ГОСТ 29138-91

ГОСТ 29138—91

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МУКА, ХЛЕБ И ХЛЕБОБУЛОЧНЫЕ ИЗДЕЛИЯ
ПШЕНИЧНЫЕ ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В, (ТИАМИНА)

Издание официальное

Москва

С Стандартинформ

2007

Tpynna Н39

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МУКА, ХЛЕБ И ХЛЕБОБУЛОЧНЫЕ ИЗДЕЛИЯ
ПШЕНИЧНЫЕ ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ гост

Метод определения витамина B, (тиамина) 29138—91

Wheat vitaminized flour, bread and baked products.
Method for vitamin B, (tiamin) determination

MKC 67.060
OKCTY 9109, 9209

93

Дата введения 0

Настоящий стандарт распространяется на витаминизированные пшеничные муку, хлеб и хле-
бобулочные изделия, обогащаемые смесью витаминов. и устанавливает метод определения в про-
дукте суммарного количества витамина В; (тиамина) — свободной и связанной форм.

‘Сущность метода заключается в освобождении связанных форм тиамина гидролизом, экстрак-
ционной очистке полученного гидролизата от соединений, мешающих флюорометрическому опре-
делению, количественном переводе в щелочной среде тиамина в THOXPOM, экстракции тиохрома и
‘измерении интенсивности флюоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором с по-
мошью флююрометра.

1. ОТБОР ПРОБ

1.1. Отбор проб муки — по ГОСТ 27668.

1.2. Отбор проб хлеба и хлебобулочных изделий — по ГОСТ 5667.
1.3. Отбор проб сухарей — по ГОСТ 8494.

1.4. Отбор проб бараночных изделий — по ГОСТ 7128.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Флюорометр лабораторный электронный марки ЭФ-ЗМА или медицииский марки ФМ-Ц-2
или других марок, обеспечивающий длины волн возбуждения в области 360—390 нм и флюоресцен-
ции 400—450 им.

Мельница типа ЛЗМ или аналогичного типа, обеспечивающая необходимую степень измель-
чения продукта.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025.

Нож.

Термостат, обеспечивающий создание и поддержание температуры 37 *С с погрешностью 22 °С.

Баня водяная лабораторная.

Баня глицериновая или песчаная.

Весы лабораторные общего назначения с допускаемой погрешностью взвешивания 40,01 г.

Весы лабораторные общего назначения с допускаемой погрешностью взвешивания £0,001 г.

Смеситель-качалка.

Секундомер.

Иономер.

Полотно решетное типа 1, № 11 по ТУ 23.2.2068.

Колба типа И, ТХС, исполнений 1, 2, вместимостью 250 см? по ГОСТ 25336.

Колба коническая типа Кн, исполнений 1, 2, вместимостью 100 см? по ГОСТ 25336.

Колбы мерные исполнения 2, вместимостью 100, 500 и 1000 см? по ГОСТ 1770.

Цилиндры исполнений 2 и 4, вместимостью 25 и 250 см? по ГОСТ 1770.

Воронка делительная исполнения 3, вместимостью 250 см3, из химически стойкого стекла
группы ХС, по ГОСТ 25336.

Издание официальное Перешечатка восирешена

ГОСТ 29138—91 С. 2

Воронки лабораторные диаметром 35 и 75 мм по ГОСТ 25336.

Стаканы химические типов В и Н, исполнений 1, 2, вместимостью 25 см? по ГОСТ 25336.

Палочки стеклянные по ГОСТ 21400.

Пипетки исполнений 4, 5, вместимостью 1 и 2 см? по ГОСТ 29227.

Пипетки исполнений 6. 7, вместимостью 5 и 10 смз по ГОСТ 29227.

Склянки из темного стекла с притертыми пробками вместимостью 300—1000 см?.

Тиамин хлорид по ФС 42—2413.

Амилоризин ПОХ по ОСТ 64—037.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, x. ч. или ч. д. а., раствор концентрации 0,1 моль/лм?.

Спирт изобутиловый по ГОСТ 9536, x. ч. или бутиловый по ТУ 09—664.

Tonyon по ГОСТ 5789, ч. д. а.

Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206, x. 4. или ч. д. а., раствор концентрации 0,01 г/см3;
хранят в темной склянке не бодее 2 сут.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, x. ч. или ч. д. а.. раствор концентрации 0,3 г/см?.

Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199, x. ч. или ч. д. а., насыщенный водный раствор.

Уголь активный осветляющий древесный по ГОСТ 4453.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Бараночные изделия и сухари измельчают на лабораторной мельнице так, чтобы весь раз-
молотый продукт прошел при просеивании через решетное полотно с отверстиями диаметром
1,1 мм.

Хлебные изделия разрезают на четыре части по двум взаимно перпендикулярным направлени-
ям. Затем берут две диаметрально противоположные четверти, которые разрезают ножом на неболь-
шие ломтики. Последние пропускают через мясорубку ‘или тщательно измельчают ножом.

Измельченную пробу тщательно перемешивают.

3.2. Приготовление основного стандартного раствора тиамина

Навеску тиамина хлорида массой 0,126 г* помещают в мерную колбу вместимостью 1000 смз,
доводят объем листиллированной водой до метки, тщательно перемешивают, переносят в склянку
из темного стекла с притертой пробкой и добавляют 0.5 см? толуола.

Концентрация основного стандартного раствора тиамина составит 100 мкг/см?.

Раствор хранят в холодильнике не более 2 мес.

