ГОСТ 25102-90

ГОСТ 25192—90

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ СПОР
МЕЗОФИЛЬНЫХ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

Издание официальное

ИПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ
Москва

УДК 637.12.04.576.8:006.354 Группа Н19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Методы определения содержания спор
мезофильных анаэробных бактерий гост
25102—90
Milk and milk products.
Methods for determination of the spores
content of mesophilic anacrobic bacteria.
MKC 07.100.30
67.100.10

OKCTY 9209

Дата введения 01.07.91

Настоящий стандарт распространяется на сырое и подвергнутое тепловой обработке молоко, сыры
и устанавливает метолы определения в них содержания спор мезофильных анаэробных бактерий.

Методы основаны на высеве определенного количества прогретых при температуре (7541) "С в
течение (30+3) мин проб молока или сыра в плотные или жидкие питательные среды. культивирова-
нии посевов в течение 72 ч при температуре (37+1) °С, регистрации видимых признаков роста микро-
организмов, определении их наиболее вероятного числа.

1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
1.1. Отбор проб и подготовка их к анализу — по ГОСТ 1392$. ГОСТ 9225, ГОСТ 26809.

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА СПОР
МЕЗОФИЛЬНЫХ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

Метод основан на способности мезофильных анаэробных бактерий, содержащихся в образцах
молока и сыра, размножаться и давать вилимые признаки роста в питательных средах.

2.1. Аппаратура, материалы, реактивы

‘Анализатор потенциометрический, класс точности 1.5 по ГОСТ 19881.

Баия водяная.

Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 ги пределом
допускаемой погрешности +15 мг по ГОСТ 24104*.

Весы для статического взвешивания среднего класса точности с наибольшим пределом взвешива-
ния 10 кг по ГОСТ 29329.

Допускается применение других весов с метрологическими характеристиками не ниже указанных.

Воронки лабораторные по ГОСТ 25336.

Кастрюли разные по ГОСТ 17151.

Колбы плосколонные исполнения | или 2, вместимостью 50, 100, 250, 500, 1000. 2000 см’ по
ГОСТ 25336.

Пипетки 1-го или 2-го классов точности исполнения 1, вместимостью 1,2 cx’, исполнения 4. 5,
6, 7, вместимостью 1, 2, 5. 10 см’ по ГОСТ 29169.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Пробирки типов ПТ, П2 диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диаметром 21 мм, высотой 200 мм
по ГОСТ 25336.

Пробки корковые по ГОСТ 5541.

Пробки резиновые конусные по ТУ 38 1051835.

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001.

Издание официальное Перепечатка воспрешена
*

ГОСТ 25102—90 C. 2

Секундомер механический и часы по нормативно-технической документации.

Скальпели и ножи медицинские по ГОСТ 21240.

Спиртовки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 или горелки газовые.

Стаканчики для взвешивания типов СВ и СН по ГОСТ 25336.

‘Стерилизатор воздушный по ГОСТ 22649.

Стерилизатор паровой медицииский по ГОСТ 19569* или аналогичный стерилизатор. обеспечи-
вающий требуемые технологические режимы.

Термометры стеклянные жидкостные (нертутные} с диапазоном измерения 0— 100 °С и ценой
деления 1 "С по ГОСТ 28498.

Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 25 до 55 °С с отклонением от заданной
температуры +1 °С.

Цилиндры исполнения | или 2, вместимостью 10, 25, 100 и 1000 см’ по ГОСТ 1770.

Чашки Петри по ГОСТ 25336.

Шоатели.

Штатив для пробирок.

Автолизат дрожжевой сухой по TY 6 —09—3979.

Arap микробиологический по ГОСТ 17206.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода питьевая по ГОСТ 2874**.

Глюкоза кристаллическая гидратная по ГОСТ 975.

Дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171,

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Молоко сухое обезжиренное по ГОСТ 10970.

‘Среда агаровая модифицированная для определения споровых анаэробных бактерий в молоке и
молочных продуктах по ТУ 49 513.

Кислота аскорбиновая пишевая по ГФ СССР, Х, ст. 6.

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199. 4, д. а.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, ч. д. а.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328.

Панкреатин медицинский активностью 50 ед. в | гпо ТУ 49.619.

Хлороформ технический по ГОСТ 20015.

Цистеин солянокислый по TY 6 —09—3251.

2.2. Подготовка к анализу
1. Подготовка аппаратуры и материалов — по ГОСТ 9225.

2.2.2. Приготовление сред.

2.2.2.1. Нриготовление раствора хлористого натрия

В | дм’ питьевой волы растворяют 8,5 г хлористого натрия, затем раствор разливают в чистые
стеклянные пробирки диаметром 21 мм по 10 см’, а в колбы по 93 см*, емкости закрывают ватной
пробкой и стерилизуют при температуре (121+2) "С в течение (205) мин. После стерилизации должно
остаться в пробирках около 9 см’. а в колбах около 90 см’ раствора хлористого натрия.

2.2.2.2. Приготовление дрожжевого автолизата

1 кг хлебопекарных дрожжей разводят в | дм’ питьевой воды и помещают в термостат при
температуре (5541) °С на 72 ч. Полученную суспензию переносят в стерилизатор и выдерживают при
температуре (115+2) °С 15 мин. Автолизат фильтруют через ватио-марлевый фильтр. Осалок промыва-
ют таким количеством питьевой воды, чтобы общее количество фильтрата составило 4 aM".

