ГОСТ Р 50474-93

ГОСТ Р 5 0 4 7 4 -9 3

                          ГОСУДАРСТВГННЫП СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ




                                  ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
                              МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
                       КОЛИЧЕСТВА БАКТЕРИЯ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК
                                  (КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИИ)


                                       Издание официальное
       БЗ 11—92/1058




                                       ГОССТАНДАРТ РОССИИ
                                             Москва
кардиган крючком

УДК 6Ю/.664 : 543.9 : 006.354                                    Группа НО*
       ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ


                ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
     Методы выявления и определения подичее гиг
         бактерий группы кишечных палочек                  ГОСТ P
              (колиформных бактерий)
                                                          50474 — 93
                    Food products.
   Methods for detection and quantity determination
                       of col iformes
ОКСТУ 9109

                                                      Дата введения 01.01.94

   Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты
н устанавливает метод выявления в определенной навеске нишево­
го продукта колиформных бактерий и три метода определения их
количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы
посева в или на агаризоваиные селективно-диагностические среды.
   Метод определения ПВЧ колифор.чиых бактерий предназначен
для пищевых продуктов, содержащих d 1 г твердого продукта ме­
нее 150 или в 1 см3 жидкого продукта менее 15 клеток колнформ-
ных бактерий.
   Метод определения количества колиформных бактерий посевом
в агаризоваиные селективно-диагностические среды предназначен
для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта бо­
лее 350 или в 1 см3 жидкого продукта более 15 колоннеобразую-
щнх р.,:ниц (КОП) колиформных бактерий,
   Метод определения количества колиформных бактерий посевом
на     , изованные селективно-диагностические среды предназна­
чен л . пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта
более 500 или в 1 ем3 жидкого продукта более 150 КОП коли-
формзых бактерий.

                            1. СУЩНОСТЬ МЕТОДОВ

   Методы выявления и определения наиболее вероятного числа
кол ормных бактерий основаны на высеве определенного коли-
чес ид продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую
селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете по-
Издаиие ~ Ьмцнальиое
        ★
                                        © Издательство стандартов, 1993
Настоящий стандарт не может быть полностью иля частично воспроизведен,
      тиражирован и распространен без разрешения Госстандарта Россия

С. 2 ГОСТ Р 50474-93

ложительных пробирок (колб), пересеве, при необходимости, куль­
туральной жидкости на поверхность агаризованнон селективно-
диагностической среды для подтверждения по биохимическим и
культуральным признакам роста принадлежности выделенных ко­
лоний к колиформным бактериям.
   Методы определения количества колнформных бактерий посе­
вом в (на) агаризованные селективно-диагностические среды осно­
ваны на высеве определенного количества продукта или его разве­
дений в или на ав и зо ван н у ю селективно-диагностическую среду
с лактозой, инкубировании посевов, подсчете типичных колоний,
подтверждении, при необходимости, по биохимическим признакам
принадлежности выделенных колонии к колиформным бактериям.

                  2. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

   Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.

3. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

   3.1. Для проведения испытания применяют аппаратуру, мате­
риалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
   весы лабораторные общего назначения с метрологическими ха*
рактернстнкамн по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвеши­
вания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактннон);
   весы лабораторные общего назначения с метрологическими ха­
рактеристиками по ГОСТ 241СИ с наибольшим пределом взвеши­
вания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);
   микроскоп световой биологический с увеличением 900—1000<;
   петля бактериологическая;
   поплавки (трубки Дархема);
   стекла предметные по ГОСТ 9284;
   термостат с диапазоном рабочих температур 28—55°С, позво­
ляющий поддерживать заданную температуру с допустимой по­
грешностью ± Г С ;
   бриллиантовый зеленый;
   генциан вполет;
   желчь говяжья сухая или натуральная;
   метиловый фиолетовый;
   феноловый красный.
   3.2. Для проведения испытания применяют питательные среды:
   агар лактознмй с бриллиантовым зеленым и феноловым крас­
ным:
   бульон лактозпый с бриллиантовым зеленым и желчью;
   бузьон Мак-Копки;
   срс.г Кесслер;

ГОСТ Р 50474— 9$ С. 3


                 4. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

    4.1. П р и г о т о в л е н и е р а с т в о р о в
    4.1.1. Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концент­
рацией 10 г/дм3: I г бромкрезолового пурпурного переносят о фар­
форовую ступку с 19 см3 раствора гидроокиси натрия c(NaOH) =
=0,1 моль/дм3 и после растворения добавляют 80 см3 дистиллиро­
ванной воды.
    4.1.2. Раствор бриллиантового зеленого концентрацией 5 г/дм3:
0.5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и
постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор перели­
вают в мерную колбу вместимостью 100 см1 и доводят дистилли­
рованной водой до метки.
    4.1.3. Раствор генцнанвнолета или кристаллического фиолето­
вого, или метилового фиолетового концентрацией 10 г/дм3: 1 г од­
ной нз анилиновых красок переносят в фарфоровую ступку и по­
степенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор перели­
вают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистилли­
рованной водой до метки.
    4.1.4. Раствор фенолового красного концентрацией 2 г/дм3:
0,2 г фенолового краевого переносят и фарфоровую ступку и по­
степенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор перели­
вают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят дистилли­
рованной водой до метки.
    4.1.5. Растворы, приготовленные по пп. 4.1.1—4.1.4, хранят в
закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температуре
не более 3 мес.
    4.1.6. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по
 ГОСТ 10444.1.
     4.2. П р и г о т о в л е н и е п и т а т е л ь н ы х с р е д
     4.2.1.    Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым
красным: 3,0 г мясного экстракта, 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы,
5,0 г хлористого натрия, 0,5 г фосфорной целого двузамещенного
калия, 15.0 г агара добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды.
При отсутствии мясного экстракта допускается использовать вме­
сто мясного экстракта, пептона и дистиллированной воды мясо-
пептонный бульон по ГОСТ 10444.1. Смесь нагревают до полного
 растворения компонентов, охлаждают до 45—55°С, устанавливают
 pH так, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (7,0±
 ± 0,1). Среду стерилизуют в течение 20 мни при температуре
.(П 5 ± 1 )Х , затем охлаждают до 45—55°С и прибавляют 40 см3
раствора фенолового красного, приготовленного по п. 4.1.4, и 2 см3
 раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по п. 4.1.2,
тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри,
колбы или флаконы.