ГОСТ Р ИСО 29701-2015

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО.

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ГОСТР ИСО
СТАНДАРТ 29701—

РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ 2015

НАНОТЕХНОЛОГИИ

Наноматериалы для испытаний в тест-системах
in vitro
Метод определения содержания эндотоксинов
с использованием лизата амебоцитов Limulus
(ЛАЛ-тест)

(ISO 29701:2010, IDT)

Издание официальное

Е т

ГОСТР ИСО 29701—2015

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным учреждением «Федеральный исследователь-
ский центр «Фундаментальные основы биотехнологии» Российской академии наук» (ФИЦ Биотехно-
логии РАН) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык стандарта, указанного в
пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 441 «Нанотехнологии»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому ре-
гулированию и метрологии от 23 ноября 2015 г. № 1941-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 29701:2010 «Нанотехнологии.
Испытания эндотоксинов на образцах наноматериалов для систем in vitro. Испытание Limulus amebo-
cyte уза(е (LAL)» (ISO 29701:2010 «Nanotechnologies — Endotoxin test оп nanomaterial samples for in vitro
systems — Limulus amebocyte lysate (LAL) test»).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного между-
народного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТР 1.5—2012 (пункт 3.5)

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0—2012 (раздел 8).
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на
1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный
текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные
стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее
‘уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя
«Национальные стандарты». Соответствующая информация. уведомление итекстыразмещаются
‘также в информационной системе общего пользования — на официальном сабте Федерального
агентства по техническому регупированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. 2016

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас-
пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническо-
му регулированию и метрологии

ГОСТР ИСО 29701—2015

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАНОТЕХНОЛОГИИ

Наноматериалы для испытаний в тест-системах /n vitro.
Метод определения содержания эндотоксинов с использованием лизата амебоцитов Limulus
{ЛАЛ-тест)

Nanotechnologies. Nanomaterials for testing in assay systems in vitro. Method for determination of endotoxin using
Limulus amebocyte lysate (LAL-test)

Дата введения — 2016—07—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на наноматериалы для испытаний в тест-системах in vitro
и устанавливает метод определения содержания (количественной концентрации) эндотоксинов с ис-
пользованием лизата амебоцитов (ЛАЛ-тест). ЛАЛ-тест применим для водных суспензий или экстрак-
тов наноматериалов, пригодных для инкубирования при температуре 37 °С.

2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 коагулоген (coagulogen): Способный свертываться белок, в результате реакции которого с
эндотоксинами при проведении ЛАЛ-теста происходит увеличение вязкости испытуемого раствора и
образование плотного геля.

Примечание — Коагулоген получают из клеток крови японского мечехаоста (Tachypleus tridentatus). Koa-
гупоген состоит из 175 аминокислот, Молекулярная масса коагулогена — 19723 [7].

2.2 коагупин (соадийп): Фрагмент коагулогена, образующийся в результате протеолиза коагуло-
гена и свертывающегося фермента при проведении ЛАЛ-теста.

Примечание — Коагулин получают из клеток крови японского мечехвоста (Tachypleus tridentatus). Коа-
тулин состоит из М-концезых фрагментов пептидов (Ala 1 — Arg 18) и С-концевых фрагментов пептидов (©1747 —
Phe 175) [7].

2.3 эндотоксин (endotoxin): Компонент наружной части клеточной мембраны грамотрицательных
бактерий.

Примечание — Основным активным компонентом эндотоксинов являются липополисахариды (ЛПС).
2.4 единица эндотоксина; ES (endotoxin unit, EU): Стандартная единица активности эндотоксинов.

Примечания

1 Комитетом экспертов по стандартизации биюлогических препаратов (КЭСБП) Всемирной организации
здравоохранения (ВОЗ) в 1996 году установлено значение EA, соответствующее 0,1 Hr или 10 ЕЭ/нг эндотоксинов:
кишечной палочки (Escherichia cali) Американского национального стандарта эндотоксина (AHCS) [8].

