ГОСТ ISO 14501-2016

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ             ГОСТ ISO 14501-2016
                              РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ




                              МОЛОКО И МОЛОКО СУХОЕ
                              Определение содержания афлатоксина
                              Очистка с помощью иммуноаффинной хроматографии
                              и определение с помощью высокоэффективной
                              жидкостной хроматографии



                              МАЛАКО I МАЛАКО СУХОЕ
                              Вызначэнне змяшчэння афлатаксшу
                              Ачыстка з дапамогай !мунаафшнай храматаграфМ
                              i вызначэнне з дапамогай высокаэфектыунай
                              вадкаснай храматаграфМ


                              (ISO 14501:2007, ЮТ)
                              (IDF 171:2007, ЮТ)



                              Издание официальное




                                                                               Госстандарт
                                                                               Минск



строительное проектирование

ГОСТ ISO 14501-2016

                                           Предисловие

    Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой
региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содру­
жество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных орга­
нов по стандартизации других государств.
    Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стан­
дартизации установлены ГОСТ 1.0—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные
положения» и ГОСТ 1.2—2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосу­
дарственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки,
принятия, обновления и отмены».
    Сведения о стандарте
    1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Бело­
русский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС)
    2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь
   3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол
№ 87-П от 20 апреля 2016 г.)
    За принятие стандарта проголосовали:
 Краткое наименование страны         Код страны                  Сокращенное наименование
   по МК(ИСО 3166) 004—97      по МК(ИСО 3166) 004—97      национального органа по стандартизации
 Армения                                 AM             Минэкономики Республики Армения
 Беларусь                                BY             Госстандарт Республики Беларусь
 Казахстан                               KZ             Госстандарт Республики Казахстан
 Кыргызстан                              KG             Кыргызстандарт
 Молдова                                 MD             Молдова-Стандарт
 Российская Федерация                    RU             Росстандарт
 Таджикистан                             TJ             Таджикстандарт
 Узбекистан                              UZ             Узстандарт
 Украина                                 UA             Минэкономразвития Украины

    4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 14501:2007|IDF 171:2007 Milk
and milk powder — Determination of aflatoxin M1 content — Clean-up by immunoaffinity chromatography
and determination by high-performance liquid chromatography (Молоко и сухое молоко. Определение со­
держания афлатоксина М-|. Очистка иммуноаффинной хроматографией и определение с помощью
высокоэффективной жидкостной хроматографии).
    Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты» техни­
ческого комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации
по стандартизации (ISO) и Международной молочной федерацией (IDF).
    Перевод с английского языка (еп).
    Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий
межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в
Национальном фонде ТИПА.
    Степень соответствия — идентичная (IDT)
   5 ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 14 октября 2016 г.
№ 79 непосредственно в качестве государственного стандарта Республики Беларусь с 1 мая 2017 г.
    6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
    Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изме­
нений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных
(государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет
на сайтах соответствующих национальных (государственных) органов по стандартизации.

                                                                                © Госстандарт, 2016

   Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве
официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

ГОСТ ISO 14501-2016

     ________ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ________

                             МОЛОКО И МОЛОКО СУХОЕ
                      Определение содержания афлатоксина Мч.
                Очистка с помощью иммуноаффинной хроматографии
      и определение с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

                              МАЛАКО I МАЛАКО СУХОЕ
                        Вызначэнне змяшчэння афлатаксшу Мч.
                   Ачыстка з дапамогай !мунаафшнай храматаграфм
         i вызначэнне з дапамогай высокаэфектыунай вадкаснай храматаграфМ

                    Milk and milk powder. Determination of aflatoxin Mi content.
                            Clean-up by immunoaffinity chromatography
                   and determination by high-performance liquid chromatography

                                                                           Дата введения — 2017-05-01

    1 Область применения
    Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания афлатоксина М 1 в молоке и
сухом молоке. Предел обнаружения составляет 0,08 мкг/кг для цельного сухого молока, т. е.,
0,008 мкг/л для восстановленного молока.
    Метод также применим для частично обезжиренного молока, обезжиренного молока, сухого ча­
стично обезжиренного молока и сухого обезжиренного молока.
    Предостережение
    1 Для метода, описанного в настоящем стандарте, требуется использование растворов
афлатоксина Mi. Афлатоксины являются канцерогенами для человека. Особое внимание
необходимо уделять отчетам Международного агентства по изучению рака [4], [5].
    2 Анализы должны выполняться в помещении при затемненном свете. Стандартные рас­
творы афлатоксина должны быть защищены от света, например, с помощью алюминиевой
фольги.
    3 Вся стеклянная посуда (пробирки, склянки, колбы, мензурки, шприцы, и др.), контакти­
рующая с водными растворами афлатоксина, должна быть вымыта перед использованием
раствором кислоты во избежание потери афлатоксина.
    Новую стеклянную посуду, которая будет контактировать с водными растворами афла­
токсина, следует замачивать перед использованием в растворе серной кислоты (2 моль/л)
в течение нескольких часов, а затем тщательно промыть дистиллированной водой для удале­
ния всех следов кислоты (контролируют, чтобы значение pH находилось в пределах от 6 до 8).
    4 Необходимо проводить обеззараживание лабораторных отходов, таких как твердые
вещества, растворы в органических растворителях, водные растворы и пролитые жидкости,
а также стеклянной посуды, контактирующей с канцерогенными материалами. Подходящие
процедуры обеззараживания разработаны и утверждены Международным агентством по изу­
чению рака [4], [5].

