ГОСТ 27318-87

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й       С Т А Н Д А Р Т
                                                         С О Ю З А      ССР




               ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ
                                          МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ АТИПИЧНЫХ МИКОБАКТЕРИЙ

                                                        ГО С Т 2 7 3 1 8 -8 7
                                                      (СТ СЭВ 5 6 2 7 -8 6 )

                                                         Издание официальное
Цена 5 коп.




                                              ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ
                     ■ ■ Д7 f                I_                Мосхаа




              проектирование сооружений

У Д К 6)6:574.8.07:006.354                                                Группа ст9

 Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й         С Т А Н Д А Р Т       С О Ю З А         ССР




         ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ                         ГОСТ
   Методы идентификации атипичных микобактерии
                                                             27318-87
                A g ric u ltu ra l animals.
 Methods of identification of non-typical micro&acteria
                                                            |CT СЭВ 5627— 86)
О КС ТУ 9809


                                                          С рок действия    с 01.01.88
                                                                           до 01.01.93
                 Несоблюдение стандарта преследуется по закону


   Настоящий стандарт устанавливает бактерноскопический. куль­
туральный, биохимический, биологический и серологический мето­
ды идентификации атипичных микобактерий.
   Стандарт применяют при идентификации атипичных мико­
бактерий   ветеринарных лабораториях научно-исследовательских
учреждений и республиканских производственных ветеринарных
лабораториях.

                        1.    БАКТЕРНОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД

      1.1. Сущность метода заключается в способности микобакте­
рий. окрашенных фуксином, удерживать краситель после дли­
тельного обесцвечивания в соляно-кислом спирте.
      1.2. С р е д с т в а и с п ы т а н и й
     Для проведения испытаний применяют:
     микроскопы биологические марки Л\ПИ или МРГ1 по ГОСТ
8 2 8 4 -7 8 ;
     осветитель;
     горелку газовую или спиртовую;
     стекла предметные;
     часы песочные на 5 мин;
     петли бактериологические;
     весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности,
с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104—80;
     пинцет;
     бумагу фильтровальную;

Издание официальное                                       Перепечатка воспрещена
                                          Издательство стандартов, 1987

С. 2 ГОСТ Т7И *—*7

    фенол по ГОСТ 6417—72;
     спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67;
     кислот)' соляную концентрированную по ГОСТ 3118—77, х.ч.
 или ч.д.а;
    натрия гидроокись по ГОСТ 4328—77, ч.д.а.;
    калия гидроокись по ГОСТ 24363—80, ч.д.а.;
    фуксин основной;
    глицерин по ГОСТ 6259—75;
    масло иммерсионное по ГОСТ 13739—78;
    ксилол по ГОСТ 9410—78 или бензин авиационный;
    фуксин Циля карболовый, раствор; готовят следующим обра­
зом: 1 г основного кристаллического фуксина растирают в ступке
с 5 г кристаллической карболовой кислоты и 0,5 см3 этилового
спирта. После растирания краски прибавляют при постоянном по­
 мешивании 90 см3 дистиллированной воды. Раствор краски через
 24 ч фильтруют через бумажный фильтр.
    Карболовый раствор фуксина хранят во флаконах из темного
 стекла с притертой пробкой,
    метиленовую синь;
    культуры микобактерий;
    соляно кислый спирт, раствор с массовой концентрацией соля­
ной кислоты 3%; готовят следующим образом: 3 см3 концентриро­
ванной соляной кислоты добавляют к 97 см3 96%-ного этилового
спирта;
    воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
    1.3. П р о в е д е н и е и с п ы т а н и й
    Из отдельной колонии изучаемой культуры готовят тонкий ма­
зок на предметном стекле, который высушивают при комнатной
температуре и фиксируют над пламенем. На фиксированный пре­
парат кладут узкую полоску фильтровальной бумаги, закрываю­
щую мазок полностью.
    На полоску фильтровальной бумаги наливают карбол фуксина
Циля и нагревают до появления паров (два-три раза) в течение
5 мин (не доводя краску до кипения). Раствор краски при этом
каждый раз добавляют. Дают препарату остыть, удаляют пинце­
том бумагу, сливают избыток красителя и препарат промывают
проточной водой.
    Для обесцвечивания на предметное стекло наливают раствор
соля но-кислого спирта до тех пор. пока он без окрашивания будет
стекать с предметного стекла.
    После обесцвечивания препарат тщательно промывают водой
и окрашивают метиленовой синью в течение 3—5 мин. Затем пре­
парат промывают водой, высушивают на воздухе и просматрива­
ют в световом микроскопе с иммерсией.

ГОСТ 27318—«Г С. 3

     1.4. О ц е н к а р е з у л ь т а т о в
    Нахождение в поле зрения микроскопа кислотоустойчивых
 микобактерий и отсутствие посторонних микроорганизмов являет­
 ся показателем чистоты испытуемой культуры.
    У быстрорастущих культур микобактерий IV группы по Раньо­
 ну наряду с кислотоустойчивыми встречаются н некнслотоустойчи-
 вые формы микобактерий.
                    1. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
      2.1. Сущность метода заключается в получении при пересе­
 вах единичных колоний, определении морфологии и характера
 роста микобактерий на питательных средах.
      2.2. С р е д с т в а и с п ы т а н и й
      Для проведения испытаний применяют:
      весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности,
 с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104—80-
      горелку газовую или спиртовую;
      петли бактериологические;
      термостат с автоматическим регулированием температуры;
      автоклав электрический с рабочим давлением 0.15 МПа
  (1.5 кгс/смг) ;
      шкаф сушильный электрический для стерилизации лаборатор.
 ного стекла с диапазоном изменения температуры от 50 до 220°С;
      аппарат Коха для стерилизации питательных сред текучим
 паром;
      рН-метр 340;
     аппарат для встряхивания;
     центрифугу лабораторную с частотой вращения 3000 мин"'*
     лупу с увеличением 3* и 5*;
      штативы металлические для пробирок диаметром 16 мм;
     пробирки бактериологические стеклянные по ГОСТ 1770—74-
     пипетки градуированные исполнений I, 2, 4, 5. 6 вместимостью
 I, 2, 5 и 10 см» 2 го класса точности по ГОСТ 20292—74-
     палочки стеклянные;
     пробки ватно-марлевые;
     натрий хлористый по ГОСТ 4 2 3 3 -7 7 , ч.д.а, раствор с массо­
вой долей 0,85%;
     магний лимоннокислый, ч.д.а.;
     калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198—75
ч.д.а.;                                                            ’
     магний сернокислый, ч.д.а.;
    парафин по ГОСТ 23683—79;
     /.-аспарагин;
    глицерин по ГОСТ 6259—75;
    малахитовая зелень, раствор с массовой долей 2%;
    спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962 .-67 с массо­
вой долей 96 и 70%;