ГОСТ 28805-90

ГОСТ 28805-90


                  М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й         С Т А Н Д А Р Т




                              ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
                    МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА
                   ОСМОТОЛЕРАНТНЫХ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ



                                       Издание официальное




                                             Ст мциш|ф||||и
                                                  2010




экспертиза дома

УДК 663/.664:543.9:006.354                                                                         Группа 1109



М   Е   Ж    Г   О   С   У    Д   А   Р   С   Т   В   Е   Н   Н      Ы   Й       С Т А Н Д А Р Т


                         ПРОДУКТЫ ПИЩ ЕВЫ Е

    Методы выявления и определения количества осмотолераитных
                  дрожжей и плесневых грибов                                                ГОСТ
            Food products. Methods for detection and determination
                                                                                          28805-90
                  of osmotolcrantic yeast and mould quantity

МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109

                                                                                        Дата введения 01.01.93


      Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы определе­
ния количества осмотолераитных дрожжей и плесневых грибов посевом пищевого продукта или его
разведения в агаризованную среду, определения наиболее вероятного числа (НВЧ) и выявления
присутствия (отсутствия) осмотолераитных дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске
продукта.
      Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в селек­
тивную питательную среду, культивировании посевов в оптимальных условиях, подсчете количества
или определении присутствия (отсутствия) осмотолераитных дрожжей и плесневых грибов.
      Метод определения количества посевом в агаризованную среду предназначен для пищевых про­
дуктов. содержащих в 1 г более 150 или в 1 см' более 15 осмотолераитных дрожжей и (или) содержа­
щих в 1 г более 50 или в 1 см3 более 5 осмотолераитных плесневых грибов.
      Метод НВЧ предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150. но в 10 г более
3 или в 1 см ' менее 15, но в 100 см3 более 3 осмотолераитных дрожжей it (или) содержащие в 1 г менее
50. но в 10 г более 3 или в I см ’ менее 5, но в 100 см5более 3 осмотолераитных плесневых грибов.

                                   1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

     Отбор и подготовка проб пищевых продуктов — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26669. Отбор и подготов­
ка проб сгущенных молочных консервов с сахаром - по ГОСТ 9225*.

                             2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

      Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со
следующими дополнениями:
      весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 241044* с наибольшим пределом взвешивания
до 200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (для взвешивания реактивов);
      весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до
1 кг и пределом допускаемой погрешности ± 10 мг (для взвешивания продукта);
      микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 90—900”;
      стекла предметные по ГОСТ 9284;
      стекла покровные по ГОСТ 6672;

     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53430—2009.
    ** С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации действует
ГОСТ Р 53228-2008.

Издание официальное                                                                    Перепечатка воспрещена
      ★
                                                                             © Издательство стандартов. 1991
                                                                              © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

С. 2 ГОСТ 2 8 8 0 5 -9 0

     термостат с диапазоном рабочих температур 28—55 *С, позволяющий поддерживать заданную
температуру с погрешностью ± I 'С;
     метиленовый синий;
     сахар-рафинад по ГОСТ 22*.

                                 3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

      3.1. Приготовление растворов
      3.1.1. Приготовление раствора метиленового синего концентрацией 10 г/дм’: 1 г метиленового
синего переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор
переносят в мерную колбу вместимостью 100 см ’ и доливают до метки.
      Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
      3.1.2. Растворы антибиотиков готовят по ГОСТ 10444.12.
      3.2. Приготовление питательных сред
      3.2.1. Среда жидкая: 610.0 г сахара-рафинада, 20,0 г глюкозы и 25 см’ дрожжевого экстракта
постепенно при нагревании на водяной бане добавляют к 345 см’ дистиллированной воды. После
расплавления сахаров смесь охлаждают до (50 ± 5) "С. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы
он составлял 5,8 ± 0,1 (в пересчете на (25 ± 1) ’С). Питательную среду рахтивают в колбы и (или)
пробирки и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
      3.2.2. Среда агаризованная: 15,0 г агара добавляют к 345 см’ дистиллированной воды и оставляют
на 30 мин для набухания агара.
      Затем расплавляют при нагревании и добавляют 20,0 г глюкозы, 25 см ' дрожжевого
экстракта. В полученной смеси при нагревании на водяной бане постепенно растворяют 610.0 г сахара-
рафинада.
      После расплавления сахара смесь охлаждают до (50 ± 5) *С.
      Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял 5.8±0.1 (в пересчете на (25 ± 1) ‘С).
Питательную среду разливают в колбы и сгерилизируют текучим паром в течение 30 мин.
      3.3.        Приготовление питательных сред, применяемых для испытания сгущенных молочных консер­
вов с сахаром
      3.3.1. Солодовое агаризованное сусло с сахарозой
      Приготовление сусла с сахарозой: к 500 см3 солодового сусла, приготовленного по ГОСТ 10444.1,
добавляют 420,0 г сахара-рафинада, нагревая перемешивают до полного его растворения, фильтруют,
охлаждают до (50 ± 5) *С. Устанавливают с помощью молочной кислоты pH таким образом, чтобы он
составлял 3,6 ± 0.1 (в пересчете на (25 ± 1) *С). Сусло с сахарозой разливают по 60 см’ в колбы и
стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
      Приготовление ави зо ван н о го сусла: к 500 см1 солодового сусла с pH 3.6 ± 0.1 добавляют 30,0 г
агара, нагревают, при перемешивании расплавляют агар. Среду фильтруют и разливают по 40 см’ в
колбы, затем стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
      Непосредственно перед посевом агаризованное сусло расплаатяют на водяной бане, а сусло с
сахарозой нагревают до температуры (50 ± 5) *С и две эти части смешивают.
      3.3.2. Питательные среды с антибиотиками и сахарозой: к 1 дм’ дистиллированной воды добавля­
ют 20,0 г агара и оставляют на 30 мин для набухания агара, затем добаатяют 10,0 г пептона и,
постоянно перемешивая, нагревают до полного расплавления агара, добаатяют 40.0 г мальтозы или
глюкозы и 450,0 г сахара-рафинада, перемешивают до полного растворения составных частей, при
наличии осадка фильтруют. Устанашгивают с помощью молочной кислоты pH таким образом, чтобы
он состаатял 6.5 ±0,1 (в пересчете на (25 ± 1) ’С).
      Питательную среду разливают по 100 см3 в колбы и стерилизуют текучим паром в течение
30 мин.
      Непосредственно перед использованием к среде добаатяют в соответствии с ГОСТ 10444.12
растворы антибиотиков.

