ГОСТ 28366-89

ГОСТ 28366-89


                   М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й        С Т А Н Д А Р Т




                                      РЕАКТИВЫ
                          МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ



                                       Издание официальное




                                                  М осква
                                             Стаидартимформ
                                                   2008




вязаный кардиган

УДК 54-41:543.544:006.354                                                              Группа Л59


М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                                  С Т А Н Д А Р Т


                            РЕАКТИВЫ

                Метод тонкослойной хроматографии                           ГОСТ
                                                                        28366-89
            Reagents. Method of thin-layer chromatography
МКС 71.040.30
ОКСТУ 2609

                                                                            Дата введения 01.01.91


     Настоящий стандарт распространяется на химические реактивы и устанаачивает метод прове­
дения испытания, основанный на тонкослойной хроматографии.
     Термины, применяемые в стандарте, и их пояснения приведены в приложении 2. Рекомендуе­
мые области применения метода приведены в приложении 3.

                                        1.   ОБЩ ИЕ УКАЗАНИЯ
     1.1. 11рн проведении испытаний должны быть соблюдены требования ГОСТ 27025.
     1.2. В нормативно-технической документации на испытуемый реактив должны быть указаны
следующие данные:
     1.2.1. Описание приготовления испытуемого раствора.
     1.2.2. Предварительная обработка (при необходимости).
     1.2.3. Используемые растворители (или смесь).
     1.2.4. Применяемые реактивы и растворы.
     1.2.5. Способ хроматографирования.
     1.2.6. Тип хроматографической пластинки, материал и толщина слоя сорбента, тип сорбента,
размер частиц, дополнительные данные о приготовлении сорбента, его активации, хранении (при
необходимости).
     1.2.7. Время насыщения хроматографической камеры парами подвижной фазы.
     1.2.8. Объем испытуемого раствора, наносимый на пластинку.
     1.2.9. Температура, при которой проводят хроматографирование (при необходимости).
     1.2.10. Критерии окончания процесса хроматографирования.
     1.2.11. Способ проявления хроматограмм и реагенты для проявления (при необходимости).
     1.2.12. Способ оценки хроматограмм.
     1.2.13. Вещества сравнения, используемые для оценки (при необходимости).
     1.2.14. Аппаратура для количественной оценки разделенных компонентов (при необходимости).

                                       2.    СУЩНОСТЬ МЕТОДА

     Метод заключается в разделении на тонком слое сорбента смеси веществ в потоке растворителя,
основанном на различной скорости перемещения компонентов смеси.

                                 3.   АППАРАТУРА И МАТЕРИАЛЫ
      3.1. Камера (сосуд) хроматографическая, закрытая герметичной крышкой.
      3.2. Микропипетка вместимостью 0,002—0,010 см* или микрошприц вместимостью не более
0,01 см».
      3.3. Пластинки хроматографические из стекла, пластмассы, алюминия с тонким слоем подхо-

Издание официальное                                                        Перепечатка воспрещена
                                                                © Издательство стандартов, 1990
                                                                 €> СТАНДАРТИНФОРМ, 2008

ГОСТ 28366-89 С. 2

дяших материалов, пригодных для хроматографирования (например, силикагеля, кизельгура, окиси
алюминия, целлюлозы).
     3.4. Аппарат дня подготовки пластинок.
     3.5. Пульверизатор.
     3.6. Лампа ультрафиолетовая (для обнаружения веществ с использованием флуоресценции при
длинах волн от 254 до 366 нм).
     3.7. Денситометр.
     3.8. Устройство для сканирования пятен на сорбенте.

                             4. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

     4.1. Приготовление пластинок для тонкослойной хроматографии
     Предварительная очистка пластинок, размеры пластинок, толщина слоя сорбента, средний
размер частиц сорбента или его тип, а также сушка, хранение пластинок и предварительное
приготовление для испытания должны быть приведены в нормативно-технической документации
на испытуемый реактив. Пластинки готовят одним из способов, указанных ниже.
     4.1.1. Разравнивание сухого материала на соответствующей подтожке пластинки (насыпной
способ).
     4.1.2. Приготовление нанесением суспензии сорбента в смеси со связующим веществом или
флуоресцентным индикатором на пластинку в соответствии с нормативно-технической документа­
цией на испытуемый реактив.
     4.1.3. Применение готовых пластинок или готового набора пластинок, приготовленных в
соответствии с инструкцией, приложенной к набору.
     4.2. Нанесение пробы
     В точки, отмеченные на линии старта, наносят с помощью калиброванной микропипетки или
микрошприиа 0.001—0,010 см5 испытуемых растворов, если в нормативно-технической документа­
ции на испытуемый реактив нет других указаний. При необходимости, в точки на линии старта
наносят таким же образом растворы веществ, соответствующих предполагаемым компонентам
смеси, дтя идентификации и количественной оценки этих примесей. При нанесении пробы не
должна быть нарушена целостность слоя сорбента. Оптимальный диаметр пятен нанесенных проб
должен быть 3—5 мм. Допускается наносить пробу не в виде точки, а чертой с применением
микропипетки или капилляра. На тонкослойной пластинке отмечают высоту продвижения фронта
подвижной фазы и записывают данные о каждой пробе, подвижной фазе и дату анализа. При
необходимости нанесения больших объемов испытуемого раствора рекомендуется нанесение пятен
хроматографическим шприцем, порциями по 0,001 см' и подсушивание пятна холодным воздухом.
     После нанесения пробы растворителю дают свободно испариться.

