ГОСТ Р 51426-99

ГО СТ Р 5 1 4 2 6 -9 9
                                                              (И С О 6 8 8 7 - 8 3 )

              Г ОСУДАР СТ ВЕ ННЫЙ СТАНДАРТ Р ОС С И Й С К О Й ФЕ Д Е Р АЦ ИИ




                             М И КРО БИ О ЛО ГИ Я.
                          К О РМ А , К О М Б И К О Р М А ,
                         КО М БИКОРМ ОВО Е СЫ РЬЕ

                 Общее руководство по приготовлению разведений
                     для микробиологических исследований


                                      Издание официальное




                                     ГОССТАНДАРТ РОССИИ
                                           Москва




энергоаудит

ГОСТ I* 51426-99

                                       Предисловие

     1 РЛЗРЛБО'ГЛН творческим коллективом с участием представителей Технического комитета
по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

     ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витамин­
ные добавки, премиксы*

     2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря
1999 г. № 581-ст

     3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта
ИСО 6887—83 «Микробиология. Общее руководство по приготовлению разведений для микробио­
логических исследований», за исключением наименования, 1, 2. 7

     4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

     5 ПЕРЕИЗДАНИЕ




     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разре­
шения Госстандарта России

II                                          76

ГОСТ Р 51426-99
                                                                                         (ИСО 68 8 7 -8 3 )

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                        СТАНДАРТ              РОССИЙСКОЙ                   ФЕДЕРАЦИИ


                                  МИКРОБИОЛОГИЯ.
                      КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

      Общее руководство но приготовлению разведений для микробиологических исследований

                        Microbiology. Fccdstufi's. compound feeds, feed raw materials.
               General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination



                                                                                    Дата введения 2001—01—01



     1 Область применения
     Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и пред­
ставляет собой общее руководство по приготовлению разведений для выявления наличия (отсутст­
вия) или определения количества аэробных микроорганизмов (в настоящее время руководство
должно использоваться в сочетании с методами, описанными в «Правилах бактериологического
исследования кормов*).
     Обязательные требования к порядку проведения разведений изложены в разделе 9.

     2 Нормативные ссылки
     ГОСТ 13496.0—80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
    ГОСТ Р 51419—99 (ИСО 6498—98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка
испытуемых проб

     3 Определения
      В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
      исходная суспензия (первичное разведение): Суспензия, раствор или эмульсия, полученные
после того, как взвешенное или измеренное количество исследуемого продукта было смешано, если
это необходимо, с использованием смесителя и соблюдением соответствующих предосторожностей
(см. примечание к 9) с девятикратным количеством жидкости для разведения (разбавитель см. 5)
так, чтобы крупные частицы, если они есть, могли осесть.
      П р и м е ч а н и е — В некоторых случаях, в особенности для продуктов, у которых исходная I + 9
суспензии слишком вязкая или слишком густая, необходимо прибавить больше разбавителя, ^го следует
учитывать в последующих действиях и при представлении результатов;
     дальнейшие десятикратные разведения: Суспензии или растворы, полученные путем смешива­
ния определенного обьема исходной суспензии с девятикратным объемом разбавителя и повторения
этой процедуры до тех пор. пока не будет получена серия десятикратных разведений, пригодных для
инокуляции культуральной среды;
     специальный стандарт: Стандарт или официальное руководство, описывающие исследование
конкретного продукта (или группы продуктов) на идентификацию или количественный подсчет
определенного микроорганизма (или группы микроорганизмов) и описывающие особенности отбора
и приготовления испытуемых проб.

     * Действует ДО введения в действие ГОСТ Р.разработанного на основе ИСО 6497 |1|.

И манне официальное
                                                      77                                                   I

ГОСТ I* 51426-99

     4 Сущность .метода
      Сущность метода заключается и приготовлении исходной суспензии с равномерным, насколько
это возможно для испытуемой пробы, распределением микроорганизмов. При необходимости, для
того, чтобы снизить количество микроорганизмов па единицу объема и сделать возможным после
инкубации наблюдение за их ростом или подсчет колоний, готовят десятикратные разведения.
      Приемлемое количество микроорганизмов обычно составляет:
      - для наиболее вероятного метода подсчета с использованием трех пробирок: I микроорганизм
в 10 см5 самого высокого десятикратного разведения;
      - для метода подсчета колоний: от 30 до 300 колоний (для некоторых групп, например,
колиформ от 15 до 150 колоний).

     5 Разбавитель
     5.1 Чтобы добиться воспроизводимости результатов, для приготовления разбавителя следует
использовать обезвоженные основные компоненты или обезвоженный полноценный препарат.
     Следует строго соблюдать инструкции изготовителя.
     Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
      Используемая пода должна быть дистиллированной встеклянном аппарате или деионизированной.
     5.2 Состав
     Если нет неопровержимых доказательств (например, авторитетных данных или сравнительных
опытов), что другие разбавители более приемлемы для данных продуктов, то следует использовать
разбавитель следующего состава: 1,0 г пептона, 8,5 г хлористого натрия, 1 дм3 воды.
     5.3 Приготовление
      Компоненты растворяют в воде, если это необходимо, с подогревом.
     pH разбавителя после стерилизации должен быть равен 7,0 при 25 “С.
     5.4 Распределение разбавителя
     Разбавитель помещают в пробирки, колбы или флаконы соответствующей вместимости в таком
количестве, чтобы после стерилизации каждая из них содержала 9 см3 разбавителя или объем,
кратный 9 см3 (для десятикратных разведений), или 90 см3 разбавителя, или объем, кратный 90 см3
(для исходной суспензии). В случае нежидких продуктов см. 9.1.2. Закрывают пробирки, колбы или
флаконы пробками.
      Пробирки, колбы или флаконы с разбавителем стерилизуют в автоклаве при (121±1)'С в
течение 20 мин.
     Если разбавитель не используют сразу, его следует хранить в темноте при температуре от 0 до 5 *С
не более одного месяца в условиях, не допускающих никаких изменений в его объеме или составе.
      П р и м е ч а н и е — При подсчете нескольких групп микроорганизмов, нуждающихся в различных
культуральных средах, необходимо распределить все разведения (или некоторые из них) в количествах,
превышающих 9 см3. Вместимость пробирок, колб или флаконов должна быть соответственно указана.

     6 Оборудование
     Для проведения испытаний применяют обычное микробиологическое оборудование.
     6.1 Прибор для сухой или влажной стерилизации (печь или автоклав, работающий отдельно
или как часть прибора для приготовления и распределения сред).
     Прибор, который будет входить в контакт с разбавителем, пробой или разведениями, кроме
оборудования, которое поставляют стерильным (пластиковые чашки, пластиковые пипетки и т.д.),
следует стерилизовать по одному из следующих методов:
     - путем выдерживания в печи при 170— 175 *С в течение 1 ч;
     - путем выдерживания в автоклаве при (121±!) *С в течение 20 мин.
     6.2 Оборудование для встряхивания (для нежидких продуктов см. 9.1.2).
     Допускается использовать один из следующих приборов:
     - вращательный встря.хиватель, устойчивый к условиям стерилизации, работающий частотой
вращения от 8000 до 45000 об/мин со стеклянными или металлическими резервуарами, снабженны­
ми крышечками:
     - встряхиватель перистальтического типа (стомахер) со стерильными пластиковыми емкостями.
     П р и м е ч а н и е — Резервуары или пластиковые емкости должны быть достаточной вместимости, по­
зволяющей пробе эффективно перемешиваться с достаточным количеством разбавителя. Как правило, вмес­
тимость контейнера должна в два раза превышать объем пробы плюс разбавитель.
2                                                 78