ГОСТ 32635-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
                                                              (МГС)
                                 INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
                                                                (ISC)




                                                                                              ГОСТ
                                          МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
                                                    СТАНДАРТ
                                                                                              32635    —


                                                                                              2014




                                        МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ
                              ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ
                                      НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА
                                                Микроядерный тест
                                         на клетках млекопитающих in vitro


                                                         Издание оф ициальное




                                                                    Москва
                                                                Стандартинформ
                                                                     2019




качество сварных соединений

ГОСТ 32635—2014


                                               Предисловие
     Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандар­
тизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения»
и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила,
рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и
отмены»

     Сведения о стандарте
     1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский на­
учно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и ве­
ществ» (ФГУП «ВНИЦСМВ»); Техническим комитетом по стандартизации № 339 «Безопасность сырья,
материалов и веществ» Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии на ос­
нове собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

     2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

     3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про­
токол от 30 мая 2014 г. № 67-П)

     За принятие проголосовали:

 Краткое наименование страны    Код страны no МК           Сокращенное наименование национального органа
   по МК (ИСО 3166) 004—97     (ИСО 3166) 00 4 -9 7                      по стандартизации

 Азербайджан                           А2             Азстандарт
 Армения                               AM             Минэкономики Республики Армения
 Беларусь                              BY             Госстандарт Республики Беларусь
 Казахстан                             KZ             Госстандарт Республики Казахстан
 Киргизия                              KG             Кыргызстандарт
 Молдова                               MD             Молдова-Стандарт
 Россия                                RU             Росстандарт
 Таджикистан                           TJ             Таджикстандарт
 Туркмения                             TM             Главгосслужба «Туркменстандартлары»
 Узбекистан                            UZ             Узстандарт
 Украина                               UA             М инэкономразвития Украины


     4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 сентября
2014 г. № 1233-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32635—2014 введен в действие в качестве на­
ционального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2015 г.

     5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test № 487:2010 «Микро-
ядерный тест на клетках млекопитающих in vitro» («In Vitro Mammalian Cell Micronucleus Test», IDT).
     Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного между­
народного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

     6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

     7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Сентябрь 2019 г.

ГОСТ 32635—2014

     Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изме­
нений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных
стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответству­
ющих национальных органов по стандартизации.
     В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая ин­
формация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по
стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»




                                                  © Стандартинформ, оформление, 2015, 2019

                      В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или
                 частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального
                 издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию
                 и метрологии
                                                                                          III

ГОСТ 32635—2014


                                           Введение
      Микроядерный тест in vitro (МЯТ) — метод оценки генотоксичности по выявлению микроядер
в цитоплазме интерфазных клеток. Микроядра могут образовывать ацентрические фрагменты
хромосом (т.е. с отсутствием центромеры) или целые хромосомы, которые не способны мигриро­
вать к полюсам на стадии анафазы клеточного деления. Метод оценивает кластогенную и анеугенную
активность химических веществ [2, 3] в клетках, которые проходят клеточное деление во время или
после экспозиции исследуемого вещества. Данное руководство касается использования протоколов
без или с применением ингибитора актин полимеразы цитохолазина В (ЦХБ). Добавление ЦХБ перед
изучаемым митозом позволяет идентифицировать и проводить анализ частоты микроядер в клетках,
которые прошли один митоз, т. к. такие клетки двуядерны [4, 5]. Это руководство также дает описание
протокола без блока цитокинеза при условии наличия данных, что анализируемая клеточная популяция
митотически активна.
      В дополнение к использованию МЯТ для идентификации индуцирующих микроядра химических
веществ, цитокинезный блок, иммунохимическое мечение кинетохоров или гибридизация с
центромерными/теломерными зондами (флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)] позволяют полу­
чить информацию по механизмам хромосомных нарушений и образования микроядер [6, 7, 8, 9, 10, 11,
12, 13, 14, 15,16,17]. Процедуры мечения и гибридизации можно использовать в случаях, когда имеет­
ся повышение образования микроядер и исследователь хочет выяснить, является ли это возрастание
результатом кластогенных и/или анеугенных событий.
      Микроядра представляют собой нарушения хромосом, которые передаются дочерним клеткам,
тогда как аберрации хромосом, анализируемые в метафазных клетках, могут не передаваться.
Поскольку выявление микроядер в интерфазных клетках достаточно объективно, сотрудникам
лабораторий необходимо определить, прошла или не прошла клетка клеточное деление и как много
клеток содержат микроядра. В результате анализ препаратов проводится относительно быстро и
может быть автоматизирован. На практике это позволяет анализировать тысячи, а не сотни клеток на
экспериментальную точку, увеличивая силу метода. Наконец, поскольку микроядра могут образовывать
отставшие хромосомы, возникает возможность выявлять агенты, индуцирующие анеуплоидию, что
трудно оценивать в стандартном тесте на хромосомные аберрации (например, Руководство OECD
473 [18]). Однако МЯТ не позволяет выявлять вещества, индуцирующие полиплоидию, от веществ,
которые индуцируют кластогенность, без специальных методик, таких как FISH.
      МЯТ является методом in vitro, который проводится на культивируемых клетках человека и гры­
зунов. Тест дает полное основание исследовать хромосомные нарушения in vitro, поскольку выявляет
как анеугены, так и кластогены.
      МЯТ надежен и эффективен в различных типах клеток как в присутствии, так и отсутствии
ЦХВ. Имеется большое количество данных, показывающих приемлемость МЯТ при использовании
различных линий клеток грызунов (СНО, V79, CHL/IU и L5178Y) и лимфоцитов человека [19, 20, 21,
22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32]. Они включают Международное исследование по валидации
теста, координируемое the Soci6te Francaise de Toxicologie Gen6tique (SFTG) [19, 20, 21, 22, 23] и
доклады Международных совещаний по генетическому тестированию [5,17]. Все приемлемые данные
были также повторно оценены в weight-of-evidence ретроспективном валидационном исследовании
Европейского центра по валидизации альтернативных методов (ECVAM) Европейской комиссии (ЕС).
Метод тестирования был рекомендован как научно обоснованный ECVAM Scientific Advisory Committee
(ESAC) [33, 34, 35]. Имеются данные по использованию клеточной линии лимфобластных клеток
человека ТК6 [36], HepG2 клеток [37, 38] и первичных эмбриональных клеток сирийского хомячка [39],
хотя они не проходили валидизационное исследование.




IV