % основ­
ного вещества.
      5.1 Раствор сернокислого цинка
      30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (ZnS04x7H ,0) растворяют в 100 см* дистиллированной
воды по ГОСТ 6709. Раствор хранят при комнатной температуре 12 мес.
      5.2 Раствор гексациамо-(П)-феррага калия
      15 ггексациано-(П)-феррата (KJFe(CH)(x3H_.0) калия растворяютв 100см’дистиллированной
воды. Раствор хранят при температуре 4 'С 1 мес.
      5.3 Раствор гидроокиси натрия
      8 г гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 растворяют в 100 см* дистиллированной воды. Раствор
хранят при комнатной температу ре 12 мес.
      5.4 Цитратный буферный раствор
      4,55 г тринатрийцитрата дигидрата (CeH .0 7N a,x2H ,0) и 3,45 г моногидрата лимонной кислоты
по ГОСТ 3652 (C J^O .x H .O ) растворяют в 70 см* дистиллированной воды. Активную кислотность
раствора устанавливают равной 4.6 pH раствором гидроокиси натрия по 5.3. Объем раствора доводят
дистиллированной водой до 100 см’. Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С 12 мес.
      5.5 Раствор ФР
      Сухой лиофилизат ft-фруктозндазы из дрожжей массой 0,005 г и активностью 1500 Е растворяют
в 2 см’ бидистиллнрованной воды. Конечная удельная активность раствора соответствует 750 Е/см*.
Раствор устойчив при температуре 4 *С одну неделю.
2