ГОСТ Р 50454-92

ГОСТ Р 50454-92
                                                         (ИСО 3811-79)


         ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ Р ОС С И Й С К О Й ФЕ Д Е Р АЦ ИИ




                 МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

           Обнаружение и учет предполагаемых колиформных
            бактерий и Escherichia coli (арбитражный метод)


                               Издание официальное




                                          Москва
                                      Стандартинформ
                                           2010




болеро

УДК 637.525.001.4:006.354                                                                          Группа 1119


 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                        СТАНДАРТ             РОССИЙСКОЙ                  ФЕДЕРАЦИИ

                     МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
                                                                                            ГОСТ Р
       Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий
                и Escherichia coli (арбитражный метод)                                     50454-92

Meat and meat products. Detection and enumeration of presumptive coliform bacteria     (ИСО 38 1 1 -7 9 )
              and presumptive Escherichia coli (Reference method)
OKC 67.120.10
ОКСТУ 9209

                                                                                     Дата в веления 1994—01—01

      1 Назначение и область применения
     Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и учета предполагаемых колиформных
бактерий и Escherichia coli (Е. coli) в мясе и мясных продуктах.

     2 Ссылки
     ГОСТ Р 50455—92 (ИС.О 3565—75) Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (ар­
битражный метод)
     ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

     3 Определения
     3.1 Предполагаемые колиформиые бактерии — микроорганизмы, ферментирующие лактозу с
образованием газа при 30 *С. обнаруженные при проведении анализа в соответствии с указанным
методом.
     3.2 Предполагаемые Escherichia coli — предполагаемые колиформиые бактерии, ферменти­
рующие лактозу с образованием газа при 44 "С и продуцирующие индол из триптофана при 44 “С,
обнаруженные при проведении анализа в соответствии с указанным методом.
     3.3 Подсчет предполагаемых колиформных бактерий и Escherichia coli. обнаруженных в 1 г
мяса или мясных продуктов при проведении анализа в соответствии с указанным методом.

     4 Сущность метода
     Измельчение испытуемой пробы с последующей гомогенизацией навески в стерильном разба­
вителе. Приготовление из гомогената десятикратных разведений, из которых делают посев в ряд
пробирок с жидкой селективной средой. По количеству пробирок, показывающих образование газа
после выдерживания в термостате при температуре 30 "С, определяют наиболее вероятное число
предполагаемых колиформных бактерий в 1 г продукта, используя таблицу НВЧ (см. приложение).
     Для учета предполагаемых Е. coli делают посев из положительных пробирок (т. е. пробирок,
показывающих образование газа) в пробирки с жидкой селективной средой и в пробирки с трнпто-
новой водой и выдерживают в термостате при температуре 44 ’С. По количеству пробирок, показы­
вающих образование газа в селективной среде и образование индола в триптоновой воде, определяют
наиболее вероятное число предполагаемых Е. coli. используя таблицу НВЧ (см. приложение).

Издание официальное
                                                              © Издательство стандартов, 1992
                                                               © СТАНДЧРТИНФОРМ. 2010
     Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техни­
ческому регул пропан ню и метрологии

1                                                    so

ГОСТ Р 5 0 4 5 4 -9 2


      5    Питательные среды, жидкость для разбавления и реактивы
     5.1 Основные материалы
     Для получения сопоставительных результатов рекомендуется использовать безводные компо­
ненты питательных сред одинакового качества, химические реактивы аналитического качества или
сухие готовые среды. Используемая вода должна быть дистиллированной или. по крайней мере,
эквивалентной чистоты.
     5.2 Питательные среды
     5.2.1 Лактозный бульон с желчью и бриллиантовым зеленым (селективная среда)

      Состав:
                                                               а —  среда двойной                     б —    среда одинарной
                                                                  концентрации                              концентрации
 нектон                                                              20.0 г                                  10.0 г
 лактоза                                                             20.0 г                                  10.0 г
 бычья желчь (сухая)                                                 40,0 г                                  20.0 г
 бриллиантовыйзеленый по ГОСТ Р 50455                                0,0266 г                                0.0133 г
 вода                                                                1000 см-1                               1000 см*
      П р и м е ч а н и с — Ввиду того, что готовая среда может нс всегда давать ожидаемый результат, се
качество должно быть проверено перед употреблением.
     Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанав­
ливают pH среды раствором гидроксида натрия или раствором соляной кислоты подходящей
концентрации так, чтобы после стерилизации его значение составляло (7,2±0,1) при 25 "С. Среду по
10 см3 переносят в бактериологические пробирки (16 х 160 мм — для среды одинарной концентра­
ции или 20 х 200 мм — для среды двойной концентрации), в которые помещают трубки Дархема,
или во флаконы с завинчивающимися пробками подобной вместимости. Стерилизуют среду при
температуре ( 121±1) ‘С в течение 15 мин. Над жидкостью должно быть видно не менее I см трубки
Дархема. При наличии пузырьков их удаляют, наклоняя и постукивая пробирки. Пробирки, содер­
жащие газовые пузырьки, не используют.
     5.2.2 Триптоновая вода
     Состав:
              триптон ............................... .......................................... 10,0 г;
            хлорид натрия............................................................................5,0 г;
            в о д а ............................................................................................ 1000 см3.
      Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в горячей воде. Устанавли­
вают pH среды раствором гидроксида натрия или раствором соляной кислоты подходящей концент­
рации так, чтобы после стерилизации его значение составляло (7,3±0,1) при 25 *С. Среду по 5—10 см3
переносят в бактериологические пробирки или флаконы с завинчивающимися пробками аналогич­
ной вместимости и стерилизуют при температуре (121±!) 'С в течение 15 мин.
     5.3 Жидкость для разбавления
     Состав:
            п еп то н ........................................................................................1,0 г;
            хлорид натрия...................................................................... .... 8,5 г;
            в о д а ................................................................................ ..          1000 см3.
      Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанав­
ливают pH раствором гидроксида натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации
так. чтобы после стерилизации его значение состаазяло (7,0±0.1) при 25 *С. Часть жидкости по
100—300 см3 переносят в колбы или флаконы с завинчивающимися пробками вместимостью атвое
больше объема жидкости. Остаток жидкости переносят в пробирки, маленькие колбы или маленькие
флаконы с завинчивающимися пробками так. чтобы после стерилизации каждая содержала по
9.0 см3. Стерилизуют жидкость для разбавления при температуре (121± 1) 'С в течение 15 мин.
     5.4 Индольный реактив (реактив Ковача)
     Состав:
            р-диметиламинобензальдегид............................................... 5,0 г;
            амиловый сп и р т .......................................................................25,0 см3;
                                                                81                                                                2

