ГОСТ Р 51600-2000

ГОСТ Р 51600-2000


                             ГО СУ ДА РСТВЕН Н Ы Й   С Т А Н Д А РТ    РОССИЙСКОЙ        Ф ЕДЕРАЦ ИИ




                                                        М ОЛОКО

                                           Методы определения наличия
                                                 антибиотиков


                                                        Издание официальное




                                                                    Н оам
                                                               0 |ч щ п 1 1 # дри
                                                                      т о




государственный сертификат

ГОСТ Р 51600-2000

                                        Предисловие

     1 РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским ин­
ститутом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ГУ ВНИИВСГЭ), Институтом питания РАМН
и Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной про­
мышленности (ГУ ВНИМИ)

     ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 1X6 «Молоко и молочные продукты»

     2 ПРИНЯ Т И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 26 апреля
2000 г. № 127-ст

     3 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

     4 ИЗДАНИЕ (февраль 2010 г.) с Изменениями № 1,2, утвержденными в феврале 2006 г., январе
200Х г. (ИУС 4 - 2006.4-2008)




                                                         © ИПК Издательство стандартов, 2000
                                                              © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техни­
ческому регулированию и метрологии
II

ГОСТ Р 51600-2000

ГОСУ Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й          СТАНДАР Г РОСС И Й С КО Й Ф ЕД Е РА Ц И И




                                              МОЛОКО

                            Методы определения наличия ашибиотиков

                                                  Milk.
                         Methods for determination of the antibiotics indication




                                                                                   Дата введения 2001—07—01


     1 Область применения

      Настоящий стандарт распространяется на натуральное коровье молоко — сырье, пастеризован­
ное. стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко (далее - молоко) и устанавли­
вает микробиологические и рецепторные методы определения наличия антибиотиков.
      Раздел I (Измененная редакция, Изм. № 1, 2).

     2 Нормативные ссылки

     В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
     ГОСТ 427- 75 Линейки измерительные металлические. Технические условия
     ГОСТ 3145—84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
     ГОСТ 9225—84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа
     ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
     ГОСТ 23454- 79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ
     ГОСТ 24065—80 Молоко. Методы определения соды
     ГОСТ 24066—80 Молоко. Метод определения аммиака
     ГОСТ 24067-80 Молоко. Метод определения перекиси водорода
     ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и
размеры
     ГОСТ 29169—91 (ИСО 64 8 -7 7 ) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
     ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.
Часть 1. Общие требования


     3 Чашечный метод с Вас. stearothermopliilus
     3.1 Сущность метола
     Метод основан на способности антибиотиков, содержащихся в молоке, диффундировать в агаро­
вую среду со спорами тест-микроба и препятствовать его росту , что приводит к образованию прозрач­
ных юн ингибицми. Наличие любого антибиотика в молоке устанавливают по диаметру зоны
ингибиции.
     3.2 Аппаратура, реактивы и материалы
     3.2.1 Аппаратура, реактивы и материалы по ГОСТ 9225 и указанные в 3.2.2—3.2.16.
     3.2.2 Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.
     3.2.3 Центрифуга частотой вращения 3000 мин ■1 и разделяющим фактором 750 м/с2.

Издание официальное

                                                                                                          I

ГОСТ Р 51600-2000

       3.2.4 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
       3.2.5 Колба коническая по ГОСТ 25336, вместимостью 250 см4.
      3.2.6 Линейка по ГОСТ 427, пределом измерения 150 мм или аппарат Микрофот5ПО-1.
       3.2.7 Пробойник диаметром 10 мм или сверло пробочное № 4.
      3.2.8 Пипетка градуированная по ГОСТ 29227, 2-го класса точности, вместимостью 25 см4.
      3.2.9 Гидролизат кормовых дрожжей.
       3.2.10 Диски со стрептомицином.
      3.2.11 Оптический стандарт мутности ОСО 42-28-29—86.
      3.2.12 ПрепаратСКИВ.
      3.2.13 Стандарт стрептомицина РСО 9347-194-00494189 -9 9 .
      3.2.14 Тест-микроб Вас. siearothermophilus ВКМВ-510, выпускаемый Институтом биохимии и
физиологии микроорганизмов РАН.
      3.2.15 Фуксин основной, спиртовой раствор концентрации 50 г/дм5.
      3.2.16 Экстракт дрожжевой.
      Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и обо­
рудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указан­
ных.
      3.3 Отбор проб
      3.3.1 Отбор проб - по ГОСТ 9225.
      3.3.2 Пробы молока до испытания допускается хранить в холодильнике при температуре
(5 ±1) *С не более 24 ч.
       3.3.3 Анализ)' подлежат пробы молока, давшие положительный результат по ГОСТ 23454 и отри­
цательный - по ГОСТ 24065, ГОСТ 24066 и ГОСТ 24067.
      3.4 Подготовка к анализу
      3.4.1 Подготовка посуды и материалов
      3.4.1.1 Всю новую посуду, предназначенную для микробиологических исследований, кипятят в
подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной доли 1 % -2 % ) в течение 15 мин. затем
ополаскивают дистиллированной водой.
       Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре <16(>±5) *С в течение 2 ч или
в автоклаве при (121 ±2) ‘С в течение (3()±1) мин с последующим подсушиванием.
       Чашки Петри, пипетки и цилиндры стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических
пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Пробирки и колбы закрывают
ватно-марлевыми пробками и обертывают бумагой. Стерильную посуду хранят в плотно закрываю­
щихся шкафах или яшиках с крышками.
      3.4.2 Приготовление питательных сред
      3.4.2.1 Для получения спор Вас. siearothermophilus ВКМВ-510 используют питательную среду
следующего состава: дрожжевой экстракт - 10.0 г, пептон - 20.0 г, глюкоза - 0,5 г. дистиллирован­
ная вода - до 1000,0 см3.
       В мерную колбу вместимостью 1000 см5 помешают все компоненты питательной среды, растворя­
ют в небольшом количестве дистиллированной воды, доводят объем раствора водой до метки и уста­
навливают pH среды по pH-метру, равный (7,1 ±0.1). Разливают раствор в колбы по 200,0 см3 и
стерилизуют его при температуре (121+2) ‘С в течение (15±1) мин.
      3.4.2.2 Для проведения анализа готовят агаровую среду следующего состава: гидролизат кормовых
дрожжей — 1.0 г, пептон — 0,4 г. хлористый натрий — 0.1 г, агар — 1,6 г, дистиллированная вода —
до 100.0 см*.
       В колбу вместимостью 200 см' вносят 100 см4 дистиллированной воды и все компоненты среды,
перемешивают до полного растворения и нагревают до кипения. Затем охлаждают до температуры
(55±5) "С, устанавливают pH среды по pH-метру, равный (7.3±0,1), и стерилизуют при температуре
(121±2) "С в течение (15+1) мин.
       3.4.2.3 Для проведения анализа допускается применять питательные среды указанного в 3.4.2.1 и
3.4.2.2 состава промышленного изготовления.
      3.4.3 11олучение спор тест-микроба
       3.4.3.1       Среду по 3.4.2.1 засевают 2—3 см3 18-20-часовой тест-культуры Вас. stearoihemiophilus
ВКМВ-510, выращенной в пробирках с этой же средой, тщательно перемешивают и помешают в
термостат температурой (55± 1) *С на 3 сут.
       После окончания инкубации из посевов делают мазки, окрашивают их спиртовым раствором
2