2 Одна ЕЭ соответствует одной международной единице (МЕ} эндотоксина.

2.5 чувствительность ЛАЛ-реактива 2. (lambda. ;.): Значение концентрации эндотоксинов, заяв-
ленное изготовителем и используемое при вычислениях в гель-тромб тесте, при построении стандарт-
ной кривой в турбидиметрических и хромогенных методах, выраженное в ЕЭ/мл.

Издание официальное

ГОСТР ИСО 29701—2015

2.6 лизат амебоцитов Limulus, ЛАЛ-реактив (Limulus amebocyte lysate; LAL): Водная вытяжка
‘из клеток крови (амебоцитов) мечехвоста Limulus polyphemus (ЛАЛ-реактив) или Таспурви$ tridentatus
(ТАЛ-реактив).

2.7 метод определения содержания эндотоксинов с использованием лизата амебоцитов
Limulus; ПАЛ-тест (Limulus amebocyte lysate test; LAL test): Способ определения количественной кон-
центрации бактериальных эндотоксинов в испытуемом материале с применением ЛАЛ-реактива.

Примечание — ЛАЛ-тест имеет другое наименование «Испытание на бактериальные эндотоксины»
(БЭТ).

2.8 оптическая плотность; ОП (optical density, OD): Величина. равная десятичному логарифму
величины, обратной коэффициенту пропускания.

2.9 испытуемая проба (test sample): Водная суспензия или экстракт наноматериала, являющи-
еся объектом испытания.

3 Обозначения и сокращения

В настоящем стандарте применены следующие обозначения и сокращения:

АНСЭ (RSE) — Американский национальный стандарт эндотоксина;

BST (ВЕТ) — испытание на бактериальные эндотоксины;

BO3 (WHO) — Всемирная организация здравоохранения:

ЕЭ (EU) — единица эндотоксина;

WIA (VEC) — ингибирование или активация реакции ЛАЛ-реактива с эндотоксинами;
КСЭ (CSE) — контрольный стандарт эндотоксина;

КЭСБП (ECBS) — Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов:
ЛАЛ-реактив (LAL) — лизат амебоцитов Limulus;

ЛПС (LPS) — липополисахарид;

HCS (EF) — предметы или вещества, не содержащие эндотоксинов;

ОП (OD) — оптическая плотность.

4 Общие требования

4.1 Хранение наноматериалов

Наноматериалы, благодаря большой удельной площади поверхности, могут адсорбировать за-
грязняющие вещества, в том числе эндотоксины. До проведения испытаний наноматериалы следует
хранить в герметичных контейнерах. не содержащих эндотоксинов (далее — НСЭ), например, в сте-
рильных стеклянных контейнерах. Для проверки контейнеров на содержание эндотоксинов применяют
порошки оксидов металлов или металлоидов. например двуокись титана, диоксид кремния НСЭ.

Примечания

1 Для хранения наноматериалов не допускается применять контейнеры из полипропилена. Полипропилен
является мешающим фактором и оказывает влияние на результаты ЛАЛ-теста (см. приложение А).

2 Порошки оксидов металлов и металлоидов. не содержащие эндотожсины. получают путем термической
обработки (см. 4.2).

4.2 Контейнеры для хранения наноматериалов

Хранение наноматериалов и испытуемых проб осуществляют в герметичных контейнерах НСЭ.
Для удаления эндотоксинов контейнеры подвергают термической обработке при температуре не менее
250 °С в течение 30 мин. Допускается для хранения наноматериалов и испытуемых проб применять
стерильные контейнеры из полистирола однократного применения.

4.3 Обращение с наноматериалами

Для испытаний применяют наноматериалы НСЭ. В процессе отбора, подготовки проб и прове-
дения испытаний следует применять меры, предотвращающие загрязнение наноматериалов эндоток-
синами, содержащимися в воздухе окружающей среды. Требования к условиям проведения отбора,
подготовки проб и испытаний установлены в 6.5.

2