ГОСТ Р 50207-92

ГОСТ Р 50207-92
                                                                   (ИСО 3 4 9 6 -7 8 )


                 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ Р ОС С И Й С К О Й ФЕ Д Е Р АЦ ИИ




                         МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

                         Метод определения L (—)-оксипролина


                                       Издание официальное




                                                   Москва
                                               Стандарты нформ
                                                    2010




декор кружевом

УДК 637.525.001.4:006.354                                                              Группа 1119


ГОСУДАРСТВЕННЫЙ                      СТАНДАРТ           РОССИЙСКОЙ          ФЕДЕРАЦИИ


                    МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ                                    ГОСТ Р
                                                                             50207-92
                  Метод определения L (—)-окснпролнна

                          Meat and meat products.                        (ИСО 3496-78)
                Determination of L (—)-hydroxvproline content


OKC 67.120.10
ОКСТУ 9209

                                                                       Дата в веления 1994—01—01

     1 Назначение и область применения
     Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли L (—)-оксипролина в
мясе и мясных продуктах.

     2 Ссылка
     ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

     3 Определение
     Массовая доля L (—)-окснпролина в мясе и мясных продуктах — массовая доля L (—)-окси-
пролина. определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выра­
женная в процентах к массе продукта.

     4 Сущность метода
      Гидролиз навески в постоянно кипящем растворе соляной кислоты, содержащем хлорид олова
(11). Фильтрация и разбавление гидролизата. Нейтрализация гидроксидом натрия аликвотной части
разбавленного гидролизата. Фильтрация и разбавление. Окисление L (—)-оксипролнна хлорамином-Т
с последующим образованием окрашенного в красный цвет соединения />-диметиламннобензальде-
гида. Фотометрическое измерение при длине волны 558 нм.

     5 Реактивы
     Все реактивы должны быть аналитического качества. Используемая вода должна быть дистил­
лированной или эквивалентной чистоты.
     5.1 Раствор соляной кислоты, содержащий хлорид олова (II)
     Растворяют в воде 7,5 г хлорида олова (II) дигидрата (SnCU 2НгО), разбавляют до 500 см3 и
добавляют 500 см3 соляной кислоты (р,„ 1.19 г/см3).
     5.2 Соляная кислота, приблизительно 6 моль/дм' раствор
     Смешивают равные объемы соляной кислоты (р,„ 1,19 r/см3) и воды.
     5.3 Гидроксид натрия, приблизительно 10 моль/дм3 раствор
     Растворяют в воде 40 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см3.

Издание официальное
                                                                <£) Издательство стандартов. 1992
                                                                  © СТАНДАРТНЫ ФОРМ, 2010

     Настоящий стандарт нс может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техни­
ческому регулированию и метрологии
1                                                 68

ГОСТ Р 50207-92

     5.4 Гидроксид натрия, приблизительно 1 моль/дм3 раствор
     Растворяют в воде 1 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см5.
     5.5 Буферный раствор, pH 6,0
     Растворяют в воде:
     50 г лимонной кислоты монопирата (С,.Н,0, Н ,0);
     26.3 г гидроксида натрия;
     146.1 г ацетата натрия тригидрата |Na(CH.CO,) 3H,Oj.
     Разбавляют водой до 1000 см'. Смешивают этот раствор с 200 см5 воды и 300 см3 пропанола-1.
     Этот раствор устойчив в течение нескольких недель при 4 *С.
     5.6 Реактив хлорачнна-Т
     Растворяют в 10 см3 воды 1,41 г jV-хлор-р-толуодсульфамида натрия тригидрата (хлорамин-Т)
и последовательно добавляют 10 см3 пропанола-1 и 80 см3 буферного раствора.
     Этот раствор готовят непосредственно перед использованием.
     5.7 Цветной реактив
     10.0 г р-диметиламинобензальдегнда растворяют в 35 см5 60 %-ного раствора хлорной кислоты
(т/м), а затем медленно доба&тяют 65 см3 пропанола-2.
     Этот раствор готовят в день использования.
       П р и м е ч а н и е — Если необходима очистка /ьдимешламинобензальдегида (см. примечание к и. 8.5).
поступают следующим образом: готовят насыщенный раствор /т-димстиламинобензальосгида в горячем 70 $ -н о и
этаноле (V/V). Охлаждают сначала при комнатной температуре, а затем в холодильнике. Примерно через 12 ч
раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают небольшим количеством 70 % -ною этанола ( V/V). Снова
растворяют в горячем 70 %-ном этаноле ( V/V). Добавляют холодную воду и тщательно перемешивают. Повто­
ряют эту процедуру до тех пор, пока нс образуется достаточное количество молочно-белых кристаллов.
Оставляют на ночь в холодильнике. Фильтруют раствор на воронке Бюхнера, промывают 50 %-ным этанолом
( V/V) и высушивают под вакуумом в присутствии оксида фосфора (Г).
     5.8 Стандартные растворы L (—)-оксипролина
     Готовят основной раствор, растворяя в воде 50 мг 4-оксипнрродндин-а-карбоновой кислоты
(оксипролни). Добавляют одну каплю раствора соляной кислоты и разбавляют водой до 100 см3.
Этот раствор устойчив в течение 1 мес при 4 *С.
     В день использования 5 см3 основного раствора разбавляют до 500 см3 водой в мерной колбе.
Затем готовят четыре стандартных раствора, разбавляя водой 10, 20. 30 и 40 см3 этого раствора до
100 см3 и получая соответственно концентрации L (—)-оксипролина 0,5: I; 1,5 и 2 мкг/см3.