ГОСТ Р 5 0 4 5 4 -9 2

           соляная кислота (р20 1,18—1,19 г/см3) ................................. 25,0 см3.
     Приготовление. Альдегид растворяют в спирте при слабом нагревании на водяной бане (около
50—55 "С). Охлаждают и добавляют кислоту. Хранят при температу ре около 4 *С в сосуде из темного
стекла. Цвет реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого.

     6 Аппаратура и стеклянная посуда
     6.1 Аппаратура
     6.1.1 Механическая мясорубка лабораторного типа, стерильная, с решеткой, диаметр отверстий
которой не более 4 мм.
     6.1.2 Механический смеситель, работающий со скоростью не менее 8000 об/мин и не более
45000 об/мин, со стеклянными или металлическими смесительными стаканами разной вместимости
и устойчивыми к условиям стерилизации.
     6.1.3 Аппаратура для стерилизации стеклянной посуды, смесительных стаканов, питательных
сред и т. п.
     6.1.4 Термостат для выдерживания пробирок с посевами при температуре (30±1) ’С.
     6.1.5 Водяная баня для выдерживания пробирок с посевами при температуре (44±0,1) 'С.
     6.2 Стеклянная посуда
     Стеклянная посуда должна быть устойчивой к повторной стерилизации.
     6.2.1 Колбы и бактериологические пробирки (16 х 160 мм и 20 х 200 мм).
     Допускается использовать флаконы с завинчивающимися пробками аналогичной вместимости.
     6.2.2 Градуированные пипетки, откалиброванные для бактериологических целей, вместимос­
тью 1.0 и 10,0 см* с ценой деления соответственно 0.1 и I см* и диаметром выходного отверстия
2—3 мм.
     6.3 Стерилизация стеклянной посуды
     Стерилизуют стеклянную посуду одним из следующих способов:
     влажная стерилизация при температуре (121±1) *С не менее 20 мин;
     сухая стерилизация при температуре не менее 170 "С в течение I ч.

     7 Отбор проб
     Пробу отбирают массой не менее 200 г по ГОСТ Р 51447.
     Отобранную пробу можно хранить в лаборатории при температуре 0—5 *С не более 1 ч.

     8 Проведение анализа
     8.1 Предварительная обработка проб
     Пробу дважды пропускают через мясорубку, перемешивают и сразу приступают к анализу. При
необходимости пробу можно хранить при температуре 0—5 *С не более 1 ч.
     8.2 Навеска
     Приблизительно 10 г измельченной пробы взвешивают с точностью 0,1 г в стерильном смеси­
тельном стакане.
     8.3 Приготовление гомогената и разведений
     8.3.1 Для приготовления гомогената (исходного разведения) к навеске продукта добавляют
жидкость для разбавления в соотношении 1:9 (по массе) и гомогенизируют на смесителе не более
2.5 мин, при этом число оборотов смесителя должно составлять 15000—20000.
     8.3.2 Последующие операции (8.3.3—8.3.5) выполняют одновременно на двух параллельных
порциях гомогената (две серии разведений).
     8.3.3 Непосредственно после гомогенизации стерильной пипеткой вместимостью 1 см’ берут
1 см* гомогената и добавляют его в пробирку, содержащую 9 см* стерильной жидкости для разбав­
ления, не касаясь пипеткой поверхности раствора.
     8.3.4 Жидкости хорошо перемешивают новой стерильной пипеткой путем десятикратного
наполнения и выдувания из нее содержимого пробирки. Переносят этой же пипеткой I см* полу­
ченного раствора (разведение 10-*) в другую пробирку, содержащую 9 см* стерильной жидкости для
разбавления, не касаясь пипеткой поверхности раствора.
3                                             82