ГОСТ 7702.2.5-93

ГОСТ 7702.2.5-93


                           М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й             С Т А Н Д А Р Т




                                  М ЯСО П Т И Ц Ы , СУБП РО ДУКТЫ
                                   И П О ЛУФ АБРИ КАТЫ П ТИ Ч ЬИ

                                     М етоды выявления и определения
                                           количества листерелл



                                                   Издание официальное




                                               МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ
                                     ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
                                                        Минск




вологодское кружево сайт

ГОСТ 7 7 0 2 .2 .5 -9 3

                                        Предисловие

     1 РАЗРАБОТАН Госстандартом России

     ВН ЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, мет­
рологии и сертификации

     2 П РИ Н Я Т Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации
21 октября 1993 г.

     За принятие проголосовали:


             Наименование государства                    Наименование национального органа
                                                                 по стандартизации

 Республика Беларусь                             Госстандарт Республики Беларусь
 Кыргызская Республика                           Кыргызстандарт
 Республика Молдова                              Молдовастандарт
 Российская Федерация                            Госстандарт России
 Республика Таджикистан                          Таджикстандарт
 Туркменистан                                    Главгосслужба «Туркменстандартлары»

     3 Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и серти­
ф икации от 02.06.94 № 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.5—93 введен в действие
непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95

     4 ВЗАМ ЕН ГОСТ 7702.2—74 в части метода выявления листерелл

     5 П ЕРЕИ ЗД А Н И Е




     Настоящ ий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и
распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разре­
ш ения Госстандарта России

                                            63                                                      II

ГОСТ 7 7 0 2 .2 .5 -9 3

                                                                                                      Группа Н19


М   Е   Ж    Г   О    С   У   Д   А   Р   С   Т   В   Е     Н   Н   Ы   Й          С Т А Н Д А Р Т



                 МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ

                          Методы выявления и определения количества листерелл

                               Poultry meat, edible offal, ready-to-cook products.
                           Methods for detection and quantity determination of Listeria

ОКСТУ 9209

                                                                                      Дата введения 1995—01—01


     Настоящ ий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной
переработки:
     мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и
шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;
     субпродукты и полуфабрикаты птичьи.
     Стандарт устанавливает методы выявления и определения количества листерелл.
     Метод выявления основан на высеве определенного количества продукта или смывов с его
поверхности и (или) их разведений в жидкую среду, инкубировании при температуре (37+1) °С в
течение (24+1) ч, в подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к листереллам по
культурально-морфологическим свойствам, по биологическим пробам, по способности листерелл
флуоресцировать при использовании люминесцирующей сыворотки.
     Метод определения количества листерелл по методу наиболее вероятного числа (НВЧ) пред­
назначен для проб, содержащих в 1 г менее 150, но в 10 г более 3 или в 1 см3 менее 15, но в 100 см3
более 3 листерелл.

     1 Методы отбора проб и подготовка к исследованиям — по ГОСТ 7702.2.0

     2 Проведение исследования

      2.1 Выявление листерелл по морфологическим и культуральным свойствам
      2.1.1 И з мышц или паренхиматозных органов, костного и головного мозга готовят м азки-от­
печатки, при этом из тканей вырезают стерильными ножницами кусочки размером 1,5x1, Ох 1,5 см3
и прикладывают поверхностями срезов к предметному стеклу по три отпечатка на двух предметных
стеклах. М азки высушивают, фиксируют, окрашивают по Граму по ГОСТ 36425.
      Одновременно из исследуемого продукта готовят серии 10-кратных разведений по ГОСТ 26669
и проводят посев на мясо-пептонны й бульон с глюкозой по ГОСТ 10444.1. После инкубирования
в течение (24+1) ч при температуре (37+1) °С проводят пересев поверхностным методом по ГОСТ 26670
на питательный агар по ГОСТ 7702.2.0/ГО СТ Р 50396.0, 2.4.2, 2.4.5, инкубируют в течение (24+1) ч
при температуре (37+1) °С. И з мелких росинчатых прозрачных колоний готовят мазки с окрашиванием
по Граму.
      Для дальнейших исследований отбирают не менее 5 колоний, в мазках которых обнаружены
грамположительные короткие прямые овоидные палочки, иногда почти кокки, расположенные
одиночно или кучками. П ри этом в мазках-отпечатках обнаруживаются мелкие, часто полиморфные
палочки, расположенные одиночно в виде римской цифры «пять» или частокола.
      2.2       Биохимические свойства чистых культур испытывают на образование индола, сероводоро­
да, каталазы, на разжижение желатина.