                              5. ПРОВЕДЕНИИ ИСПЫТАНИЯ

      Хроматографическое разделение веществ проводят в хроматографической камере, в замкнутой
системе, насыщенной парами подвижной фазы. Если в нормативно-технической документации на
испытуемый реактив нет других указаний, хроматографирование проводят, как указано ниже.
      Предварительно готовят подвижную фазу (элюирующую систему), раствор пробы, а также
растворы веществ сравнения или растворы предполагаемых примесей и элюирующую систему вводят
в камеру.
      Тонкослойную пластинку с нанесенной пробой и. при необходимости, с веществами сравнения
или предполагаемыми примесями после испарения растворителя при комнатной температуре
помещают в камеру, насыщенную парами подвижной фазы, подвергают элюированию подвижной
фазой. Элюируют до тех пор. пока фронт подвижной фазы не окажется на предварительно
обозначенной высоте, примерно в 20—30 мм от верхнего края пластинки. Хроматографическую
пластинку вынимают и сушат. После высушивания хроматограмму можно элюировать повторно или
тех! же самым растворителем (повторная хроматография) или другим растворителем (последователь­
ная хроматография). Пластинку помещают в растворитель стартом вниз или повернув ее под углом
90" (метод двумерного разделения пятна испытуемой пробы).
      5.1. Восходящая хроматография
      Хроматографическую пластинку помещают в хроматографическую камеру таким образом,
чтобы ее нижний конец был погружен в слой подвижной фазы на дне сосуда, как показано на черт. 1
и черт. 2 приложения I.

С. 3 ГОСТ 28366-89

     5.2. Горизонтальная хромаюграфня
     Испытание пронодят, как показано на черт. 3 приложения 1.
     5.3. Нисходящая хроматография
     В камере для нисходящей хроматографии должен быть сосуд, в который помещают подвижную
фазу. Подвешенную хроматографическую пластинку соединяют (вблизи линии старта) бумажным
фитилем с подвижной фазой сосуда, как показано на черт. 4 приложения 1.

                               6. СУШКА ХРОМАТОГРАММ

     По окончании разделения хроматограмму вынимают из камеры, отмечают фронт мягким
карандашом и сушат в таком положении, как при элюировании, при комнатной температуре или в
горячем воздухе (кроме пластинок, приготовленных насыпным способом, которые сушат в горизон­
тальном положении). Продолжительность сушки зависит от скорости испарения подвижной фазы
и химической стабильности хроматографируемых веществ.

                           7. ПРОЯВЛЕН И Г ХРОМАТОГРАММ

     Проявление компонентов на хроматограмме проводят одним из способов, приведенных ниже.
     7.1. Физические методы
     Визуально при дневном свете отмечают на хроматограмме положение пятен цветных веществ.
При наличии флуоресцирующих веществ проявление проводят в УФ-свете.
     7.2. Химические методы
     Хроматограмму проявляют жидкими и газообразными проявителями, используя реакцию
имеющихся на хроматограмме соединений с подходящим реагентом-проявителем с образованием
окрашенного или флуоресцирующего вещества. Жидкие проявители наносят пульверизатором или
используют реагенты в аэрозольной упаковке; газообразные проявители применяют, поместив
хроматограмму в пары проявителя.
     7.2.1. Хроматограмму кладут горизоггтально на лист фильтровальной бумаги или оставляют в
вертикальном положении и опрыскивают мелкими каплями (туманом) проявителя всю площадь
хроматограммы.
     7.2.2. При проявлении газообразным проявителем хроматограмму подвешивают в камере, в
которую помещен летучий реагент (например, кристаллы йода), или на дне которой проявитель
получают химическим путем (например, оксиды азота получают путем добавления твердого нитрита
натрия к раствору соляной кислоты).
     7.3. Биологические методы
     Хроматограмму проявляют, используя биологическую активность хроматографируемых веществ.

                       8. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИСПЫТАНИЙ

     8.1.     Качественная оценка хроматограммы заключается в определении положения пятна или
полосы, которое характеризуется значением R



   где а — расстояние от центра пятна до стартовой линии, мм;
       Ь - расстояние от фронта растворителя до стартовой линии, мм
           или значением /?,:
                                               а
                                               с
    где с — расстояние от центра пятна вещества сравнения до стартовой линии, мм.
     8.2.       Определение количества искомого компонента в пробе проводят путем сравнения разме­
ров и интенсивности окраски его пятна с пятнами вещества сравнения, нанесенными на хромато­
графическую пластинку в интервале значений концентрации, указанных в нормативно-технической
документации на испытуемый реактив, и обработанными в условиях испытания. Оценку проводят
визуально или с помощью аппарату ры (например, денситометра, устройства для сканирования пятен