ГОСТ Р 50480-93

ГОСТ Р 5 0 4 8 0 -9 3

                                    го су да рствен н ы й ста н да рт ро сси й ско й ф ед ера ц и и




                                               ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
                                   МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА SALMONELLA


                                                       Издание официальное
                   БЗ 12-92/1232




                                                       ГОССТАНДАРТ РОССИИ
                                                             Мо с к в а
ажурный палантин

УДК 563.664.001.4:006.354                                            Группа Н09
      ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНД АРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ



                ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
      Метод выявления бактерий рода Salmonella                 ГОСТ P
                     F<xxl p re c lu d e .
                                                              50480 — 95
            Method (or detection of Salmonella

ОКСТУ 9109

                                                           Дата введения 01.01.94

   Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты
и устанавливает метод выявления в определенной навеске про­
дукта бактерий рода Salmonella.
                               1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

   Метод выявления бактерий рода Salmonella основан на высе­
ве определенного количества продукта в жидкую неселективную
среду, инкубировании посевов, последующем выявлении в этих
посевах бактерий, способных развиваться в жидких селективных
средах, образующих типичные колонии на агаризованных диффе­
ренциально-диагностических средах, имеющих типичные для бак­
терий рода Salmonella биохимические и серологические характе­
ристики.

                       2. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

  , Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или
по нормативно-технической документации на анализируемый про­
дукт.

                 3. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ

   Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и
реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:


Издание официальное
        ★
                                             © Издательство стандартов. 1993
Настоящий стандарт нс может быть полностью или частично воспроизведен,
      тиражирован и распространен без разрешения Госстандарта России

С. 2 ГОСТ Р 50480 -93

   весы лабораторные общего назначения с метрологическими ха­
рактеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвеши­
вания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);
   весы лабораторные общего назначения с метрологическими ха­
рактеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвеши­
вания I кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);
    микроскоп световой биологический с увеличением 900— 1000х;
   петлю бактериологическую;
   стекла предметные по ГОСТ 9284;
   стекла покровные по ГОСТ 6672;
   термостат с диапазоном рабочих температур 28—55°С, позво­
ляющий поддерживать заданную температуру с допустимой по­
грешностью ± Г С .
   спирт изобутиловый по ГОСТ 9536;
   бриллиантовый зеленый;
   желчь сухую или натуральную;
   контрольный штамп бактерий рода Salmonella, не относящихся
к тифозной группе;
   магний хлористый по ГОСТ 4209;
   мочевину по ГОСТ 6691;
   сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные саль-
монеллезные сыворотки основных групп А, В, С, Д, Е и редких
групп;
   феноловый красный.
                        4. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
    4.1. П р и г о т о в л е н и е р а с т в о р о в и р е а к т и в о в
    4.1.1. Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм*:
0,5 г бриллиантового зеленого переносят а фарфоровую ступку н
постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор пере­
ливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистил­
лированной водой до метки. Раствор хранят о закрытом сосуде из
темного стекла при комнатной температуре «е более 3 мес.
    4.1.2. Раствор фенолового красного концентрации 4 г/дм3:
0.4 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и по­
степенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор перели­
вают в мерную колбу вместимостью 100 см* и доводят дистилли­
рованной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из
темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
    4.1.3. Реактив Эрлиха: 1,0 г парадиметиламинобензальдегида
растворяют в 95 см* этилового спирта объемной концентрации
96% и прибавляют 80 см3 концентрированной соляной кислоты
 (у « 1,18-1,19 г/см3).
    4.1.4. Реактив Ковача: перемешивают 5,0 г парадиметиламино­
бензальдегида, 25 см3 концентрированной соляной кислоты и
75 см* изобутилового спирта.

ГОСТ Р 50480—93 С. Я


    4.1.5. Спиртовой раствор а-нафтола концентрации 50 г/дм3:
5,0 г «-нафтола помешают в колбу вместимостью 100 см1, раство­
ряют в этиловом спирте объемной концентрации 96% и доводят
растиор этиловым спиртом до метки. Раствор готовят непосред­
ственно перед применением.
    4.1.6. Спиртовой раствор фенолового красного концентрации
2 г/дм1: 0.2 г фенолового красного переносят в колбу вместимо­
стью 100 см3, растворяют в этиловом спирте объемной концент­
рации 50% и доводят раствор этиловым спиртом до метки.
    1.1.7. Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные
сальмонеллезные сыворотки готовят перед употреблением по про­
писи. указанной в прилагаемом к ним наставлении.
    4.2. П р и г о т о в л е н и е п и т а т е л ь н ы х с р е д
    4.2.1.     Забуференная пептонная вода: 10,0 г пептона, 5,0 г хло
ристого натрия. 9.0 г двузамещенмого фосфорно-кнслого натрия
 (Na3HPO«- 12НгО), 1.5 г одноза мешенного фосфорно кислого ка­
лия растворяют при нагревании в 1000 см3 дистиллированной во­
ды. устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он состав­
лял при температуре 25°С 7,0±0.1. Разливают по колбам в ко
личесгве, зависящем от навески анализируемого продукта (если
навеска равна 25 г. то разливают по 225 см3, то есть 1 :9 ), и сте­
рилизуют при температуре (121 ± I )°С в течение 20 мин.
    ■1.2.2. Магниевая среда: готовят путем соединения трех рас­
творов.
    Приготовление раствора I: 8,4 г пептона. 11.3 г хлористого нат­
рия. 40 см* дрожжевого экстракта, приготовленного по
ГОСТ 10444.1, 2.85 г однозамешенного фосфорно-кислого калия
растворяют при нагревании в 1780 см3 дистиллированной воды.
    Приготовление раствора 2: 71.4 г хлористого магния <MgC 12-
•6Н20 ) растворяют при нагревании в 180 см3 дистиллированной
воды.
    Раствор 3: берут 1.8 см3 раствора бриллиантового зеленого,
приготовленного но п. 4.1.1.
   Приготовленные растворы соединяют, устанавливают pH так.
чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25°С
7.2±:0,2, разливают в колбы или флаконы по 100 см* и стерили­
зуют при температуре (П 2 ± 1 )°С в течение 30 мин.
   4.2.3. Селенитовая среда: готовят нз двух растворов.
   Приготовление раствора 1: 5.0 г пептона, 7.0 г безводного дву-
замещенного фосфорно-кислого натрия. 3.0 г безводного одноза-
мешенного фосфорно-кислого натрия, 4,0 г лактозы растворяют
при нагревании в 1000 см3 дистиллированной воды, охлаждают
до 45—55°С, если необходимо, путем изменения соотношения фос­
фатных солей устанавливают pH 7,0±0.1. Среду разливают но
100 см3 в колбы или флаконы и стерилизуют текучим паром по