ГОСТ Р 57989-2017

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

                                           ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ




                                                       НАЦИОНАЛЬНЫЙ
                                                                                        ГОСТР
                                                            СТАНДАРТ
                                                          РОССИЙСКОЙ
                                                                                        57989   —



                                                          ФЕДЕРАЦИИ                     2017




                                             ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ
                                            СПЕЦИАЛИЗИРОВАННАЯ
                                   Методы выявления патогенных микроорганизмов
                                       на основе полимеразной цепной реакции


                                                       Издание официальное




                                                                  Москиа
                                                              Стэндартинформ
                                                                   2018




сертификация электрооборудования

ГОСТ Р 57989—2017


                                          Предисловие
     1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением науки «Федеральный
исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи» (ФГБУН «ФИЦ питания и био­
технологии»), Федеральным бюджетным учрежденном науки «Центральный научно-исследовательский
институт эпидемиологии» Роспотребнадзора (ФБУН «ЦНИИ Эпидемиологии» Роспотребнадзора)

     2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 036 «Продукция пищевая специализи­
рованная»

     3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому ре­
гулированию и метрологии от 24 ноября 2017 г. No 1825-ст

    4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ



     Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона
от 29 июня 2015 г. /V? 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об из­
менениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего
года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений
и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае
пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет
опубликовано в ближайшем выпуске информационного указателя «Национальные стандарты». Со­
ответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной си­
стеме общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому
регулированию и метрологии в сети Интернет (tvww.gost.ru)




                                                                       © Стандартинформ. 2018

     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас­
пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническо­
му регулированию и метрологии

ГОСТ Р 57989—2017


                                                                      Содержание

1 Область применения......................................................................................................................................... 1
2 Нормативные ссылки......................................................................................................................................... 1
3 Термины, определения и сокращения........................................................................................................... 3
4 Средства измерения, оборудование и ре а кти вы ........................................................................................ 3
  4.1 Оборудование и средства измерения..................................................................................................... 3
    4.2 Лабораторная посуда и материалы......................................................................................................... 4
    4.3 Реактивы, питательные среды, дезинфицирующие средства.............................................................5
  4.4 Тест-штаммы...............................................................................................................................................6
5 Подготовка к проведению испытаний............................................................................................................. 6
    5.1 Приготовление растворов и реактивов...................................................................................................6
    5.2 Подготовка посуды и материалов............................................................................................................. 7
  5.3 Приготовление питательных с р е д ........................................................................................................... 7
6 Отбор и подготовка проб к анализу............................................................................................................... 9
    6.1 Общие положения............................................................................................................................... 9
    6.2 Первичная обработка пищевых продуктов и подготовка их к посеву в среды обогащения........ 10
    6.3 Посев в среды обогащения...................................................................................................................... 11
    6.4 Подготовка проб на средах для первичного обогащения к ПЦР-аналиэу .................................... 12
    6.5 Подготовка штаммов бактериальных культур к ПЦР-анализу.........................................................13
  6.6 Подготовка проб нативных пищевыхпродуктов к ПЦР-анализу........................................................ 14
7 Выделение ДНК из анализируемого материала {экстракция ДНК из анализируемых проб).............14
8 Проведение П Ц Р -анализа............................................................................................................................ 15
9 Оценка жизнеспособности патогенных микроорганизмов в анализируемых пищевых продуктах . . 15
10 Учет и интерпретация результатов ............................................................................................................. 16
11 Требования безопасности.............................................................................................................................. 17
12 Требования к квалификации оператора..................................................................................................... 17
Библиография........................................................................................................................................................18

ГОСТ Р 57989—2017

                                                 Введение

      Методы выявления патогенных микроорганизмов на основе полимеразной цепной реакции
являются альтернативными бактериологическому посеву и предусматривают ускоренное определение
наличия или отсутствия ДНК и, соответственно, бактерий родов Salmonella, Shigella, Cronobac-
ter (Enterobacter sakazakii). энтерогеморрагических Escherichia coli. термофильных Campylobacter
spp. видов C.jejuni, C. coli, C. lari, Listeria monocytogenes в определенной массе (объеме) пищевого
продукта, подвергнутого инкубации в жидких селективных питательных средах. Предварительная
инкубация продуктов в питательных средах является обязательным этапом анализа, обеспечивающим
биологическое накопление возбудителей.
      При наличии эпидемиологических данныхо возможности массивного заражения пищевого продукта
искомыми возбудителями в ходе расследования вспышек пищевых отравлений и инфекций допускается
анализировать инкриминированные пробы нативных (не подвергавшихся инкубации в жидких средах
обогащения) пищевых продуктов с целью получения предварительных данных о причинном агенте
вспышки. При этом положительные результаты ПЦР-аналиэа таких проб должны подтверждаться
выделением возбудителя в культуре, а отрицательные результаты не должны интерпретироваться и не
могут служить основанием для прекращения анализа проб с инкубацией.
      Обнаружение патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах методом полимеразной цепной
реакции с гибридизационио-флуоресцентной детекцией основано на выявлении последовательностей
(фрагментов) ДНК. специфичных для геномов бактерий родов Salmonella. Shigella, Cronobacter.
Campylobacter, энтерогеморрагических Escherichia coli. Listeria monocytogenes. В основе метода лежит
амплификация нуклеотидных фрагментов-мишеней ДНК. ферментом Гэд-полимеразой в присутствии
синтетических олигонуклеотидных праймеров и дезоксирибонуклеозидтрифосфатов. Гибридизация
флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов, присутствующих в составе реакционной
смеси, с комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени сопровождается нарастанием
флуоресценции. Измерение интенсивности флуоресцентного сигнала позволяет регистрировать
накопление продуктов амплификации.
      Методы предусматривают высев определенных количеств исследуемых проб пищевых продуктов
в соответствующие неселективные и селективные питательные среды, инкубирование посевов для
накопления микроорганизмов, экстракцию ДНК из культуральной жидкости, амплификацию участка
ДНК целевых бактерий со специфичными праймерами и гибридизационно-флуоресцентную детекцию
ампликонов. осуществляемую в одном из двух вариантов, в режиме реального времени в ходе ПЦР
либо после завершения амплификации.
      При положительных результатах обнаружения патогена жизнеспособность присутствующих в
продукте искомых микроорганизмов подтверждают бактериологическим посевом с соответствующим
биохимическим и серологическим типированием или ПЦР-анализом парных проб (прошедшей и не
прошедшей культуральное обогащение) в режиме реального времени.
      Методы выявления патогенных микроорганизмов на основе полимеразной цепной реакции с
гибридизационио-флуоресцентной детекцией могут использоваться для тестирования бактериальных
культур микроорганизмов, выделенных из пищевых продуктов бактериологическими методами, с целью
подтверждения их принадлежности к ридам Salmonella, Shigella. Cronobacter. Campylobacter (видов
C. ejuni, С. coli. С. lari). Listeria (вида L. monocytogenes), энтерогеморрагическим E. coli в качестве
дополнительных к биохимическим и серологическим методам идентификации.




IV