Фильтрат нейтрализуют раствором с массовой долей гидроокиси натрия 20% до рН (6,8+0.1),
разливают в пробирки диаметром 21 мм по (3223) см', закрывают ватной пробкой и стерилизуют при
температуре (12142) “C в течение (2045) мин.

2.2.2.3. Приготовление гидролизованиного молока

Готовят восстановленное обезжиренное молоко с массовой долей сухих веществ 10%, для чего
100 г сухого обезжиренного молока растворяют в 900 см* подогретой до температуры (4541) °С дис-

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935—2002.
** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232—98.

С. 3 ГОСТ 25102—90

тиллированной воды. рН (7,6+0,2) восстановленного обезжиренного молока, подогретого до темпера-
туры (45+1) °C, устанавливают раствором с массовой долей гидроокиси натрия 20%. К подготовлен-
ному молоку добавляют от 0.5 ло 1,0 гпанкреатина, предварительно разведенного в 20—30 см? дистил-
лированной воды температурой (4541) "С. Через 3—5 мин К молоку с панкреатином добавляют 5 см?
хлороформа. Колбу закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре
{40+1) °C втечение 18—24 ч. В течение первых 3 ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после
встряхивания приоткрывают лля удаления паров хлороформа). Через указанное время колбу вынимают
из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр. разводят питьевой во-
дой, добавляя к | части гидролизованного молока 2 части воды. устанавливают pH (7.1+0.1) и
стерилизуют при температуре (121+2) “С в течение (20+5) мин.

2.2.2.4. Приготовление питательной среды для определения
общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий

К 1 лм’ дистиллированной воды добавляют (40,0+0,5) г модифицированной агаровой среды для
опрелеления споровых анаэробных бактерий. Смесь перемешивают, нагревают до полного растворения
‘агара (при наличии осадка фильтруют через ватно-марлевый фильтр). устанавливают pH (7,1+0,1).
Разливают в пробирки по (10+2) cm’, закрывают ватными или ватно-марлевыми пробками и стерили-
зуют при температуре (121+2) °С в течение {20+5) мин.

Допускается приготовление срелы для определения общего количества спор мезофильных анаэ-
‘робных бактерий из отдельных ингредиентов. Для этого в | дм? гидролизованного молока, приготов-
ленного поп. 2.2.2.3, вносят 15 г микробиологического arapa, 0,5 г солянокислого цистеина или 1,0 г
аскорбиновой кислоты, 1,0 г растворимого крахмала и 5,0 г уксуснокислого натрия. Растворяют добав-
ленные компоненты, нагревая смесь в текучем пару. Добавляют 5,0 г глюкозы и 20 ем? дрожжевого
автолизата, приготовленного поп. 2.2.2.2, или 4,0 г сухого дрожжевого автолизата. Устанавливают pH
(7,140.1), разливают среду в пробирки по (10+2) см’, закрывают ватными или ватно-марлевыми
пробками и стерилизуют при температуре (115+2) °C в течение (20+5) мин.

При длительном хранении среды (более 20 сут) после охлаждения пробирок со средой ватные
пробки в стерильных условиях заменяют на стерильные резиновые.

Приготовленную среду хранят в темном месте при температуре (8+2) °С не более 3 мес.

2.2.2.5. Приготовление водного агара

В | дм' питьевой воды вносят 15 г мелко измельченного агара и нагревают до кипения. После
расплавления агара раствор в горячем состоянии фильтруют через ватный фильтр, разливают в про-
бирки по 15 см’ или в колбы по 50—100 см’, закрывают ватными пробками и стерилизуют при
температуре (12142) °C в течение (20+5) мин.

2.2.3. Подготовка образцов молока и сыра к анализу

2.2.3.1. Образцы молока по 15 см’ переносят пипеткой в стерильные пробирки, которые закрыва-
ют ватными пробками. При этом необходимо следить, чтобы капельки молока не оставались на стенках
пробирок.

Подготовленные пробирки с исслелуемыми образцами молока вместе с контрольной пробиркой,
в которой нахолятся 10 cM’ молока и термометр, помещают в водяную баню (уровень воды в водяной
бане должен быть выше уровня молока на 10—15 мм) и выдерживают при температуре (75+1) °С в
течение (3043) мин. затем быстро охлаждают до комнатной температуры, погружая их в холодную
воду.

В зависимости от обсемененности исследуемого молока спорами мезофильных анаэробных бакте-
рий из прогретых проб готовят десятикратные разведения в растворе хлористого натрия, приготовлен-
ном по п. 2.2.2.1, по ГОСТ 9225.

2.2.3.2. Подготовка проб сыра канализу и приготовление разведений продукта для посева — по
ГОСТ 9225.

Подготовленные пробирки с разведениями проб сыра вместе с контрольной пробиркой, в кото-
рой находятся термометр и 10 см’ раствора хлористого натрия, приготовленного по п. 2.2.2.1, помеша-
ют в водяную баню и выдерживают по режимам, указанным ви. 2.2.3.1.

2.3. Проведение анализа

Для определения количества спор мезофильных анаэробных бактерий в молоке и сырах проводят
посев | см’ исследуемого образца (для молока — нулевое, первое и второе, а для сыра — первое и
второе разведения) в пробирку с (10:2) cm’ питьевой среды, приготовленной по п. 2.2.2.4, выдержан-
ной перед анализом в кипяшей водяной бане в течение 30 мин и охлажденной до температуры
(4041) °С.