Издание официальное

1                                                      64

ГОСТ 7 7 0 2 .2 .5 -9 3

      2.2.1 Для определения индола по стенке пробирки с суточной культурой на пептонной воде
по ГОСТ 7702.2.0/ГО СТ Р 50396.0, 2.3.2, инкубированной при температуре (37+1) °С, добавляют
5—10 капель реактива Эрлиха или реактива Ковача по ГОСТ 28560. П ри наличии индола с реактивом
Эрлиха через 5 мин в пограничном слое образуется ярко-красное кольцо, с реактивом Ковача через
10 м ин после взбалтывания поверхность окрашивается в темно-красный цвет.
      Листереллы индола не образуют.
      2.2.2 Для определения сероводорода в пробирку с суточным посевом на пептонную воду
помещают под пробку полоску фильтровальной бумаги по ГОСТ 7702.2.0/ГО СТ Р 50396.0, 2.3.21.
Культуру инкубируют в течение 24—72 ч при температуре (37+1) °С. При выделении микроорганиз­
мами сероводорода бумажка чернеет от образующегося сульфата свинца.
      Листереллы сероводорода не образуют.
      2.2.3 Для обнаружения каталазы в пробирку с культурой на мясо-пептонном бульоне, инку­
бированной в течение 12—24 ч при температуре (37+1) °С, добавляют 1 см 3 раствора перекиси
водорода массовой концентрации 100 г/дм 3. П ри наличии каталазы жидкость вспенивается.
      Листереллы образуют каталазу.
      2.2.4 Д ля определения реакц и и н а ж елатин проводят посев уколом в столбик среды по
ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.35, погружая петлю с исследуемой культурой вглубь питательной
среды до дна пробирки. Культуру инкубируют в течение 18—24 ч при температуре (37+1) °С. Вместе
с опытными пробирками в термостат ставят одну или две пробирки с незасеянным желатином для
контроля. После инкубирования пробирки, вынутые из термостата, опускают в холодную воду или
ставят в холодильник. После застудневания желатина в контрольных пробирках приступают к
просмотру опытных. Там, где произошло расщепление белков желатина, отмечается его разжижение.
При отсутствии разжижения желатина в опытных пробирках их вновь помещают в термостат и
инкубируют в течение 48—72 ч при температуре (37+1) °С с ежесуточным просмотром.
      Листереллы желатин не разжижают.
      2.3 Для подтверждения принадлежности культуры к листереллам проводят биопробу на белых
мышах или морских свинках. Белых мышей заражают внутримышечно, подкожно или интраперитоне-
ально в дозе 0,3—1 см3 в концентрации 105—106 К О Е/см 3 суточной культуры с мясо-пептонного агара,
смытой стерильным физиологическим раствором. У погибших в течение 2—5 сут животных обнаружи­
вают многочисленные очаги некроза в печени, селезенке, почках и миокарде.
      М орским свинкам на слизистую оболочку глаза вносят 1—2 капли инокулята. Через 18—24 ч
появляется отек века, гиперемия, слезотечение, через 36—72 ч веко опухает, из глаза выделяется
гнойный экссудат.
      2.4 Метод выявления листерелл при помощи люминесцирующих антител используют, во-пер­
вых, в качестве экспресс-метода для предварительного определения листерелл с последующим
подтверждением бактериологическим методом; во-вторых, для идентификации выделенной культу­
ры, что исключает в ряде случаев определение их культуральных и биохимических свойств.
      2.4.1      П ри экспресс-методе из свежего материала (мышц, паренхиматозных органов, костного,
головного мозга) готовят взвесь в физиологическом растворе в соотнош ении 1:5. После осаждения
крупных частиц взвеси из разных участков ее поверхности готовят по три мазка.
      Место нанесения материала очерчивают карандашом по стеклу с обратной стороны; подсуши­
вают мазки на воздухе, маркируют, фиксируют этиловым ректификованным спиртом с массовой
долей 96 %. П ри этом стекла с мазками, отделенные друг от друга, погружают в вертикальном
положении на 15 мин в сосуд со спиртом. Изъятые из сосуда мазки после испарения спирта
ополаскивают физиологическим фосфатно-буферным раствором по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0,
2.3.23. Допускается ополаскивать мазки физиологическим раствором или дистиллированной водой
без фосфатного буфера.
      Н а слегка подсушенный мазок наносят 1—2 капли соответствующей люминесцирующей
сыворотки, подготовленной по инструкции, прилагаемой к сывороткам.
      М азки с сывороткой помещают во влажную камеру (в чаш ки Петри с влажной фильтровальной
бумагой на дне) и выдерживают в термостате в течение (30+1) м ин при температуре (37+1) °С. Затем
сыворотку отмывают, погружая на 20 мин мазки в кювету с физиологическим фосфатно-буферным
раствором. Раствор в кювете помешивают и меняют через 10 мин. Отмытые мазки ополаскивают
дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
      Н а поверхность мазка наносят каплю глицерина, накрывают покровным стеклом, излиш ек
глицерина удаляют. Н а покровное стекло наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло или
его заменитель и проводят люминесцентную микроскопию.
                                              65                                                  2