ГОСТ Р 53046-2008

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

                                       ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ




                                                 НАЦИОНАЛЬНЫЙ
                                                                                    ГОСТР
                                                    СТАНДАРТ
                                                  РОССИЙСКОЙ                        53046   —



                                                   ФЕДЕРАЦИИ                        2008




                                       ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

                               Методы определения ф ерментативной активности
                                                целлю лазы



                                                   Издание официальное




                          й
                          со
                          §
                          <N
                          2
                          <*>
                          ш




                                                          О т*ид1тш Ф ерм
                                                                МО*




проектно сметные работы

ГОСТ Р 53046— 2008

                                       Предисловие

     Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от
27 декабря 2002 г. No 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных
стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0 —2004 «Стандартизация в Российской Федерации.
Основные положения»

     Сведения о стандарте

     1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным учреждением «Всероссийский государственный
Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») и
Научно-техническим центром «Лекарства и биотехнология» (НТЦ «Лекбиотех»)

     2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 «Охрана жизни и здоровья живот­
ных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов»

     3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому
регулированию и метрологии от 16 декабря 2008 г. No 4 15-ст

    4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ



     Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом
информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежеме­
сячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра
(замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано
в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответству­
ющая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего
пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и
метрологии в сети Интернет




                                                                      © Стандартинформ. 2009

     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас­
пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническо­
му регулированию и метрологии

ГОСТ Р 53046—2008


Н А Ц И О Н А Л Ь Н Ы Й                  С Т А Н Д А Р Т             Р О С С И Й С К О Й                 Ф Е Д Е Р А Ц И И



                                             ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

                           Методы определения ферментативной активности целлюлазы

                                                      Enzym e preparation.
                                     M ethods o l cellulasa enzym e a ctivity determ ination




                                                                                               Д ата в в е д е н и я — 2010— 01— 01



        1 Область применения

     Настоящий стандарт устанавливает методы определения ферментативной активности целлюла­
зы ферментных препаратов с использованием двух субстратов: хроматографической бумаги и натрие­
вой соли карбоксиметилцеллюлозы.
     Методы, установленные в настоящем стандарте, могут быть также использованы для определе­
ния ферментативной активности целлюлазы ферментсодержащих смесей, в т.ч. кормовых смесей и
кормов.
      Примеч ани я
      1 А ктивность целлю лазы (цел л ю л ол итическую активность) природны х об ъ ектов об еспечивает ком плекс,
содерж ащ ий. 8 основном, три типа ф ерм ентов: эндо-1,4-р-глю каназы , экзо-1.4-})-глюканазы и р-глю козид азы .
      2 С истем ны е названия ф ерм ентов:
      - эндо-1.4-|)-глю кан-4-глю каногидролазы (К Ф 3.2.1.4) катализирую т расщ епление целлю лозы с о б разова ни ­
ем крупны х ф рагментов.
      - экзо-1.4-р-глю канцеллобиогидролазы (КФ 3.2.1.91) отщ епл яю т целлобиозу о т нередуцирую щ его конца
молекул целлю лозы и их ф рагментов;
      - экзо-1.4-р-глю кзн-4-глю когидролазы (КФ 3 .2.1.74) отщ епляю т гл ю козу о т н ередуцирую щ его конца цепей.
      -р -гл ю кози д гл ю коги д рол азы (КФ 3.2 .1.2 1). или р -гто ко зи д а зы (цел л обиазы ) катализирую т гидролиз целло-
биозы .