     6 Аппаратура
     Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.10.
     6.1 Механическая мясорубка лабораторного типа с решеткой, диаметр отверстий которой не
более 4 мм.
     6.2 Колба для гидролиза круглодонная или плоскодонная, вместимостью около 200 см3, с
широким горлом, оснащенная воздушным или водяным холодильником.
     6.3 Электрическое устройство для нагревания (например, калильная сетка для нагревания,
электроплитка или электрическая песчаная баня).
     6.4 Фильтры из фильтровальной бумаги диаметром 12,5 см.
     6.5 рН-метр.
     6.6 Алюминиевая или пластиковая фольга.
     6.7 Водяная баня с терморегулированием температуры в пределах (60±5) 'С.
     6.8 Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны (558±2) нм. или фото-
электроколориметр со светофильтром, имеющим максимум поглощения при длине полны
(558±2) нм.
     6.9 Кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.
     6.10 Аналитические весы.

     7 Отбор проб
     7.1 Отбирают пробу продукта не менее 200 г.
     7.2 Пробу хранят в таких условиях, чтобы предотвратить порчу и изменение состава.
                                                  69                                                    2

ГОСТ Р 50207-92

     8     Проведение анализа
     8.1 Подготовка проб к испытанию
     8.1.1 Сырое мясо и мясные продукты
     Мясо в охлажденном состоянии (чуть ниже 0 "С) острым ножом нарезают на кубики (прибли­
зительно 0.5 см3, т. е. длина стороны кубика примерно 8 мм).
     Пробу помешают в сосуд и герметично закрывают или упаковывают под вакуумом в термо­
стойкую пластиковую пленку; затем нагревают и выдерживают при температуре 70 *С в течение
30 мин; охлаждают и продолжают испытание в соответствии с требованиями п. 8.1.2.
     В процессе последующих стадий подготовки пробы и взвешивания навески необходимо обес­
печить хорошее перемешивание пробы, особенно равномерное распределение жира и жидкости.
      П р и м с ч а н и е — Тепловая обработка размягчает соединительную ткань и делает се менее устойчивой
к гомогенизации. Однако это может также привести к отделению жидкости, содержащей желатин. Присутствие
жира может также потребовать особого внимания к приготовлению гомогенной пробы для испытания.
     8.1.2 Мясо и мясные продукты, готовые к употреблению
     Пробу гомогенизируют, пропуская ее дважды через мясорубку и тщательно перемешивая.
Хранят гомогенизмрованную пробу в целиком заполненном воздухонепроницаемом закрытом сосуде
в таких условиях, чтобы предотвратить ее порчу и изменение состава. Анализ испытуемой пробы
проводят в течение 24 ч.
     8.2 Навеска
     В колбу для гидролиза взвешивают о каю 4 г испытуемой пробы с точностью 0,001 г. Навеску
берут так, чтобы ни одна частица пробы не прилипла к боковой стенке колбы.
     8.3 Гидролиз
     8.3.1 В колбу помешают несколько кусочков карбида кремния для равномерного кипения,
добавляют (100±1) см3 раствора соляной кислоты, содержащей хлористое олово (II). Колбу соеди­
няют с воздушным или водяным холодильником, нагревают до спокойного кипения на нагреватель­
ном устройстве и выдерживают в течение 16 ч (лучше оставить на ночь).
      П р и я с ч а н и с — По желанию аналитика гидролиз можно проводить последовательно в две стадии,
каждая от 7 до 8 ч в течение двух дней. Результаты данного альтернативного метода незначительно отличаются
от результатов, полученных при проведении гидролиза в одну сталию в течение 16 ч.
     8.3.2 Горячий гидролизат фильтруют через фильтровальную бумагу в мерную колбу с одной
отметкой вместимостью 200 см3. Колбу и фильтровальную бумагу промывают три раза, используя
каждый раз по 10 см3 горячего раствора соляной кислоты, промывную поду добавляют к гидролизату.
Объем доводят водой до метки и перемешивают. Определение проводят не позднее следующего дня
после пиролиза.
     8.4 Проведение цветной реакции и измерение оптической плотности
     8.4.1 В химический стакан пипеткой переносят такой объем гидролизата, чтобы после его
разбавления до 250 см3 (см. п. 8.4.2) концентрация L (—)-оксипролина была от 0,5 ло 2 мкг/см3.
     П р и м е ч а н и е — В большинстве случаев объем гидролизата от 5 до 25 см3 в зависимости от количества
соединительной ткани, содержащейся в пробе.
     8.4.2 С помощью pH-метра доводят pH до (8±0.2), добавляя по каплям сначала 10 моль/дм3
раствор гидроксида натрия, а затем I моль/дм' раствор гидроксида натрия. Содержимое стакана
фильтруют в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 250 см3. Промывают стакан и осадок
гидроксида олова на фильтровальной бумаге не менее трех раз водой порциями по 30 см3, собирая
промывную жидкость в мерную колбу. Объем доводят до метки и перемешивают.
     8.4.3 4,00 см3 этого раствора переносят в пробирку и добавляют 2.00 см3реактива хлорамипа-Т,
перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (20±1) мин.
     8.4.4 Добавляют 2.00 см3 цветного реактива, тщательно перемешивают и закрывают пробирку
алюминиевой или пластиковой фольгой.
     8.4.5 Пробирку быстро переносят в водяную баню температурой (60±5) *С и нагревают в
течение точно 20 мин.
     8.4.6 Охлаждают под струей воды в течение не менее 3 мин.
     8.4.7 Оптическую плотность измеряют при длине волны (558±2) нм в кювете на спектрофото­
метре или фотоэлектроколориметре со светофильтром.
     8.4.8 Вычитают оптическую плотность контрольного раствора и находят концентрацию
3                                                   70