ГОСТ 28085-89

ГОСТ 28085-89

        М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                  С Т А Н Д А Р Т




                        ПРЕПАРАТЫ БИОЛОГИЧЕСКИЕ
                        МЕТОД БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ
                                   СТЕРИЛЬНОСТИ



                                    И здание официальное
        БЗ 1 -2 0 0 5




                                               Ноал*
                                           С т* ац лтф ори
                                                 2*7




жилет

УДК 615.37:619.001.006.354                                                                        Группа Р31

М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                                              С Т А Н Д А Р Т



                          ПРЕПАРАТЫ БИОЛОГИЧЕСКИЕ

                 Метод бактериологического контроля стерильности                      ГОСТ
                                 Biological preparations.
                                                                                    28085-89
                     Method for the bacteriological control of sterility

М К С 11.220
О К С Т У 9291

                                                                                       Дата введения 01.01.90


     Настоящий стандарт распространяется на биологические ветеринарные препараты и устанав­
ливает метод бактериологического контроля стерильности.
     Стандарт не распространяется на живые вакцины.
     Сущность метода заключается в микробиологической оценке отсутствия роста бактерий гри­
бов в высевах препаратов на питательные среды.

                                                 1.   ОТБОР ПРОБ

     Ятя испытания биопрепаратов на стерильность от каждой серии препарата отбирают пробы в
количестве 0.15 % флаконов (ампул), но не менее 5 флаконов (ампул) для жидких и 10 ампул для су­
хих препаратов.

                     2.   АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

     Термостат, обеспечивающий температуру нагрева (37 ±0,5) *С и (21 ± 1) *С.
     Шкаф сушильный.
     pH-метр электрометрический.
     Дистиллятор.
     Штативы дюралюминиевые.
     Пипетки мерные вместимостью I и 2 см3 по НТД.
     Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.
     Флаконы стеклянные вместимостью 100 см3.
     Воронки стеклянные по ГОСТ 25336.
     Кастрюли разной вместимости.
     Груши резиновые.
     Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
     Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
     Масло вазелиновое по ГОСТ 3164.
     Раствор изотонический с массовой долей хлористого натрия 0,9 %.
     Аммиак водный по ГОСТ 3760. раствор с массовой долей 10 %.
     Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор с массовой долей 1 %—2 %.
     Водорода перекись, раствор с массовой долей 3 %.
     Хлорамин, раствор с массовой долей 2 %, или фенол, раствор с массовой долей 3 %, или анти-
септол, раствор.


И манне официальное                                                                  Перепечатка воспрещена


                                                                           © Издательство стандартов, 1989
                                                                                <£> С тандарт нформ. 2007

ГОСТ 28085-89 С. 2

      Антисептол готовят следующим образом: раствор хлорной извести с массовой долей 50 % и
раствор кальцинированной соды с массовой долей 5 % сливают в равных объемах и перед употреб­
лением разбавляют водой в соотношении 1:50.
      Известь хлорная с массовой долей активного хлора не менее 32 %.
      Сода кальцинированная по ГОСТ 83.
      Натрия гидроокись по ГОСТ 2263.
      Фуксин основной.
      Калий йодистый по ГОСТ 4232.
      Йод кристаллический по ГОСТ 4159.
      Порошок стиральный.
      Среда тиогликолевая: готовят следующим образом: 15 г панкреатического гидролизата казеи­
на; 5 г дрожжевого экстракта; 2,5 г хлористого натрия; 5.0 г глюкозы; 0,75 г цистина; раствора реза-
зурина натрия 1:1000 свежеприготовленного 1 см3; 0.3 см3 тиогликолевой кислоты или 0,5 см3
тиогликолята натрия: 0,75 см3 агара доводят до 1000 см3 дистиллированной водой. Среду автоклави­
руют при 120 *С в течение 20 мин, pH среды 7,0 i0 ,2 .
      Бульон казеиновый питательный с массовой долей глюкозы 0,5 %. Готовят следующим обра­
зом: смешивают 15 г панкреатического гидролизата казеина или пептона Мартена, 5 г дрожжевого
экстракта, 5 г хлористого натрия доводят до 1000 см3 дистиллированной водой. Смесь подщелачива­
ют раствором гидроокиси натрия с массовой долей до 20 %, до pH 8,0—8,2, кипятят на открытом
огне в течение 10—15 мин или автоклавируют при 110 'С в течение 30 мин. фильтруют, прибавляют
5 г глюкозы, устана&тнвают pH 7.3—7,5, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют при
110 'С —112 *С в течение 30 мин.
      Агар казеиновый питательный с массовой долей глюкозы 0,5 %. Готовят так же. как и казеино­
вый питательный бульон, и добавляют 10—20 г агар-агара.
      Бульон казеиновый питательный с массовой долей глюкозы 0,5 %. агара 0.2 % и кусочками пе­
чени (мяса) под вазелиновым маслом. Готовят на основе казеинового питательного бульона с 0.5 %
глюкозы, добавляя 0.2 % агар-агара и 0.5 см3 вазелинового масла. Готовую среду разливают в сте­
рильные пробирки, добавляют 0.5 см3 стерильного вазелинового масла, 3—4 кусочка мяса или пече­
ни и стерилизуют при 110 *С—112 *С в течение 30 мин, pH среды — 7,2—7,4.
      Бульон мясо-пептонный с массовой долей глюкозы 0.5 % (МПБ) по ГОСТ 20730.
      Агар мясо-пептонный с массовой долей глюкозы 0.5 % (МПа).
      Бульон мясо-пептонный печеночный под вазелиновым маслом с массовой долей глюкозы
0,5 %, агара 0,2 % (среда Тароцци).
      Среда Сабуро: готовят следующим образом: в 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 10 г
сухого ферме»гтатнвного пептона, кипятят в течение 10 мин, фильтруют, прибавляют 40 г глюкозы
или мальтозы, устанавливают соляной кислотой с массовой долей 1—2 % pH 5,8. разливают в сте­
рильные пробирки и стерилизуют при 110 *С в течение 30 мин.
      Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
      Пептон сулой ферментативный по ГОСТ 13805.
      Казенна гидролизат панкреатический или пептон Мартена.
      Экстракт дрожжевой.
      Нагрий хлористый по ГОСТ 4233.
      Глюкоза или мальтоза по ГОСТ 6038.
      Цистин.
      Кислота тиогликолевая.
      Натрия тиогликолат.
      Натрия резазурин.