                                  4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

      4.1.     Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669
так. чтобы можно было определить в 1 г (см3) предполагаемое количество осмотолераитных дрожжей

        На территории Российской Федерации с 1 июля 2011 г. будет действовать ГОСТ Р 53396—2009.
                                                   86

ГОСТ 28805-90 С. 3

и плесневых грибов или количество, указанное в нормативно-технической документации на конк­
ретный продукт.
       4.2.       При определении количества осмоталерантиых дрожжей и плесневых грибов по методу НВЧ
высевают в трехкратной повторности три последовательных навески продукта и (или) разведения
продукта, отличающиеся по количеству продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) разведе­
ние продукта высевают в колбу или пробирку с питательной средой, приготовленной no n. 3.2.1.
       Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения и питательной среды 1:9.
       4.3.11ри определении количества осмотолеранп1ых дрожжей и плесневых грибов методом посева
в агаризованные среды по 1 см ' навески продукта или его разведения вносит одновременно в две
чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 агарнзованной питательной средой, приготовленной
поп. 3.2.2.
       4.4. При определении присутствия (отсутствия) осмотолерантиых дрожжей и плесневых грибов
в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении, эту навеску или разведение
вносят в жидкую питательную среду по п. 3.2.1 (в соотзюшении 1:9) или высевают по п. 4.3 в агаризо-
ванную среду.
       При испытании сгущенных молочных консервов с сахаром навеску продукта массой (10,0 ±0.1) г
тщательно перемешивают со 100 см' охлажденной до (45 ± 2)*С агарнзованной питательной средой по
п. 3.3.1 или п. 3.3.2. Смесь рапивают в 6—7 чашек Петри.
       4.5. Посевы инкубируют в течение 7 сут при температуре (30 ± I) *С.
       4.6. Через 3 сут проводят предварительную оценку результатов инкубирования посевов, а через
7 сут - окончательную.
       Колонии осмотолерантиых дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.
       Рост осмотолерантиых дрожжей на агаризованных питательных средах сопровождается образова­
нием выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Рост
осмотолерантиых дрожжей на жидких питательных средах сопровождается появлением мути, запаха
брожения и газа.
       Рост осмотолерантиых плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением ми­
целия различной окраски.
       4.7. Для подсчета количества отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей
и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.
       4.8.11ри необходимости для разделения дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические
исследования. Для этого из культуральной жидкости или отдельных колоний готовят мазки и окраши­
вают их раствором метиленового синего. На подсушенный мазок наносят раствор метиленового синего,
приготовленного по п. 3.1.1, выдерживают 5 мин, сливают краску, высушивают на воздухе и микро-
скопируют для определения дрожжевых клеток или пиров плесневых грибов.
      Допускается проводить микробиологические исследования по ГОСТ 10444.12.
       4.9. Колбы (пробирки), в которых обнаружен рост осмотолерантиых дрожжей и (или) плесневых
грибов, считают положительными.

                                5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

      5.1. Результаты испытания оценивают на каждой пробе отдельно.
      5.2. Пересчет количества осмотолерантиых дрожжей и плесневых грибов на I г (см3) продукта
проводят по ГОСТ 10444.12.
      5.3. Наиболее вероятное число (НВЧ) осмотолерантиых дрожжей и плесневых грибов в 1 г (см3)
продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок), пользуясь таблицей, приведен­
ной в ГОСТ 30425.
      5.4. Результаты определения количества осмотолерантиых дрожжей и плесневых грибов записыва­
ют по ГОСТ 26670.
      5.5. Результаты выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантиых дрожжей и плесневых гри­
бов с указанием навески продукта записывают следующим образом:
      осмотолерантные дрожжи и (или) плесневые грибы обнаружены или не обнаружены.




                                               87