ГОСТ Р 51257-99

ГОСТ Р 51257-99
                                                                     (ДИН 10325-86)

                        Г ОСУДАР СТВЕННЫЙ СТАНДАРТ Р О С С И Й С К О Й ФЕДЕРАЦИИ




                                      СЫРЫ ПЛАВЛЕНЫЕ

                                Метод определения лимонной кислоты


                                             Издание официальное




                                                       Москва
                                                   Стандартинформ
                                                         2011




испытания конструкций

ГОСТ Р 51257-99

                                       Предисловие

     1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

   ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропро­
мышленной продукции на безопасность®

     2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 12 апреля
1999 г. № 119

      3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта
ФРГ ДИН 10325—S6 «Ферментативное определение лимонной кислоты в плавленом сыре* с до­
полнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 3,
4, 5, 6 и 7)

    4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

    5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.




                                                       © ИПК Издательство стандартов, 1999
                                                            © СТЛНДЛРТИНФОРМ, 2011

     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разре­
шения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
и                                        24

ГОСТ Р 51257-99
                                                                                (ДИН 10325-86)


 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                  СТАНДАРТ               РОССИЙСКОЙ              ФЕДЕРАЦИИ


                                     СЫРЫ ПЛАВЛЕНЫЕ

                            Метод определения лимонной кислоты

                                         Processed cheeses.
                           Method for determination of citric acid content



                                                                             Дата введения 2000 —01 —01


     1 Область применения
     Настоящий стандарт распространяется на сыры плавленые и продукты на основе плавленого
сыра и устанавливает метод определения массовой доли лимонной кислоты в виде свободной
кислоты или ее соли.

     2 Нормативные ссылки
     В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
     ГОСТ 3769—78 Аммоний сернокислый. Технические условия
     ГОСТ 4201—79 Натрий углекислый кислый. Технические условия
     ГОСТ 4328—77 Натрия гидроокись. Технические условия
     ГОСТ 4529—78 Цинк хлористый. Технические условия
     ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия
     ГОСТ 26809—86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подго­
товка проб к анализу

     3 Определение, обозначения и сокращения
     3.1 В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
     массовая доля лимонной кислоты: Массовая доля лимонной кислоты и ее соли (нитрата) в пе­
ресчете па безводную лимонную кислоту, определенная в соответствии с настоящим стандартом и
выраженная в г/100 г.
     3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:
     НАДН — р-иикотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма);
     L-.МДГ — L-малатдегидрогеназа;
     L-ЛДГ - L-лактатдегидрогеназа;
     ЦЛ — цитратлиаза;
     Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое слу­
жит катализатором для превращения при 25 *С I мкмоля вещества в минуту.

     4 Сущность метода
     Метод основан на экстрагировании лимонной кислоты и ее солей из пробы водой, освобожде­
нии экстракта от жира и белка, ферментативном гидролизе лимонной кислоты в присутствии ЦП до
шавелевоуксусной кислоты с последующим декарбоксилированием ее до пировиноградной кисло­
ты и восстановлении образовавшихся кислот под действием НАДН в присутствии ферментов
L-МДГ и L-ЛДГ до L-яблочной и L-молочной кислот, фотометрическом измерении массовой доли
израсходованного НАДН, эквивалентного массовой доле лимонной кислоты или ее соли.

Издание официальное

                                                    25                                                1

ГОСТ Р 51257-99

       В ходе анализа протекают следующие ферментативные реакции:

            лимонная кислота — — — ►щавелевоуксусная кислота + уксусная кислота,                          (О
                щавелевоуксусная кислота ------- > пировиноград пая кислота + СО,,                        (2)


        щавелевоуксусная кислота + НДДН + Н ‘ —                  — > L-яблочная кислота + НАД*,          (3)


        пнровиноградная кислота + НЛДН + Н ' — ь ~д д г—> L-молочная кислота + НАД*.                     (4)

       5 Реактивы
       При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
       Вода, используемая для приготоаления растворов ферментов, должна быть бидистиллирован-
ной.
      Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна быть дистиллированной или деминерализованной.
     Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов дтя определения
лимонной кислоты при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.
      Препарат глицилглинин должен содержать не менее 90 % основного вещества.
     5.1 Г л и ц и л г л и ц и н о в ы й б у ф е р н ы й р а с т в о р а к т и в н о й к и с л о т н о с т ь ю
7,8 pH
     7,13 г глицилглицика растворяют в 70 см* дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную
кислотность раствора устанавливают равной 7.8 pH приблизительно 15 см3 раствора гидроокиси на­
трия по 5.5, добавляют 10 см3 раствора хлорида цинка по 5.6 и доводят общий объем раствора дис­
тиллированной водой до 100 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 “С 1 мес.
     5.2 Р а с т в о р Н Л Д Н
     0,030 г динатриевой соли (Ижкотинамидадениндинуклеотида ф-НАДН-Na,, массовая доля
основного вещества не менее 98 %) и 0,060 г углекислого кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют
в 6 см3 дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 *С I мес.
     5.3 С у с п е н з и я ф е р м е н т о в L- М Д Г и L-Л Д Г
     0.005 г сухого лиофилизата L-МДГ из свиного сердца активностью 6000 Е смешивают с 1 см3 рас­
твора сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с (NH4),S04 = 3,2 моль/дм3.
     0,005 г сухого лиофилизата L-ЛДГ активностью 2750 Е смешивают с I см3 раствора сернокис­
лого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации c(N H .),S 0 4 = 3.2 моль/дм3.
     Для приготовления суспензии ферментов L-МДГ и L-ЛДГ смешивают 0.4 см3 раствора сер­
нокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации c(N H 4),S 04 = 3,2 моль/дм3. 0.1 см'сус-
пензии L-МДГ и 0,4 см3 суспензии L-ЛДГ.Суспензия ферментов устойчива при температуре 4 'С
12 мес.
     5.4 Р а с т в о р ЦЛ
     0,168 г сухого лиофилизата ЦЛ из Aerobacter aerogenes активностью 42 Е растворяют в I см3
бидистиллированной воды температурой 4 ‘С.Раствор устойчив при температуре 4 *С одну неделю,
в замороженном состоянии при минус 2 0 'С — I мес.
     5.5 Р а с т в о р г и д р о о к и с и н а т р и я
     8 г гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.
     5.6 Р а с т в о р х л о р и д а ц и н к а
     0.080 г хлорида цинка по ГОСТ 4529 растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.

       6 Аппаратура
     Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.13.
     6.1 Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допус­
каемой погрешностью ±0,1 мг.
     6.2 Баня ледяная или холодильник с морозильным отделением.
     6.3 Измельчитель (гомогенизатор) лабораторный угловой скоростью вращения от 500 до
3000 м и н -1.
     6.4 Пробирки диаметром 2,5 см и длиной 20 см.
2                                                 26