ГОСТ Р 53360-2009

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

                                ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ




                                          НАЦИОНАЛЬНЫЙ
                                                                             ГОСТР
                                             СТАНДАРТ
                                           РОССИЙСКОЙ                        53360   -



                                            ФЕДЕРАЦИИ                        2009




                                ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

                             Методы определения ферментативной
                                     активности фитазы


                                            Издание официальное




                       <*>
                       ш




                                                   Отаид1фпш4*р«
                                                        МО*




сертификат на щебень

ГОСТ Р 53360—2009

                                       Предисловие

     Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от
27 декабря 2002 г. Np 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных
стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0 —2004 «Стандартизация в Российской Федерации.
Основные положения»

     Сведения о стандарте

     1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным учреждением «Всероссийский государственный
Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») и
Научно-техническим центром «Лекарства и биотехнология» (НТЦ «Лекбиотех»)

     2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 «Охрана жизни и здоровья живот­
ных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов»

     3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому
регулированию и метрологии от 9 июля 2009 г. Np 2 3 7 - с т

    4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ



     Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом
информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежеме­
сячно издаваемых информационных указателях * Национальные стандарты». В случае пересмотра
(замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано
в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответству­
ющая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего
пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и
метрологии в сети Интернет




                                                                      © Стандартинформ. 2009

     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас­
пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническо­
му регулированию и метрологии

ГОСТ Р 53360— 2009


Н А Ц И О Н А Л Ь Н Ы Й                 С Т А Н Д А Р Т             Р О С С И Й С К О Й           Ф Е Д Е Р А Ц И И



                                            ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

                              Методы определения ферментативной активности фитазы

                                                   Enzym e preparation.
                                          M ethods o f detection o f phytase activity




                                                                                        Д ата в в е д е н и я — 2010— 01— 01



        1 Область применения

     Настоящий стандарт устанавливает методы определения ферментативной активности фитазы
ферментных препаратов и ферментсодержащих смесей с использованием в качестве субстрата фитата
натрия.
      П р и м е ч а н и е — Ф ерм ент ф итаза — мио-мнозит-гексаф осф ат 3-ф осф огидролаза (3.1.3.8) [1). катал и­
зирует гидролитическое расщ епление эф иров инозита и ф осф орной кислоты (ф итина), н ачина я с полож ения С у с
вы свобож дением ф осф атов.


        2 Нормативные ссы лки

     В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
     ГОСТ 61—75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
     ГОСТ 199— 78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водиый. Технические условия
     ГОСТ 1770—74 (И С 0 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилин­
дры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
     ГОСТ 3118— 77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
     ГОСТ 3765— 78 Реактивы. Аммоний молибденовокислый. Технические условия
     ГОСТ 4198— 75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия
     ГОСТ 4204— 77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
     ГОСТ 4461— 77 Реактивы. Кислота азотная. Технические условия
     ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия
     ГОСТ 9147—80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
     ГОСТ 9336— 75 Реактивы. Аммоний ванадиевокислый мета. Технические условия
     ГОСТ 10931—74 Реактивы. Натрий молибденовокислый 2-водный. Технические условия
     ГОСТ 13867—68 Продукты химические. Обозначения чистоты
     ГОСТ 20264.0— 74 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб
     ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
     ГОСТ 24147—80 Аммиак водный особой чистоты. Технические условия
     ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры
и размеры
     ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.
Часть 1. Общие требования
       П р и м е ч а н и е — При пользовании н астоящ им стандартом целесообразно п роверить д ействие с сы л о ч­
н ы х стандартов в инф орм ационной систем е общ его пользования — на оф ициальном сайте Ф едерального
агентства по техническом у р егулированию и м етрологии в сети И нтернет или по еж егодно и здаваем ом у и нф орм а­
ционном у указателю «Н ациональны е стандарты », которы й опубликован по состоянию на 1 января текущ его года, и
по соответствую щ им еж ем есячно издаваемы м инф орм ационны м указателям , опубликованны м в текущ ем году.


И зд ан и е о ф и ц и а л ь н о е

                                                                                                                           1

ГОСТ Р 53360—2009

Если ссы лочны й стан да рт заменен (изм енен), то при пол ьзовании настоящ им стандартом следует руководство­
ваться заменяю щ им (и зм ененны м ) стандартом. Если ссы лочны й стандарт отменен без замены , то полож ение, а
котором д ана ссылка на него, прим еняется в части, не затрагиваю щ ей эту ссылку.


        3 Термины и определения

        В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
        3.1 гидролиз: Расщепление исходного соединения на два более простых в присутствии молекул
воды.
     3.2 ферментативный гидролиз: Гидролиз высокомолекулярных соединений под воздействием
катализаторов белковой природы — гидролитических ферментов (гидролаз, класс 3(1]).
     3.3 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействует данный фермент.

     4 Метод определения ферментативной активности фитазы
     с образованием молибденовой сини

      4.1 Характеристика метода
      4.1.1 Метод основан на количественном определении содержания неорганических фосфатов
(Р 04), образующихся в результате действия фермента фитазы на субстрат — фитат натрия (натриевую
соль фитиновой кислоты) при определенных стандартных условиях, путем их связывания молибдатом
натрия и восстановлением двухлористым оловом с образованном окрашенного в синий цвет комплек­
са — молибденовой сини.
      Метод используется при возникновении разногласий в качестве арбитражного.
      4.1.2 За единицу фитазной активности (1 ед. ФА) принимают количество фермента, катализирую­
щее гидролиз фитата натрия с образованием 1 мкмоля неорганического фосфата за одну минуту в стан­
дартных условиях (температура 37 °С. значение pH 5.5. продолжительность гидролиза 15 мин).
      4.1.3 Интенсивность окраски измеряют фотоколориметрическим методом при длине волны от 650
до 700 нм.
      4.1.4 Количество выделенных неорганических фосфатов определяют по градуировочному графи­
ку. построенному как функция оптической плотности от молярной концентрации фосфатов, мкмоль/см3.
      Метод позволяет определять от 0,05 до 0.40 мкмоль/см3фосфатов. Диапазон измерений контроли­
руемого показателя 500—8000 ед. ФА.
      4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
      4.2.1      Для определения ферментативной активности фитазы используют следующие средства
измерений и оборудование:
      - фотоэлектроколориметр (ФЭК) любого типа, который обеспечивает измерения при длине волны
от 650 до 700 нм, с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1 % (не более 0,01
единицы оптической плотности);
      - pH-метр с набором электродов для измерения в диапазоне от 0 до 14 pH. с пределом допускае­
мой погрешности в эксплуатации ± 0.1 pH;
      - магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин-’ ;
      - ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры ± 1 вС,
      - лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее
7000 мин-1;
      - весы лабораторные по ГОСТ 24104. высокого класса точности, с наибольшим пределом взвеши­
вания 200 г. ценой поверочного деления 0,1 мг и пределом допускаемой погрешности в эксплуатации
±0.15 мг; с наибольшим пределом взвешивания 1 кг. ценой поверочного деления 20 мг и пределом
допускаемой погрешности в эксплуатации * 30 мг,
      - водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100 ± 1) °С;
      - таймер любого типа с погрешностью ♦ 30 с:
      - шкаф сушильный, обеспечивающий температуру нагрева (120 ± 5) °С,
      - вытяжной шкаф любого типа;
      - механическую мельницу, обеспечивающую размалывание исследуемого образца ферментного
препарата до полного прохода пробы через сито;
      - сито с размером отверстий 1.0 мм. сделанное из металлического проволочного тканого мате­
риала.
2