ГОСТ 29185-91

ГОСТ 29185-91


                   М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й            С Т А Н Д А Р Т




                               ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
                     МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА
                         СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИХ КЛОСТРИДИЙ



                                        Издание официальное




                                              Ст м ц иш|ф |||1И
                                                    2010




скатерть круглая

УДК 663/.664:543.9:006.354                                                                          Грушш 1109


М   Е   Ж    Г    О   С   У    Д   А   Р   С   Т   В   Е    Н   Н   Ы     Й       С Т А Н Д А Р Т


                          ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

                Методы выявления и определения количества
                    сульфитредуцирующих клостридни                                           ГОСТ
        Pood products. Methods for detection and quantity determination
                                                                                           29185-91
                       of sulphite-reducing Clostridium

МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109

                                                                                         Дата введения 01.01.93


      Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления
в определенной навеске пищевого продукта сульфитредуцирующих клостридий и два метода определе­
ния их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и метод посева в а гаризованную среду.
      Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в желе-
зосульфитсодержашие среды, инкубировании посевов при (37 ± 1) *С не более 72 ч, подтверждении
принадлежности выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим
признакам к сульфитредуцнруюшим клостридням.
      Метод определения количества сульфитредуцирующих клостридий посевом в агаризоваииую сре­
ду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г более 150 или в I см’ более 15 сульфитре­
дуцирующих клостридий.
      Метод определения НВЧ предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150. по
в 10 г более 3 или в I см' менее 15, но в 100 ем ’ более 3 сульфитредуцирующих клостридий.
      Требования настоящего стандарта являются обязательными.

                                    1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

     Отбор и подготовка проб пищевых продуктов - по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669.

                              2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

      Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со
следующими дополнениями:
      весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до
200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (дчя взвешивания реактивов);
      весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до
1 кг и пределом допускаемой погрешности ± 10 мг (для взвешивания продукта);
      микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 900-1000”:
      стекла предметные по ГОСТ 9284;
      стекла покровные по ГОСТ 6672;
      железа (111) цитрат (C*HjOTFe-5H20 );
      железа (111) аммония цитрат С,,Н5б 7реС,,Н„ 0 7 (МН,); или C,,Hs07Fe C6H?0;N H 4;
      железо треххлористое, 6-водное (FeC I S-6H,0).

    * С 1 июля 2002 г. введен и действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации действует
ГОСТ Р 53228—2008 (здесь и далее).

Издание официальное                                                                     Перепечатка воспрещена
      ★
                                                                              © Издательство стандартов, 1992
                                                                               €> СТАНДАРТИНФОРМ, 2010
                                                       98

ГОСТ 291 8 5 -9 1 С. 2

                                3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

       3.1. Приготовление растворов и реактивов
       3.1.1. Раствор сульфата железа (FeSOj) концентрацией 80 г/дм3: 8,0 г сульфата железа переносят
в мерную колбу вместимостью 100 см5, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до
метки. При использовании соли в виде кристаллогидратов проводят соответствующий пересчет на
безводную соль.
       3.1.2. Раствор аммония железа (III) сульфата Fe(NH,) (S04), • 12Н.О концентрацией 5 0 г/дм3:
5.0 г аммония железа (III) сульфата переносят в мерную каабу вместимостью 100 см ', растворяют в
дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
       3.1.3. Раствор железа (III) аммония нитрата концентрацией 50 г/дм3: 5,0 г железа (III) аммония
нитрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде.
Раствор доводят до метки.
       3.1.4. Раствор железа треххлористого (FeC l,-6H ,0) концентрацией 80 г/дм': 8,0 г железа трех­
хлористого гексагидрата переносят в каабу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной
воде. Раствор доводят до метки.
       3.1.5. Раствор сульфита натрия (натрия сернисгокислого). концентрацией 100 г/дм3: 10,0 г натрия
сернистокислого переносят в мерную каабу вместимостью 100 см ', растворяют в дистиллированной
воде. Раствор доводят до метки.
       3.1.6. Раствори, приготовленные по пп. 3.1.1—3.1.5, стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.
       3.1.7. Раствор железа (111) цитрата (C6H ,0,Fe-5H .0) концентрацией 50 г/дм3: 5,0 г железа (III)
нитрата пентагидрата переносят в мерную каабу вместимостью 100 см ', растворяют в дистиллирован­
ной воде. Раствор доводят до метки. Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по
ГОСТ 26670.
       3.1.8. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.1.9. Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.1.10. Реактив для определения каталазы готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2. Приготовление питательных сред
       3.2.1. Голодный агар готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2.2. Мясную воду готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2.3. Мясо-пептонный агар (бульон) с 0.1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом готовят по
ГОСТ 10444.1.
       3.2.4. Среду из сухого питательного агара с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2.5. Железосульфитная среда: к 1 дм' дистиллированной воды добавляют 10.0 г триптона, 0.5 г
сульфита натрия, 0.5 г железа (III) нитрата, 15,0 г агара (при приготовлении агаризованной среды)
или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Растворяют компоненты при нагревании, после
этого смесь охлаждают до (50 ± 5) *С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял
(7,1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ± 1) ’С). Среду разливают в пробирки по 10-12 см1 или колбы и
стерилизуют при (121 ± 1) ’С в течение 15 мин.
      Т р и т о н может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата
казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина, а триптон и
 I дм' воды могут быть заменены на I дм3 мясной воды, приготовленной по п. 3.2.2.
       3.2.6. Трнптозо-сульфит-циклосериновый агар готовят по ГОСТ 10444.9.
       3.2.7. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда: в 800 см3 воды вносят 10.0 г пепто­
на, 1,5 г дрожжевого экстракта или 7,5 см ’дрожжевого экстракта, приготовленного по ГОСТ 10444.1,
5.0 г уксуснокислого натрия. Отдельно 1,0 г растворимого крахмала вносят в небольшу ю порцию воды
it при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см3 и получая
крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см3 смеси, содержащей остальные
компоненты, добавляют 15,0 г агара при приготовлении плотной среды или 1,5 г агара при приготов­
лении вязкой среды и кипятят 30 мин. Доводят объем среды до 1 дм3, добавляют 1.0 г глюкозы и
0.5 г /.-цистеина гидрохлорида, охлаждают среду до (50 ± 5) *С. Устанавливают pH таким образом,
чтобы он составлял (7,1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ± I) *С). Среду разливают мерно в каабы и
стерилизуют при температуре (121 ± I) *С в течение 15 мин. Перед использованием к 100 см3 среды
добавляют 0,4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по п. 3.1.5, и 2 см’ раствора железа (III)
цитрата, приготовленного по п. 3.1.7. При необходимости среду разливают в пробирки по 10- 12 см3.
                                                  99

