ГОСТ 28560-90

ГОСТ 28560-90


                        М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й         С Т А Н Д А Р Т




                                    ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
                                 МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДОВ
                                 PROTEUS, MORGAN ELLA, PROVIDENCIA



                                             Издание официальное




                                                   Ст мциш|ф||||и
                                                        2010




кружево крючком схемы

УДК 663/.664.001.4:006.354                                                                           руина НОУ

М   Е   Ж   Г    О   С   У    Д   А   Р   С    Т   В   Е    Н     Н   Ы   Й       С Т А Н Д А Р Т


                         ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

                     Метод выявления бактерий родов
                     Proteus, Morganelia. Providencia                                        ГОСТ
                Food products. Method for detection of bacteria
                                                                                           28560-90
                  of Proteas. Morganelia. Providencia genera

МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109

                                                                                         Дата введения 01.07.91


     Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления
бактерий родов Proteus, Morganelia, Providencia.
     Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую
селективную среду, культивировании посевов при (36 ± 1) *С в течение 48 ч, последующем пересеве
выросших культур на плотные дифференциально-диагностические среды, культивировании посевов
при (36 ± I) *С в течение 48 ч, выделении характерных колоний и подтверждении с помощью
биохимических тестов их принадлежности к бактериям родов Proteus и (или) Morganelia и (или)
Providencia или к пилам Proteus vulgaris или Proteus mirabilis.

                                   1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

     Отбор проб - по ГОСТ 26668, подготовка к испытанию - по ГОСТ 26669.

                             2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

      Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со
следующими дополнениями:
      весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 241044, с наибольшим пределом взвешивания
до 200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (для взвешивания реактивов);
      весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104. с наибольшим пределом взвешивания до
1 кг и пределом допускаемой погрешности ± 10 мг (для взвешивания продукта);
      микроскоп световой биологический или импортный с аналогичными техническими характерис­
тиками;
      термостат с диапазоном рабочих температу р от 28 до 55 *С. позволяющий поддерживать заданную
температуру с погрешностью ±1 ‘С;
      холодильник бытовой;
      стерилизатор горячим воздухом;
      адонит;
      мальтоза:
      метил бутанол (амиловый спирт);
      мочевина;

    * С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации действует
ГОСТ Р 53228-2008.

Издание официальное                                                                     Перепечатка воскрешена
      ★
                                                                              © Издательство стандартов, 1990
                                                                               © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010
                                                       77

С. 2 ГОСТ 28560-90

     нейтральный красный:
     натрия дезоксихолат;
     натрия тиосульфат (Na,S,0,,-5H,0);
     натрий аммония фосфат;
     полимиксин В сульфат во флаконах по 25 мг (250 000 ЕД и по 50 мг (500 000 ЕД);
     полимиксин М сульфат во флаконах по 500 000 ЕД;
     L - или DL-фенилаланин;
     L - или DL-орнитин;
     феноловый красный;
     желчь сухая или желчь натуральная крупного рогатого скота;
     железа (III) цитрат;
     железо хлорное (FeCI3-6H ,0 )

