ГОСТ Р 51198-98

ГОСТ Р 51198-98
                                                                       (ИСО 4 1 3 4 -7 8 )


                 Г ОСУДАР СТ ВЕ ННЫЙ СТАНДАРТ Р ОС С И Й С К О Й Ф ЕД Е Р АЦ ИИ




                         М ЯСО И М Я С Н Ы Е П РО ДУКТЫ

                    Метод определения Ь-(+)-глутаминовой кислоты


                                         Издание официальное




                                                     М осква
                                                 Стэндартм н ф орм
                                                       2010




стандартизация

ГОСТ Р 5 1 1 9 8 -9 8

                                       Предисловие

      1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации Т К 335 «Методы испытаний агропро­
мышленной продукции на безопасность»

     2 П РИ Н ЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа
1998 г. N? 336

      3 Настоящ ий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта
ИСО 4134—78 «Мясо и мясные продукты. Определение содержания Ь-(+)>глутаминовой кислоты»
с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 4. 6.6, 6.8,
6.12, 6.13, 7.1 и 9.1)

     4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

     5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2010 г.




                                                      © И П К Издательство стандартов. 1998
                                                             © СТАНДАРТИНФОРМ , 2010


      Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
рас пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по
техническому регулированию и метрологии

II                                         118

ГОСТ Р 51198-98
                                                                                       (ИСО 41 3 4 -7 8 )

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                     СТАНДАРТ             РОССИЙСКОЙ                    ФЕДЕРАЦИИ



                                МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

                         Метод определения Ь-(+)-глутаминовой кислоты

                                        Meat and meat products.
                         Method Гог determination of L-(+)-g!ytamic acid content



                                                                                   Д ата введения 2000—01—01


     1 Область применения
     Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод
определения Ь-(+)-глутаминовой кислоты.

     2 Нормативные ссылки
     ГОСТ 9793—74 Продукты мясные. Методы определения влаги
     ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

     3 Определение
     Массовая доля 1_-(+)-глугаминовой кислоты — массовая доля М + )-глутам иновой кислоты,
определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

    4 Сущность метода
     1_-(+)-глутамниовую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным
раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят активную кислотность
фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование L -(+ )-глутамата в
а-кетоглугарат в ходе реакции с никотнпамидаденнндинуклеотндом (НАД) в присутствии глутамат-
дегидрогеназы (ГД Г):
                                          ГДГ
          Ь-(+)-глугамат + НАД+ + Н ,0 *------- > а-кетоглутарат + Н;\ДН + NH3 + Н \
     Затем окисляют эквивалетгное количество восстаиоатенной формы НЛДН хлоридом йодомп-
тротетразолия (ИНТ) в присутствии липоамшшегндрогеназы (ЛАДГ):
                                              ЛАД Г
                      НЛДН + ИНТ-хлорид + Н* <-------- ^НЛД* + формазан.
     Измеряют массовую долю образовавшегося формазаиа на спектрофотометре при длине волны
492 нм.

     5 Реактивы
     Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х. ч.). Все растворы, кроме
растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного
стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.
     Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализован­
ной или бндистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.


Издание официальное
                                                  119                                                      1

ГОСТ Р 5 1 1 9 8 -9 8

     Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна быть дистиллированной или деминерализованной.
     П р и м е ч а н и с — Однократно дистиллированная вода может содержать ноны металлов, которые сни­
жают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие
нссиецифичсскую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.
     Препарат НАД должен содержать не менее 90 % основного вещества.
     L -(+ )-глутаминовая кислота должна содержать не менее 98 % основного вещества.
     Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии
соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта.
     5.1 Раствор хлорной кислоты с (НСЮ4) — 1,0 моль/дм3
     8.6         см3 раствора хлорной кислоты массовой доли 70 % и плотности 1.67 г/см 3 помещают в
мерную колбу вместимостью ИЮ см3 и доводят объем раствора до метки водой.
     П р и м е ч а н и е — При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет
объема кислоты, используемой для осаждения белков.
     5.2 Раствор гидроксида калия с (КОН) = 2 моль/дм3
     Растворяют 56.1 г гидроксида калия (КОН) в воле, доводят объем раствора до 500 см3.
     5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,6 pH
     5.3.1 Растворяют 1.86 г гидрохлорида триэтаноламина в воде, доводят активную кислотность
раствора до 8,6 pH раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений pH -метр. Затем
добавляют 0,68 г октилфенолдекаэтиленгликоленого эфира (например, Тритон X - 100) и доводят
объем раствора до 100 см3 водой.
     5.3.2 Растворяют 0.86 г двузамещеиного фосфорнокислого калия (К2Н Р 0 4) и 0,007 г одноза-
мещеиного фосфорнокислого калия (К Н ,Р 0 4) в воде и доводят объем раствора до 100 см3.
     5.3.3 Смешивают 20 см3 раствора по 5.3.1 и 5 см3 раствора по 5.3.2.
     Раствор хранят при температуре 4 *С.
     5.4 Раствор НАД
     Навеску НАД массой 0,025 г растворяют в 5.0 см3 воды в небольшой колбе со шлифом, колбу
закрывают пробкой.
     Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 *С.
     5.5 Раствор йодоннтротетразолия [2-(р-йодофс11ил)-3-(р-нитрофемил)-5-фснилтетразо.1ия|
хлорида (ИНТ-хлорида)
     Растворяют 0,030 г ИН Г-хлорида в 50 см3 воды, колбу закрывают пробкой.
     Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 "С в темноте.
     5.6 Раствор ЛАДГ
     Растворяют 0.003 глиоф ильно высушенной липоаминдегидрогеиазы в I см ’ воды.
     Раствор устойчив не менее трех недель при температуре 4 "С.
     5.7 Раствор ГДГ
     Используют раствор глютаматдегидрогеназы концентрации 10 мг/см1, свободный от сульфата
аммония, этиленднаминтетрауксусной кислоты и глутаминазы, поставляемый в готовом виде
(например, в расфасовке по 1.0 см3), удельной активностью не менее 900 Е/см3.
     Раствор устойчив не менее 12 мес при температуре 4 ”С.
     5.8 Стандартный раствор Ь-(+)-глутамн 1Ювой кислоты
     Растворяют 0.050 г Е-(+)-глутаминовой кислоты в 25 см3 воды. Активную кислотность раствора
устанавливают 7.0 pH раствором гидроксида калия (5.2), после чего доводят объем раствора до 50 см3.
     Раствор храпят при температуре 4 'С и непосредственно перед использованием разводят водой
в соолю ш ении объемов 1 : 49.

     6    Средства контроля и вспомогательные устройства
      Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 — 6.11.
      6.1 Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с от­
верстиями диаметром не более 4 мм.
      6.2 М иксер лабораторный.
      6.3 Центрифуга лабораторная с пробирками вместимостью 50 или 100 см3.
      6.4 Иономер или pH -метр диапазоном измерений от 1 до 14 pH и допускаемой погрешностью
± 0.05 pH.
      6.5 Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см.
■>                                            120