3.3. Приготовление рабочего стандартного раствора тиамина
5 см? основного стандартного раствора тиамина помещают в химический стакан и выдер-
живают до приобретения раствором комнатной температуры.

Затем 1 см* основного стандартного раствора тиамина, отобранного пипеткой вместимостью
1 смз, переносят в мерную колбу вместимостью 500 смз, доводят объем дистиллированной водой до
метки и тщательно перемешивают.

Концентрация рабочего стандартного раствора тиамина составит 0,2 мкг/смз.

Раствор готовят в день проведения анализа.

3.4. Приготовление окислительной смеси

К 2 см? раствора железосинеродистого калия концентрации 0,01 г/см? прибавляют 10 см? рас-
твора гидроокиси натрия концентрации 0,3 г/см? и тщательно перемешивают. Смесь пригодна к
‘употреблению в течение 2—3 ч.

3.5. Очистка бутилового и изобутилового спиртов

Перед проведением анализа измеряют флюоресценцию используемых спиртов в сравнении с
дистиллированной водой. При наличии флюоресценции спирт очищают.

Для этого к | дм? спирта прибавляют навеску активного угля массой от 15 до 20 г, встряхива-
ют в течение 30 мин Ha смесителе-качалке, оставляют на сутки, затем декантируют, фильтруют и пе-
регоняют на глицериновой или песчаной бане при температуре 117 °С (бутанол) и 108 °С (изобута-
Hoa).

После очистки проверяют отсутствие флюоресценции спирта в сравнении с дистиллирован-
ной водой.

* Данная нансска тизмина хлорида соответствует 0,100 т основного биологически активного вещества
{тиамина).

С. 3 ГОСТ 29138—91

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1. Тиамин определяют в лвух параллельных навесках продукта.

42. Гидролиз

Навеску продукта массой 10,0 г* помешают в колбу вместимостью 250 см? и приливают 150 см?
раствора соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дм?.

Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин, закрыв горло колбы во-
ронкой диаметром 35 мм.

Содержимое колбы следует периодически перемешивать, особенно в первые 5 мин.

По окончании гидролиза колбу ‘охлажлают до комнатной температуры и с помощью насыщен-
ного водного раствора уксуснокислого натрия доводят рН гилролизата до 4.5+0,1 (потенциометри-
чески).

После этого к гидролизату добавляют навеску амилоризина массой 0,10 г, 2—3 капли толуола и
затем колбу помещают в термостат на 14—16 ч при температуре 37 °С. После этого гидролизат
охлаждают, доводят объем до 250 см* дистиллированной водой и фильтруют. В фильтрате определя-
ют содержание тиамина.

Если имеется необходимость прервать анализ на 1—2 дня, то перел довелением объема до
250 ca? гидролизат кипятят 5 мин, охлаждают, доводят объем до 250 см? и фильтруют. До проведе-
ния анализа фильтрат хранят в холодильнике в плотно закрытой колбе.

4.3. Очистка фильтрата от примесей, мешающих определению

В лень проведения испытания 25 смз фильтрата переносят в делительную воронку вместимос-
тью 250 смз, добавляют 25 см? бутилового или изобутилового спирта. Воронку встряхивают в тече-
ние 1 мин и после отстаивания для разделения слоев водный слой (нижний) собирают в колбу вмес-
тимостью 100 cM.

Аналогичным образом поступают с приготовленным рабочим стандартным раствором тиамина.

44. Окисление тиамина в тиохром

В три конические колбы отмеривают по 5 см? очищенного гидролизата. Затем в две из них до-
бавляют по 1,2 см? окислительной смеси, а втретью — 1,2 см? раствора гидроокиси натрия концен-
трации 0,3 г/см? (контрольный раствор к испытуемому раствору). Все колбы энергично встряхива-
ют, прибавляют по 10 см? изобутилового спирта и снова энергично встряхивают в течение | мин для
‘извлечения тиохрома. Водный и спиртовой слои разделяют отстаиванием в темном месте. Затем
спиртовой слой (верхний) сливают в кюветы для измерения интенсивности флюоресценции.

Аналогичным образом поступают с очищенным рабочим стандартным раствором тиамина.

Время с момента начала экстракции тиохрома до измерения его флюоресценции не должно
превышать 30 мин,

4.5. Измерение флюоресценции тиохрома

При работе на флюорометре марки ЭФ-ЗМА устанавливают светофильтры для B,, стрелка
прибора выводится на нулевое деление по воздуху. затем на деление 50 единии — по экстракту ти-
охрома из рабочего стандартного раствора.

При работе на флюорометре марки ФМ-Ц-2 устанавливают светофильтры, дающие длины
волн возбуждения 360 нм и флюоресценции — 420 нм.

Измерение интенсивности флюоресценции растворов осуществляют по отношению к бутило-
вому или изобутиловому спирту.

При работе на флюорометрах других марок интенсивность флюоресценции тиохрома измеря-
ют при светофильтрах, дающих диапазон длин волн возбуждения в области 360—390 нм и флюорес-
ценции — 400—450 им.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Массовую долю тиамина (X), мг на 100 г продукта. вычисляют по формуле

(A-A)-X, -V _ (4-4)
Вт ~~ Ry."

rae А — интенсивность флюоресценции испытуемого раствора, среднее из двух параллельных опре-
делений, ед. прибора;

* Масса навески должна обеспечить концентрацию тиамина я измеряемом растворе в диапазоне
0,10—0,40 мкг/см?, что при данных навеске и разведениях будет соответствовать содержанию тиамина в про-
дукте 0,.25—1,00 мг/!00 г.