ГОСТ 9.085-78

1

Страница 1

Группа Т99

М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й С Т А Н Д А Р Т

Единая система зашиты от коррозии и старения
ЖИДКОСТИ СМАЗОЧ НО-ОХЛ АЖДЛЮЩИ Е
ГОСТ
Методы испытаний на бностойкостъ 9 .0 8 5 -7 8
Single corrosion and ageing protectiol system. Cooling lubricant.
Bioresistance test methods
МКС 19.040
75.100
ОКСТУ 0009

Постановлением Государственною комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. № 1699
дата введения установлена
с 01.07.79
Ограничение срока действия снят» по протоколу ЛЬ 3—93 Межгосударственною совета по стандартизации,
метрологии н сертификации (ИУС 5-6—93)

Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости
(далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий
и плесневых грибов.
(Измененная редакция, Изм. № 1).

1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

1.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ. зараженных культурами бактерий в усло
виях. оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
1.2. Отбор проб
1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.
1.2.2. Пробами явтяются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Проб должно быть не менее трех.
1.2.4. Виды бактерий
1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:
Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;
Mycobacterium phlei Lehman and Neum;
Pseudomonas aeruginosa Migyla:
Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
Staphylococcus aureus Rosenbach.
Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из
испытуемых СОЖ.
1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорга
низмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед
испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз вгод-два.
1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. № I).
1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ
9.082-77.

Издание официальное Перепечатка воспрещена
*
Издание с Изменение.» № 1. утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1—89).

28

стандартизация и сертификация

2

Страница 2

ГОСТ 9 .0 8 5 -7 8 С. 2

     1.3. Аппарату ра, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89 со следующим дополнением:
    термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) *0*;
    электроплитка с закрытой спиралью4;
    потенциометр по ГОСТ 9245—79;
    горелки газовые4;
    цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ
5949—75. внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
    чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336—82 с крышками, низкие, типа ЧБН:
    груша резиновая*;
    доска для сушки посуды;
    аппарат для встряхивания колб и пробирок;
    стандарты мутности;
    pH-метр лабораторный типа ЛПУ-01, pH-340 или другого типа с погрешностью не более 0.05 pH:
    ножницы, пинцеты, скальпели4;
    штативы лабораторные4:
    бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082—77;
    агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082—77;
    спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300—87, высшего сорта;
    кислота соляная по ГОСТ 3118—77;
    кислота серная по ГОСТ 4204—77;
    калий двухромовокислый по ГОСТ 4220—75;
    натрий углекислый по ГОСТ 83—79. безводный.
    (Измененная редакция, Изм. № 1).
     1.4. Подготовка к испытаниям
     1.4.1. Посуда и материалы — по ГОСТ 9.048—89.
     1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по
ГОСТ 9.082-77.
     1.4.3. Рецептура сред приведена в табл. 1.
                                                                                               Таблица         1
                                                                    Среда
                                     1           2              3                4         5          6
   Нлимсноплнкс реакции)»
                                               Агар                                  Чапека-    Чапека-Докса
                                   МПА      индикатор    Сорокина     Сусло-aiap     Докса с    с агарои без
                                               иый                                   агарои       сахарогы
   Калий фосфорнокислый одно-
замещенный, г                                              0,5                         0.7           0,7
   Калик фосфорнокислый дву-
замещенный, г                                              1,0                         0,3           0.3
   Магний сернокислый, г             —          —          0,2               —         0,5           0,5
   Натрий азотнокислый, г            —          —          —                 —         2.0           2,0
   Натрий сернокислый, г             —          0.5         —                —         _              —

   Калии хлористый, г                —          —           —                —        0.5             0.5
   Железо сернокислое, г             —          —          0,01              —        0,01           0.01
   Железо лимоннокислое, г           —          0,5         —                —         —              —

   Аммоний хлористый, г              —          —          0,1               —         —              —
   Спирт этиловый ректификован
ный. г                                                     5,0
   Сахароза, г                       —          —           —                —        30.0            —

   Пептон бактериологический, г      —          10.0        —                —         —            —
   Агар микробиологический, г       20,0        12.0        —               20.0      20.0      Выщелочен-
                                                                                                   НЫЙ
                                                                                                   20,0
  Мясо-пептонный бульон, см’      До 1000
  Сусло пивное, см’                  —          —           —          До 1000         _              —