                               3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

     3.1. Приготовление растворов
     3.1.1. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромтимолового синего 16 г/дм': 1,6 г бромти-
молового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 см' и растворяют в этиловом спирте с
массовой долей 96 %. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.
     3.1.2. Раствор массовой концентрацией мочевины 500 г/дм': 50 г мочевины переносят в мерную
колбу вместимостью 100 см5, растворяют в дистиллированной воде, раствор доливают до метки.
     3.1.3. Щелочной раствор фенолового красного массопой концентрацией 16 г/дм5: 1,6 г фенолово­
го красного растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 в растворе гидроксида натрия массовой
концентрацией 100 г/дм3. Раствор доливают раствором гидроксида натрия до метки.
     3.1.4. Раствор хлорного железа массовой концентрацией 100 г/дм5: 16,6 г (FeC 1,6 Н ,0 ) переносят
в мерную колбу вместимостью 100 с м \ растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до
метки.
     3.1.5. Раствор гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм5: 10 г гидроксида натрия
переносят в мерную колбу вместимостью 100 см', растворяют в дистиллированной иоде. Раствор доли­
вают до метки.
     3.1.6. Раствор кристаллического фиолетового массовой концентрацией I г/дм5: 0.1 г кристалли­
ческого фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 см ’, растворяют в дистиллирован­
ной воде. Раствор доливают до метки.
     3.1.7. Раствор для среды агара-дезоксихолат-цитрат лактозного: 17,0 г натрия лимоннокислого.
1,0 г натрия тиосульфата. 2,0 г железа (ИГ) цитрата помешают в мерную колбу вместимостью 100 см5,
растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки и выдерживают на водяной бане при
(60 ± 1) “С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.
     3.1.8. Раствор дезоксихолата натрия массовой концентрацией 100 г/дм': 10 г дезоксихолата натрия
переносят в мерную колбу вместимостью 100 см5, растворяют в дистиллированной воде. Раствор долн-
пают до метки и выдерживают на водяной бане при (60 ± I) ‘С в течение I ч. Раствор хранят при
комнатной температуре не более 6 мес.
     3.1.9. Растворы полимиксин В сульфата или полимиксин М сульфата готовят непосредственно
перед использованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком вносят 5 или 10 см3стериль­
ной дистиллированной воды.
     3.1.10. Реактивы для определения индола:
      Реактив Ковача: 5.0 г п арад имет илам и нобс 11 зал ьдегида растворяют в 75 см' метил бутанола и
добавляют 25 см ’ концентрированной соляной кислоты (р = 1,18—1.19 г/см1).
      Реактив Эрлиха: 4,0 г парадиметиламннобензальдегида растворяют в 380 см5 этилового спирта с
массовой долей 96 % и добавляют 80 см5 концентрированной соляной кислоты (р = 1,18 — 1,19 г/см').
      Реактивы хранят в сосудах из темного стекла при температуре (4 ± 2) *С не более 1 мес.
     3.1.11. Вазелиновое масло готовят по ГОСТ 10444.1.
     3.1.12. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромкрезолового пурпурного 10 г/дм3: I г
бромкрезолового пурпурного переносят в мерную колбу вместимостью 100 см5 и растворяют в этило­
вом спирте с массовой долей 96 %. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.
     3.2. Пршотовление питательных сред
     3.2.1. Агар мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.
                                                 78

