ГОСТ 25179-90

ГОСТ 25179-90


                    М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й       С Т А Н Д А Р Т




                                        МОЛОКО

                                МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА



                                        Издание официальное




                                                  Н оет
                                              С т адертшфщи
                                                   2009




платье с кружевом

УДК 637.11.001.4:006.354                                                                                           Группа Н19

М    Е    Ж    Г    О    С    У    Д   А    Р    С    Т   В    Е    Н    Н    Ы    Й          С Т А Н Д А Р Т


                                         МОЛОКО

                               Методы определения бедка                                                       ГОСТ
                                                                                                          25179-90
                        Milk. Methods for determination of protein


MKC67.100.10
ОКСТУ 9209

                                                                                                      Дата введения 01.01.91

     Настоящий стандарт распространяется на непастеризованное молоко с кислотностью не выше
20 Т и устанавливает следующие методы измерения массовой доли белка: колориметрический, реф­
рактометрический и формольного титрования.

                                             1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

     Отбор проб и подготовка их к испытаниям - по ГОСТ 13928. Консервирование проб не допус­
кается.

                                       2. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

      Колориметрический метод основан на способности белков молока при pH ниже изоэлектричес-
кой точки связывать кислый краситель, образуя с ним нерастворимый осадок, после удаления которо­
го измеряют оптическую плотность исходного раствора красителя относительно полученного раствора,
которая уменьшается пропорционально массовой доле белка.
      2.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы
      Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ
24104*.
      Центрифуга для измерения массовой доли жира молока по нормативно-технической документа­
ции.
      Колориметр фотоэлектрический лабораторный со светофильтром для выделения спектральной
области 590 нм с кюветами рабочей длины 10 мм или спектрофотометр с выделяемой длиной волны
590 нм.
      Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения 2—3 ед. pH с ценой деления 0.05 ед.
pH.
      Термометр ртутный стеклянный с диапазоном измерения 0—100 'С, с ценой деления 0,5 или
1,0 *С, с пределом допустимой погрешности ±1 *С по ГОСТ 28498.
      Пробки резиновые конусные № 16 или 19 по нормативно-технической документации.
      Штатив для пробирок.
      Фильтры бумажные.
      Пробирки П1, П2, П4—25 по ГОСТ 25336.
      Воронки В или ВФ по ГОСТ 25336.
      Пипетки 1 - 2 - 1 , 2 - 2 - 1 . 4 - 2 - 1 , 5 - 2 - 1 , 2 - 2 - 2 0 по ГОСТ 29169.
      Колбы 1 - 2 - 5 0 . 1 -2 -2 0 0 , 1 -2 -5 0 0 . 1 - 2 - 2 0 0 0 .2 - 2 - 5 0 , 2 -2 -2 0 0 , 2 - 2 -5 0 0 , 2 -2 -2 0 0 0 по
ГОСТ 1770.
       * С I июля 2002 г. действует ГОСТ 24104—2001.
Издание официальное                                                                                 Перепечатка поспрошена

                                                                                       © Издательство стандартов. 1990
                                                                                        © СТАНДАРТИНФОРМ, 2009

ГОСТ 25179-90 С. 2

      Бутыль темного стекла вместимостью 2000 см’ по нормативно-технической документации.
      Краситель «Амидо черный 10 Б» (1-амино-2,7-бис (л-нитрофенилазо)-8-оксинафтални-3,6-ди-
сульфокислотыдинатриевая соль) по ТУ 6 - 0 9 —05—557. ч. д. а.
      Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х. ч. или ч. д. а.
      Натрий ортофосфат двузамещенный, 12-водный по ГОСТ 4172, х. ч. или ч. д. а. или натрий
отофосфатдвухзамещенный, х. ч. или ч. д. а.
      Кислота серная по ГОСГ 4204. х. ч. или ч. д. а.
      Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч. или ч. д. а.
      Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
      Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и
оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже
вышеуказанных.
      2.2. П о д г о т о в к а к и з м е р е н и я м
      2.2.1. Приготовление буферного раствора
      Взвешивают 31.70 г лимонной кислоты и 8,40 г ортофосфата натрия. Результат взвешивания
записывают с округлением до 2-го десятичного знака. Реактивы помешают и колбу вместимостью
500 см* и добаатяют в нее 400 см' воды. Колбу нагревают до температуры выше 70 "С. Затем содержимое
колбы перемешивают до полного растворения веществ и охлаждают до температуры (20+2) *С.
      2.2.2. Приготовление раствора красителя
      Навеску 4.60 г красителя, взвешенного с отсчетом до 0.01 г, помешают в колбу вместимостью
500 см1 и добавляют в нее 200 см* воды. Колбу нагревают до температуры не выше 70 *С и затем
перемешивают содержимое ее до растворения красителя.
      Раствор отфильтровывают через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 2000 см’. Фильтр
промывают водой до удаления следов красителя.
      В эту же колбу переносят буферный раствор, приготовленный по п. 2.2.1.
      Содержимое колбы охлаждают до температуры (20±2) “С. Колбу доливают водой до метки,
закрывают резиновой пробкой и перемешивают ее содержимое путем переворачивания колбы не менее
шести раз.
      Раствор должен иметь (2,3±0,1) ед. pH. Если pH раствора не соответствует данному значению,
исправляют его добавлением концентрированной серной кислоты или гидроокиси натрия. Раствор,
разбавленный в 50 раз, должен иметь оптическую плотность (0,82±0,02) на длине волны 590 нм в
кювете с рабочей длиной 10 мм. Если оптическая плотность раствора не соответствует данному значе­
нию, то исправляют ее добавившем буферного раствора или раствора красителя.
      Раствор следует использовать только после 12 ч выдержки.
      Раствор должны хранить в холодильнике в бутыли из темного стекла не более 4 мес, еженедельно
проверяя и исправляя значения pH и оптической гикниости.
      2.3. П р о в е д е н и е и з м е р е н и й
      2.3.1. В стеклянную пробирку помешают пипеткой 1 см’ молока, приливают 20 см’ раствора
красителя и, закрыв пробирку резиновой пробкой, перемешивают ее содержимое, переворачивая
пробирку от 2 до К) раз.
      Следует избегать встряхивания, так как при этом образуется трудноразрушимая пена.
      2.3.2. Помещают пробирку в центрифугу и центрифугируют при частоте вращения 25 с-1
(1500 об/мин) в течение 10 мин или при частоте вращения 16 с-1 (1000 об/мин) — в течение 20 мин.
      2.3.3. Отбирают пипеткой 1 см' надосадочнон жидкости, помещают в мерную колбу вместимо­
стью 50 см’, доливают колбу до метки водой и содержимое перемешивают. Аналогичным способом
разбавляют рабочий раствор красителя в 50 раз.
      2.3.4. Измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре оптическую плотность раз­
бавленного раствора красителя по отношению к разбавленному содержимому мерной колбы.
      2.3.5. После каждых 24 наблюдений кювету промывают буферным раствором, приготовленным
по п. 2.2.1.
      2.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в
      2.4.1. Массовую долю белка X, %, вычисляют по формуле
                                        X — 7,78 I) - 1.34,
где D — измеренная оптическая плотность, ед. оптнч. плотности;
 7,78 — эмпирический коэффициент, %/ел. оптич. шкпиости:
  1,34 — эмпирический коэффициент, %.