  Вода дистиллированная, см*         —          1000     До 1000         —           До 1000       До 1000

     *   По документации, утвержденной н установленном порядке.
                                                    29

3

Страница 3

С. 3 ГОСТ 9 .0 8 5 -7 8

1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082—77.
1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с
помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см* водопровод
ной воды.
1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см*.
1.4.7. Приготоазенные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1—2 см5) в стериль
ную пробирку.
1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
1.5. Проведение испытаний
1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см5, содержащую 200—300 см3 среды I,
помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) ’С до тех пор. пока среда
полностью не расплавится.
Расплавленную питьевую среду охлаждают до температуры 40—50 *С и заражают суспензией
смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см5 на
100 см5 среды.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см5 в чашки Петри.
1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3
стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см3 испытуемой
СОЖ.
1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при
(30±2) *С.
1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
1.5.6. Испытания повторяют 3—4 раза.
1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.
1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 2.

Таблица 2

Балл Характеристика балла

0 При осмотре невооруженным глазом наблюдаются большие, четко выражен
ные зоны отсутствия роста микроорганизмов (зоны ингибирования) вокруг цилинд
риков, содержащих СОЖ. Диаметр зоны ингибирования 1.5—2,0 см. Полная бак-термо
стойкость
1 При осмотре невооруженным глазом замезны зоны отсутствия роста микроор
ганизмов. Диаметр зоны ингибирования 0.8—1,0 см. Удовлетворительная бактсрио-
сгойкость
II При осмотре невооруженным глазом не наблюдается зон отсутствия роста мик
роорганизмов. Небактериостойкость СОЖ

1.7. Требования безопасности — по ГОСТ 9.023—74 со следующим дополнением: необходимо
осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных
помещениях.
Количество микроорганизмов не должно превышать 5000—7000 кл/м3 воздуха.

2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ
АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРВДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ

2.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения
серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.
Микроорган и змы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке
бактерностойкостн СОЖ.
2.2. Отбор проб — по пп. 1.2.1—1.2.3.
30

4

Страница 4

ГОСТ 9 .0 8 5 -7 8 С. 4

2.2. !. Виды бактерий — культуры представителей рода Desulfovibrio.
Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других
родов — Pseudomonas. Achromobacter и др.
2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п. 1.3 со следующим дополнением:
аммоний хлористый по ГОСТ 3773—72;
натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171—76;
железо лимоннокислое, кристаллическое, ч. д. а.*;
пептон бактериологический4;
2.4. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.4.1—1.4.4.
2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры суль-
фатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.
Для выращивания культуры используют среду 3.
2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1—0,2 см3 переносят пипеткой в отдельные пробир
ки. содержащие 10 см' подопроводной воды.
2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.
Конце1гтрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см3.
2.4.4. Срок хранения суспензии — не более 1 ч.
2.5. Проведение испытаний
2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8—9 см1 в стеклянные пробирки, добав
ляют по 0,5—1 см’ суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.
2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) *С в течение
2 0 -2 4 ч.
2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого
I см3 зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 см3 предварительно расплавлен
ной и охлажденной до 40 "С — 45 “С средой 2.
2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 см3 бактериаль
ной суспензии и 10 см’ среды 2.
2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми проб
ками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2) С.
2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.
2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.
2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают
нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовлен
ной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл. 3.
Таблица 3

Бали Х арак тери сти ка балла

0 Цвет индикаторного агара нс меняется, что соответствует отсутствию роста суль-
фатрсдушфующих бактерий. Полная бакгериостойкосгь СОЖ.
1 Появляются единичные черные колонии и индикаторном агаре. Удовлетвори
тельная бактсриостойкость СОЖ.
II По всей толщине индикаторного агара образуются многочисленные черные
колонии. Нсбактсриостойкость СОЖ.

2.5.8. 2.6. (Измененная редакция, Изм. .Ne 1).
2.7. Требования безопасности — по п. 1.7.

3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

3.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ. зараженных культурами грибов в услови
ях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.
* По документации, утвержденной в установленном порядке.

31