        2 Нормативные ссы лки

    В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
    ГОСТ 61—75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
    ГОСТ 199— 78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
    ГОСТ 1770—74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки.
Общие технические условия
    ГОСТ 4206— 75 Реактивы. Калий железосинеродистый. Технические условия
    ГОСТ 4328— 77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
    ГОСТ 5845— 79 Реактивы. Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия
    ГОСТ 6038— 79 Реактивы. D-глюкоэа. Технические условия
    ГОСТ 6709— 72 Вода дистиллированная. Технические условия
    ГОСТ 9147—80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
    ГОСТ 13867—68 Продукты химические. Обозначения чистоты
    ГОСТ 20264.0—74 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб
    ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования


И зд ан и е о ф и ц и а л ь н о е

                                                                                                                                  1

ГОСТ Р 53046— 2008

     ГОСТ 25336— 82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры
и размеры
     ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1:1981) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.
Часть 1. Общие требования
      П р и м е ч а н и е — При пользовании настоящ им стандартом ц е л есоо бра зно п роверить д ействие ссы л о ч­
ных стандартов в инф орм ационной систем е общ его пользования — на оф ициальном сайте Ф едерального
агентства по техническом у регулированию и м етрологии в сети И нтернет или по е ж егодно издаваем ом у и нф орм а­
ционном у указателю «Н ациональны е стандарты », которы й опубликован по состоянию на 1 января текущ его года, и
по соответствую щ им еж ем есячно издаваемы м инф орм ационны м указателям , опубликованны м в текущ ем году.
Если ссы лочны й стандарт зам енен (изм енен), то при пол ьзовании настоящ им стандартом следует руководство­
ваться заменяю щ им (и зм ененны м ) стандартом . Если ссы лочны й стандарт отменен без замены , то полож ение, в
котором д ана ссылка на него, прим еняется в ч асти, не затрагиваю щ ей эту ссы лку.


        2 Термины и определения

        В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
        3.1 гидролиз: Расщепление исходного соединения на два более простых в присутствии молекул
воды.
     3.2 ферментативный гидролиз: Гидролиз высокомолекулярных соединений под воздействием
катализаторов белковой природы — гидролитических ферментов (гидролаз. класс 3).
     3.3 системные названия ферментов: Названия, указывающие природу химической реакции,
катализируемой данным ферментом, в соответствии с современной классификацией (КФ). принятой
Международной комиссией по ферментам.
     3.4 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействует данный фермент.
     3.5 целлюлоза: Высокомолекулярное соединение, полимер глюкозы.
     3.6 целлюлолитический комплекс ферментов: Комплекс гидролитических ферментов, рас­
щепляющий целлюлозу до конечного продукта — глюкозы.

      4 Метод определения ферментативной активности целлюлазы
      с использованием субстрата хроматограф ической бумаги

      4.1 Характеристика метода
      4.1.1 Метод основан на количественном определении восстанавливающих сахаров, образующих­
ся в результате гидролиза целлюлозы хроматографической бумаги под действием ферментов целлю-
лолитического комплекса.
      Метод используется при возникновении разногласий в качестве арбитражного.
      4.1.2 За единицу целлюлолитической активности (1 ед. ЦлА) принято количество ферментов,
которое катализирует гидролиз целлюлозы хроматографической бумаги с образованием 1 мкмоля вос­
станавливающих сахаров (в пересчете на глюкозу) за 1 ч при температуре 50 °С и pH 4.7.
      4.1.3 Содержание восстанавливающих сахаров, образующихся в результате ферментативной
реакции, определяют колориметрическим методом с использованием реактива динитросалициловой
кислоты или калияжелезосинеродистого(красной кровяной соли, калия феррицианида. калия гексацио-
ноферрата) и рассчитывают по градуировочному графику, построенному для глюкозы. Диапазон изме­
рений контролируемого показателя 0.5 — 25.0 ед. ЦлА.
      4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
      4.2.1       Для определения ферментативной активности целлюлазы используют следующие средства
измерений и оборудование:
      - фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр (СФ) любого типа, которые обеспечивают
измерения при длине волны 540 нм и погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1 %
(не более 0.01 D (ед. ОП));
      - pH-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 pH. пределом допускаемой погреш­
ности в эксплуатации! 0.1 ед. pH:
      - магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин-1;
      - ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры i 1 вС:
      - лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее
7000 мин-1;
2