С. 3 ГОСТ 25179-90

     2.4.2.      Предел допустимой погрешности результата измерений в диапазоне массовой доли белка
2,5—4,0 % составляет ±0,1 % массовой доли белка при доверительной вероятности 0,80 и расхождении
между двумя параллельными измерениями не более 0.013 единиц оптической плотности или не более
0.1 % массовой доли белка.
     За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов
вычислений двух параллельных наблюдений, округляя результат до второго десятичного знака.
     При расхождении между результатами измерений, полученными в разных лабораториях более
чем на 0,1 % массовой доли белка, измерение проводят по ГОСТ 23327.

                                3. РЕФРАКТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

      Рефрактометрический метод основан на измерении показателей преломления молока и безбелко-
вой молочной сыворотки, полученной из того же образца молока, разность между которыми прямо
пропорциональна массовой доле белка в молоке.
     3.1. Л п п а р а т у р а, м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы
      Комплект для измерения массовой доли белка, состоящий из:
     рефрактометра со шкалой массовой доли белка в диапазоне 0—15 %, ценой деления 0,1 %;
     водяной бани закрытого типа для флаконов.
      Центрифуга дтя измерения массовой доли жира в молоке по нормативно-технической докумен­
тации.
     Электроплитка номинальной мощностью 1000 Вт по ГОСТ 14919.
      Колбы 1 -1 0 0 0 -2 , 2 -1 0 0 0 -2 по ГОСТ 1770.
      Пипетки 1 - 2 - 1 , 2 - 2 - 1 , 2 - 2 - 5 , 4 - 2 - 1 , 5 - 2 - 1 по ГОСТ 29169.
     Флаконы из стеклянной трубки для лекарственных средств, типа ФО. вместимостью 10 см> по
ТУ 6 4 -2 -1 0 .
      Пробки резиновые по нормативно-технической документации.
      Кальций хлористый 2-водный по ТУ 6—09—5077.
      Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
     Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и
оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже
вышеуказанных.
     3.2. П о д г о т о в к а к и з м е р е н и я м
      Навеску 40,0 г хлористого кальция помешают в колбу вместимостью 1000 см1, приливают к ней
500 см1воды и перемешивают до полного растворения соли. Содержимое колбы нагревают до темпера­
туры (20±2) ‘С и доводят водой до метки.
     3.3. П р о в е д е н и е   измерений
     3.3.1. Наливают в 3 флакона по 5 см> молока, добавляют по 6 капель раствора хлорида кальция.
Флаконы закрывают пробками и содержимое их перемешивают путем переворачивания флаконов.
     Помешают флаконы в водяную баню, наливая в баню воду так. чтобы ее уровень достигал
половины высоты флаконов. Баню закрывают, помещают на электроплитку, доводят воду в бане до
кипения и кипятят не менее 10 мим. Не открывая бани, сливают горячую воду через отверстия в
крышке, наливают в баню холодную воду и выдерживают в ней не менее 2 мин.
     Открывают баню, извлекают флаконы и разрушают белковый сгусток путем энергичного встря­
хивания флаконов.
     Флаконы помешают в центрифугу и центрифугируют не менее 10 мин. Образовавшуюся прозрач­
ную сыворотку отбирают пипеткой и наносят на измерительную призму рефрактометра 1—2 капли.
Закрывают измерительную призму осветительной.
     Наблюдая в окуляр рефрактометра, специатьным корректором убирают окрашенность границы
света и тени. Для улучшения резкости границы измерение проводят через I мин после нанесения
сыворотки на призму, так как за это время из пробы удаляется воздух и лучше смачивается поверх­
ность осветительной призмы.
     3.3.2. Проводят по шкале «Белок* не менее 3 наблюдений. Удаляют сыворотку с призмы рефрак­
тометра, промывают ее водой и вытирают фильтровачьной бумагой.
     3.3.3. Помешают на измерительную призму 2 капли исследуемого молока и проводят по шкате
«Белок* не менее 5 набтюденнй, так как резкость границы света и тени у молока хуже, чем у
сыворотки.