С. 3 ГОСТ 29185-91

      3.2.8. Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов: к I дм3 стерильного,
расплавленного н охлажденного до (80 ± I) ‘С мясо-пептонного агара, приготоаченного но п. 3.2.3.
или среды, приготовленной по п. 3.2.4. добаатяют 10 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного
по п. 3.1.5. и 1 см' раствора аммония железа (111) сульфата, приготовленного по п. 3.1.2. Среду хранят
в защищенном от света месте при (6 ± 2) *С не более 7 сут.
      Допускается заменять раствор аммония железа (III) сульфата раствором железа (111) аммония
питрата или раствором сульфата железа (FeS04*5H,0), или раствором железа (III) цитрата, при этом
также используют растворы концентрацией 50 г/дм3.
      Если использовать раствор сульфата железа, приготовленный по п. 3.1.1, то на 1 дм3 среды его
добавляют 0,4 см3.
      3.2.8.1. Среда Вильсон-Блера (вязкая), измененная для анаэробов: к 1 дм5мясо-пептонного буль­
она с 0,1 % глюкозы и дрожжевым экстрактом, приготовленным по п. 3.2.3. добавляют 1,5 г агара.
Нагревают до расплавления агара, затем охлаждают до (50 ± 5) *С. Устанавливают pH среды таким
образом, чтобы он соответствов&т (7,1 ± 0.1) (в пересчете на (25 ±1) ’С). Среду разливают мерно в
колбы и стерилизуют при (121 ±1) “С в течение 20 мин, затем к среде добавляют растворы, указанные
в п. 3.2.8. дтя определения сульфитредуцируюшей способности.
      3.2.8.2. При приготовлении среды Вильсон-Блера агарнзованной или вязкой допускается вместо
растворов, указанных в п. 3.2.7. использовать на 100 см3среды для определения сульфитредуинруюшей
способности 4 см3 раствора сульфита натрия, приготовленного по п. 3.1.5, и 1 см’ раствора железа
треххлористого, приготовленного по п. 3.1.4. В этом случае готовая среда не подлежит хранению.
      3.2.9. Среду Китт-Таропии без добавления агара, вазелинового масла готовят по ГОСТ 10444.1.

                                 4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

      4.1. Определение количества еульфи т-редуцирутощих клостриднй
      4.1.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведении по ГОСТ 26669
так, чтобы можно было определить в I г (см3) предполагаемое количество сульфитредупирующих
клостриднй или их количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный
продукт.
      4.1.2. При определении количества спор сульфитредуцируюших клостриднй навеску продукта
или его исходное разведение перед посевом или приготовлением десятикратных разведений прогре­
вают при температуре (80 ± 1) *С в течение 20 мин. Для прогрева 50 см' исходного разведения или
жидкого продукта помещают о стерильную колбу вместимостью 100 см ’ таким образом, чтобы анали­
зируемая проба не размазывалась по стенкам колбы.
      Колбу с продуктом или его исходным разведением помешают в предварительно нагретую до
(80 ± 1) *С водяную баню. При этом уровень находящейся в колбе пробы должен быть на 2—3 см
ниже, чем уровень воды в бане. Одновременно в водяную баню помешают контрольную колбу, содер­
жащую 50 см3 исходного разведения или продукта, и термометр.
      Время термообработки начинают отсчитывать с того момента, когда содержащееся в колбе исход­
ное разведение или продукт достигнут указанной температу ры. После термообработки колбу немедлен­
но охлаждают под струей водопроводной воды.
      4.1.3. При определении количества сульфитредуцируюших клостридий по методу НВЧ высевают
три последовательных навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся друг от друга по
количеству высеваемого продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) его разведение высевают
в пробирки с одной из вязких питательных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.7. или 3.2.8.1,
или 3.2.8.2. Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения к питательной
среде 1:9.
      4.1.4. При определении количества сульфитредуцируюших клостриднй методом посева в ага-
рнзованные среды по I см3 навески продукта или его разведения вносят в две чашки Петри. Посевы
заливают по ГОСТ 26670 одной из агаризованных сред, приготовленных по п. 3.2.5 или 3.2.7, или
3.2.8. или 3.2.8.2, или 3.2.6.
      После затвердения среды в чашки Петри для образования второго слоя вливают еше 10 см3
голодного агара.
      4.2. Определение присутствия (отсутствия) еульфиrpe,iyпирующих клостридий
      При определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцируюших клостриднй в определенной
                                                 100