                              3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

     3.1. Подготовка лабораторной посуды
     3.1.1. Новую лабораторную посуду кипятят в течение 15 мин в дистиллированной воде, под­
кисленной раствором соляной кислоты, а затем промывают водопроводной водой и моют ершом в
растворе, содержащем на 1000 см3 дистиллированной воды 30 г стирального порошка и 50 см3 вод­
ного аммиака. После этого посуду тщательно промывают сначала водопроводной водой, а затем три
раза дистиллированной водой, высушивают и стерилизуют.

С. 3 ГОСТ 28085-89

     3.1.2. Перед стерилизацией лабораторную посуду (чашки, пипетки, пробирки и т. п.) уклады­
вают в металлические пеналы. Стерилизуют посуду в автоклаве при 0,15 МПа в течение 60 мин или
в сушильном шкафу при (170 * 5) “С в течение 120 мин.
     3.2. Подготовка бокса
     3.2.1. Ежедневно бокс и предбоксник подвергают тщательной уборке и обеззараживанию рас­
твором перекиси водорода или другими средствами аналогичного действия.
     Готовят раствор и обрабатывают бокс и предбоксник с соблюдением требований техники безо­
пасности.
     Норма расхода дезинфицирующего раствора 70—100 см3/м 2 при влажной уборке. Раствор го­
товят непосредственно перед употреблением.
     3.2.2. Допускается дезинфицировать бокс горячим 50 “С —60 "С мыльно-содовым раствором
(1 % соды или стирального порошка и 0.5 % нашатырного спирта). После этого протирают стены,
полы, мебель одним из дезинфицирующих растворов.
     В каждом боксе должны быть установлены бактерицидные лампы из расчета 2—2,5 В на 1 м3.
Дампы размещают на потолке и на стенах. Бокс облучают до начала проведения испытания в тече­
ние 1.5—2 ч. Во время проведения испытания лампы должны быть выключены.
     Чистоту воздуха в боксе проверяют один раз в неделю, используя аппараты, предназначенные
для этих целей (аппарат Кротова и др.).
     3.3. Испытание ростовых свойств питательных сред
     Готовые питательные среды, проверенные на ростовые свойства, разливают по 6—8 см ' (для
определения анаэробов по 10—12 см3) в пробирки и по 50—60 см3 во флаконы вместимостью
100 см3.
     Испытание проводят в соответствии с приложением.
     3.4. Подготовка проб испытуемых препаратов
     Пробы сухих биологических препаратов предварительно растворяют стерильным растворите­
лем (изотонический раствор хлорида натрия, дистиллированная вода и т. д.).

                                4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

      4.1. Проведение испытания на стерильность с использованием тиоглнколевой среды
      4.1.1. Из каждого флакона (ампулы) препарата производят посев по 1 см3 в три пробирки, со­
держащие тноглнколевую среду.
      Две засеянные пробирки выдерживают в термостате в течение 14 сут: одну — при (21 ± 1) *С,
другую — при (37 ± 0,5) *С.
      Третью пробирку выдерживают в течение 7 сут при (37 *0,5) *С и затем делают из нее пересе­
вы по 0.5 см3 по одной пробирке на следующие среды:
      скошенный казеиновый питательный агар:
      казеиновый питательный бульон;
      среду Сабуро (жидкую);
      по 1 см3 на казеиновый питательный бульон под вазелиновым маслом с кусочками мяса или
печени.
      Пересевы на казеиновый агар, мясо-пептонный бульон (МП Б) выдерживают еще в течение
7 сут при (37 а 0,3) 'С. а пересев на среду Сабуро — при (21 ± 1) *С.
      При испытании проб препаратов проводят контроль стерильности сред: три пробирки с каж­
дой средой выдерживают в термостате в течение 14 cvt при (37 ±0,3) *С. со средой Сабуро — при
(21 а 1 )‘С.
      4.2. Проведение испытания на стерильность без тиоглнколевой среды
      Из каждой пробы биологического препарата производят посев на жидкую среду Сабуро, МПА
и МПБ — по 3 пробирки; на среду ТароЦЦИ — по 2 пробирки и 2 флакона.
      Для выявления аэробов высевают 0,5 см3 посевного материала в одну пробирку и 1—2 см3 в
один флакон, а для выявления анаэробов — соответственно по I и 5 см3.
      Пробирки и флаконы с посевами на всех средах, кроме среды Сабуро. выдерживают в термо­
стате при (37 а 0,5) 'С , на среде Сабуро — при (21 ± 1) ‘С в течение 7 сут (для анаэробных препара­
тов — 15 сут).
      По истечении указанного срока делают пересев, за исключением посевов на МПА.
      Пересевают пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторич­
ные посевы выдерживают 7 сут (дтя анаэробных препаратов — 15 сут).
      Одновременно проводят контроль стерильности сред по п. 4.1.1.