    2 Термины и определения
    В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
    2.1     содержание афлатоксина Mi (aflatoxin М1 content): Массовая концентрация или массовая
доля афлатоксина М-i, определенная методом, установленным в настоящем стандарте.
     П р и м е ч а н и е — Массовая концентрация афлатоксина Mi выражается в микрограммах на литр, а массо­
вая доля — в микрограммах на килограмм.




Издание официальное


                                                                                                         1

ГОСТ ISO 14501-2016

    3 Сущность метода
    Афлатоксин М1 экстрагируют, пропуская пробу для испытания через иммуноаффинную колонку,
которая содержит специфические антитела, связанные с твердым материалом субстрата.
    Когда проба проходит через колонку, антитела селективно связываются с любым присутствую­
щим афлатоксином М1 (антигеном) и образуют комплекс антитело-антиген. Все другие компоненты
основного состава пробы вымываются из колонки водой. Затем афлатоксин М1 элюируют из колонки
и элюат собирают. Количество афлатоксина Mi, присутствующего в элюате, определяют методом вы­
сокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуориметрическим детектированием.

    4 Реактивы
     Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не оговорено до­
говором иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду эквивалентной чистоты.
     4.1 Иммуноаффинная колонка
     Иммуноаффинная колонка должна содержать антитела относительно афлатоксина              Макси­
мальная емкость колонки должна быть не менее 100 нг афлатоксина М1 (что соответствует 2 мкг/л,
когда используют 50 мл пробы для испытания). Колонка должна давать выход афлатоксина М1 не ме­
нее 80 %, при применении стандартного раствора, содержащего 4 нг токсина (что соответствует
80 нг/л, когда используют 50 мл пробы для испытания). Допускается использовать любую иммуноаф­
финную колонку, удовлетворяющую вышеуказанным рабочим характеристикам. Работа колонки
должна проверяться регулярно и не менее одного раза для каждой партии колонок (см. 4.1.1 и 4.1.2).
     4.1.1 Контроль емкости
     Разбавляют водой 1,0 мл основного стандартного раствора афлатоксина М1 (4.4.2) до 50 мл. Хо­
рошо перемешивают и аккуратно наносят весь объем на иммуноаффинную колонку, соблюдая реко­
мендации по использованию колонок, предоставленные изготовителем. Моют колонку и элюируют
токсин. Определяют количество афлатоксина Mi, элюированного из колонки, методом ВЭЖХ после
приготовления подходящего разбавления окончательного элюата.
     Рассчитывают емкость для афлатоксина М^ Сравнивают результат с требованиями, указанными
в 4.1.
     4.1.2 Контроль выхода
     С помощью пипетки (5.4) разбавляют водой 0,8 мл рабочего стандартного раствора афлатоксина
М1 концентрацией 0,005 мкг/мл (4.4.3) до 10 мл. Хорошо перемешивают и аккуратно наносят весь
объем на иммуноаффинную колонку, соблюдая рекомендации по использованию колонок, предо­
ставленные изготовителем. Моют колонку и элюируют токсин. Определяют количество афлатоксина
Mi, элюированного из колонки, методом ВЭЖХ после приготовления подходящего разбавления окон­
чательного элюата.
     Рассчитывают выход для афлатоксина М^ Сравнивают результат с требованиями, указанными в 4.1.
     4.2 Ацетонитрил, степень чистоты для ВЭЖХ.
     4.2.1 Раствор ацетонитрила, 25 %
     Добавляют 250 мл ацетонитрила (4.2) к 750 мл воды и перемешивают. Можно использовать дру­
гие объемы в такой же пропорции. Раствор (элюент) перед использованием дегазируют.
     4.2.2 Раствор ацетонитрила, 10 %
     Добавляют 100 мл ацетонитрила (4.2) к 900 мл воды и перемешивают. Можно использовать дру­
гие объемы в такой же пропорции. Раствор (элюент) перед использованием дегазируют.
     4.3 Азот газообразный.
     4.4 Стандартные растворы афлатоксина Mi
     4.4.1 Градуировочный стандартный раствор афлатоксина Mi
     Готовят градуировочный стандартный раствор афлатоксина Mi путем растворения в ацетонитри­
ле (4.2) такого количества афлатоксина Mi (С17Н12О7), которое позволяет получить раствор концен­
трации 10 мкг/мл. Определяют фактическую концентрацию афлатоксина Mi путем измерения оптиче­
ской плотности при длине волны максимума поглощения раствора.
     Используют спектрофотометр (5.14) для измерения оптической плотности градуировочного стан­
дартного раствора афлатоксина Mi в диапазоне длин волн от 330 до 370 нм относительно ацетонит­
рила (4.2), применяемого в качестве образца сравнения. Измеряют оптическую плотность А при
длине волны максимума поглощения 7тах, близкой к 350 нм.




2