ГОСТ 27777-88

Цена 3 коп. 53 7—88/509

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР

СПЕРМА БЫКОВ ЗАМОРОЖЕННАЯ

МЕТОДЫ БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГОСТ 27777—88
(СТ СЭВ 5961—87)

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ.
Москва

УДК 619:611—013,11.001.4:006.354 Группа P39
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ET

СПЕРМА БЫКОВ ЗАМОРОЖЕННАЯ

Методы бнологических исследований гост
Frozen sperm of bulls. 2777788
Methods of biological tests (CT СЭВ 5961-87)

OKCTY 9809

Срок действия < 01.07.89

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на замороженную спер-
му быков и устанавливает методы определения подвижности спер-
миев, количество спермиев с прямолинейным поступательным
движением и выживаемость спермиев в замороженной сперме бы-
ков после ее оттаивания.

1. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМИЕВ

1.1. Сущность метода заключается в визуальном определения
с помощью микроскопа в раздавленной капле спермы количест-
венного отношения спермиев с прямолинейным поступательным
движением к их общему числу

1.2. Аппаратура, матерналы и реактивы

Микроскоп бнологический.

Термостат с водяной рубашкой, обеспечивающий полдержание
температуры спермнев (3941)°C.

Баня водяная, обеспечивающая температуру (39-Е1)°С.

Столик электрообогревательный к мнкроскопу с постоянной
температурой (39-=1) °С.

Kopumanr.

Пинцет анатомический по ГОСТ 21241—77.

Ножницы по ГОСТ 21239—77,

Стекла предметные по ГОСТ 9284—75.

Стекла покровные по ГОСТ 6672—75,

Пипетки пастеровские.

Издание официальное Перепечатка воспрещена
© Издательство стандартов, 1988

С. 2 ГОСТ 27777—88

Пипетки мерные вместимостью 5 см? 2-го класса точности по
ГОСТ 20292—74.

Пробирки вместимостью 2 смз по ГОСТ 25336—82.

Пробки резиновые для пробирок.

Салфетки марлевые стерильные.

Натрий лимоннокислый раствор с массовой долей 2,9%.

Натрий хлористый раствор с массовой долей 3%.

Примечание. Допускается использовать зппаратуру, мерную посуду
BAB другие мерные средства измерения, имеющие такие же или лучшие метро-
логические характеристики,

1.3. Подготовка к исследованию

1.3.1. От каждой серии замороженной спермы, расфасованной
в соломинки, облицованные или необлицованные гранулы, отби-
рают из жндкого азота по две дозы H помещают в отдельный со-
суд Дьюара,

1.3.2. В чистую слерильную пробирку мерной пипеткой вносят
0,5 смз раствора хлористого натрия с массовой долей 3% (про-
бирка № 1, а в другую пробирку — 0,5 смз раствора лимоннокис-
лого натрия с массовой долей 2,9% (пробирка № 2). Затем про-
бирки закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при
температуре (39:1) °С.

1.3.3. Соломинки Han облицованные гранулы со спермой с по-
мощью охлажденного корнцанга, а необлицованные гранулы с
помощью охлажденного анатомического пинцета выннмают из
сосуда Дьюара. Соломинки нли облицованные гранулы погружают
в водяную баню при температуре воды (39+1)°C на 10 с, а затем
вынимают, протирают насухо стерильной салфеткой. Ножница-
ми отрезают ‘оба конца двух соломинок или один конец от каж-
дой из двух облицованных гранул.

Одну дозу спермы из соломинки, облицованной гранулы или
необлицованной гранулы помещают в пробирку № |, вторую
дозу — в пробирку № 2.

1.3.4. Объем содержимого пробирок № | и 2 доводят до 1 смз
соответственно раствором хлористого натрия с массовой долей
3% и раствором лимоннокислого натрия с массовой долей 2,9%,
а затем пробирки закрывают резиновыми пробками и перемеши-
вают. Пробирку № 2 помещают в термостат при температуре
(39:=1) °С.

1.4. Проведение исследования

1.4.1. На электрообогревательный столнк мнкроскопа помеща-
ют предметное стекло и после его нагрева до (39-=1)°С стериль-
ной пастеровской пипеткой из пробирки № 2 наносят небольшую
каплю оттаянной спермы н покрывают стеклами. Устанавливают
увеличение, дающее возможность добиться четкого изображения,
и. просматривая весь препарат, выбирают участок с небольшим
движением спермиев. Определяют визуально в трех полях зрения

ГОСТ 27777—88 С, 3

соотношение спермиев с прямолинейным поступательным движе-
нием (ППД) к общему количеству спермнев, включая и непод-
вижных спермиев, а также спермнев, имеющих манежное H коле-
бательное движение.

1.5. Обработка результатов

Результаты исследований оценивают в процентах или баллах
{| балл соответствует 10% спермиев с прямолинейным поступа-
тельным движением).

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА СПЕРМИЕВ
С ПРЯМОЛИНЕЙНЫМ ПОСТУПАТЕЛЬНЫМ ДВИЖЕНИЕМ

2.1. Сущность метода

Метод заключается в определении общего количества спер-
MHEB в дозе с учетом их подвижности.

2.2. Аппаратура, матерналы и реактивы

Для проведения исследования применяют аппаратуру, мате-
риалы и реактивы, указанные в и. 1.2, а также:

счетную камеру клеток крови глубиной 0,1 мм и 1/250 ммз;

покровные стекла к счетной камере клеток крови.

2.3. Подготовка к исследованию

Подготовка к исследованию —по п. 1.3 со следующими допол-
нениями.

2.3.1. Подготовленную сперму в пробирке № 1 тщательно пе-
ремешивают, мерной пипеткой отбирают 0,1 см? и переносят в
отдельную градунрованную пробирку. Объем содержимого про-
бирки доводят до 2 смз раствором хлористого натрия с массовой
долей 3%.

2.3.2. Счетную камеру клеток крови предварительно моют и
насухо вытирают марлевой салфеткой, покрывают покровным
стеклом и притнрают его до появления радужных колец.

2.4. Проведение исследования

24.1, Содержимое градунрованной пробирки, подготовленное
по п. 2.3.1, тщательно перемешивают и вносят пастеровской пи-
петкой каплю под покровное стекло счетной камеры.

2.4.2. Счетную камеру помещают на предметный столик под
объектив тах, чтобы в поле зрения помещался один большой
квадрат сетки при увеличении 200%, Спермии подсчитывают в 5
болыших квадратах (80 малых) по диагонали сетки. Считают го-
ловки спермиев внутри больших квадратов, а также на левых н
верхних линиях этих квадратов. Из каждого разбавления приго-
тавливают два препарата и средний результат двух подсчетов
является основой для вычисления концентрации спермиев в дозе.
Количество спермиев в | дозе (Кс) равняется их числу, подсчи-
танному в 5 больших квадратах,

Определяют подвижность спермиев по разд. 1.