ГОСТ 2 8 5 6 0 -9 0 С. 3

      3.2.2. Бульон мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.
      3.2.3. Среда жидкая селективная. Основа среды: к 1 дм5 мясо-пептонного бульона по п. 3.2.2
добавляют 1.0 г маннита. 50.0 см' натуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой
желчи. 0,8 г калия фосфорнокислого двузамешенного, 2,0 см3 раствора кристаллического фиолетово­
го, приготовленного по п. 3.1.6, 2,0 см3 спиртового раствора бромтимолового синего, приготовленного
по п. 3.1.1. Устанаазивают pH таким образом, чтобы после стерилизации он состаатял (6,9 ± 0,1) при
25 'С. Стерилизуют текучим паром при 100 ’С в течение 15 мин.
      Для приготовления среды к основе добаатяют асептически 10.0 см ! раствора мочевины, приго­
товленного по п. 3.1.2, и 100 000 ЕД полимиксина В сульфата или 120 000 ЕД полимиксина М сульфата.
Среду разливают в стерильные пробирки по 5 см3. Хранят при (4 ± 2) "С не более 7 сут. Готовая среда
прозрачная, желто-бурого цвета.
       3.2.4. Агар дезоксихолат-цитратлактозный по Leifson модификация Hynes.
      Основа среды: в 1 дм 3 кипящей мясной воды, приготовленной по ГОСТ 10444.1. растворяют
5.0 г пептона, 10,0 г лактозы, 22,5 г агара, охлаждают до (45—50) *С, устанавливают pH таким
образом, чтобы при 25 “С он составлял (7,4 ± 0,1). Прибавляют 0,03 г нейтрального красного,
разливают в мерные колбы, стерилизуют при (115 ± 1) *С в течение 20 мин. Хранят при (4 ± 2) "С нс
более 7 сут.
      Допускается использовать вместо 1 дм3 мясной воды и 5.0 г пептона 1 дм3 мясо-пептонного
бульона, приготовленного по п. 3.2.2.
      Для приготовления питательной среды к расплавленной и охлажденной до 45—50 ’С основе
прибавляют из расчета на 100 см3 основы 5 см3 раствора солей, приготовленных по п. 3.1.7, и 5 см5
раствора дезоксихолата натрия, приготовленного по п. 3.1.8. Среду перемешивают и разливают по
стерильным чашкам Петри по ГОСТ 26670. Среду используют в день ее приготовления.
       3.2.5. Агар тройной сахарный с цитратом железа: в 1 дм3 мясо-пептонного бульона по п. 3.2.2
растворяют при нагревании 15 см3 дрожжевого экстракта. 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы. 10,0 г
сахарозы, 1.0 г глюкозы, 0.3 г железа (111) цитрата, 0.3 г натрия тиосульфата, 0,024 г фенолового
красного, 15,0 г агара. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при
25 *С (7.4 ± 0,1). Разливают в пробирки и стерилизуют при (121 ± 1 )‘С в течение 10 мин. дают застыть
в наклонном положении, чтобы максимальная высота столбика составляла 2,5 см. Среда имеет корич­
нево-красную окраску. Хранят при комнатной температуре не более 7 сут.
      3.2.6. Среда для расщепления фенилаланина: 15 см3 дрожжевого экстракта, 2.0 г Ш.-фенила­
ланина или 1,0 г /.-фенилаланина, 1.0 г натрия фосфорнокислого двузамешенного. 5,0 г натрия
хлорида, 12,0 гагара растворяют в I дм ! кипящей дистиллированной воды. Но 5 см3среды разливают в
пробирки, стерилизуют при (121 ± 1)"С Юмин.дают застыть в наклонном положении. Среду хранят
при (4 ± 2) ‘С не более 7 сут.
      3.2.7. Агар с цитратом: 0,2 г магния сульфата. 1,0 г олнозамешенного фосфорнокислого аммония,
1.0 г натрия аммония фосфата, 2,0 г трехосновного натрия лимоннокислого, 5,0 г натрия хлорида,
0.08 г бромтимолового синего, 15.0 г агара растворяют в 1 дм3 кипящей дистиллированной воды.
Устанаативают pH таким образом, чтобы после стерилизации он состаатял при 25 ’С (7,0 ± 0.1).
Стерилизуют при (121 ± 1) "С в течение 15 мин и дают застыть в пробирках в наклонном положении.
Среда имеет зеленую окраску, ее хранят при комнатной температу ре не более 7 сут.
      3.2.8. Агар дифференциально-диагностический: к 1дм3расплавленного мясо-пептонного агара по
п. 3.2.1 добавляют 15,0 см3 дрожжевого экстракта, 10,0 г маннита, 10,0 г мальтозы. 80,0 см5 натураль­
ной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 2,0 г железа (III) цитрата, 0.5 г натрия
тиосульфата, 0,5 см3 раствора кристаллического фиолетового, приготовленного по п. 3.1.6, 2,0 см3
щелочного раствора фенолового красного, приготовленного по п. 3.1.3. раствор антибиотика, приго­
товленного по п. 3.1.9 и содержащего 120 000 ЕД полимиксина М сульфата или 100 000 ЕД полимик-
син В сульфата. Среду стерилизуют текучим паром (при 100 *С) в течение 15 мин и раззивают по
ГОСТ 26670 после охлаждения по стерильным чашкам Петри. Среду хранят при (4 ± 2) *С не более
7 сут. Готовая среда оранжево-красного цвета.
      3.2.9. Триптон-триптофановая среда (Ljutov): 10,0 г тригггона или пептона, 5,0 г натрия хлорида.
1.0 г Ш-триптофана или 0,5 г /.-триптофана растворяют в 1 дм 3 кипящей дистиллированной воды и
фильтруют, устанаативают pH так, чтобы после стерилизации он состаатял при 25 *С (7,5 ± 0 .1 ). Среду
разливают по 5 см3 в пробирки, стерилизуют при (121 ± I) *С в течение 15 мин. Среду используют в
день приготовления.
                                                 79