ГОСТ 26670-91

ГОСТ 26670—91

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Издание официальное

УДК 663/.664 : 543.9 : 006.354 Группа HO9

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы культивирования микроорганизмов: ГОСТ
26670—91
Food products.
Methods for cultivation of microorganisms
MKC 07.100.30
OKCTY 9109

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы культи-
вирования для выявления присутствия (отсутствия) или определения количества микроорганизмов
соответствующих групп, семейств, родов или видов.

Методы основаны на посеве продукта, развелении навески продукта или осажденных на
мембранном фильтре клеток микроорганизмов в питательные среды, с последующим культивиро-
ванием посевов в условиях, благоприятных для роста микроорганизмов.

Требования стандарта являются обязательными.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА И ПОДГОТОВКИ ПРОБ
Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.
2. АППАРАТУРА И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Аппаратура и питательные среды по нормативно-технической документации, устанавливающей
метолы анализа соответствующей группы, семейства. рола или вида микроорганизмов.

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

31, Степень разведения навески продукта

3.1.1 Степень разведения навески продукта для посева на плотные срелы выбирают Tak, чтобы
общее количество колоний, выросших на чашке Петри, колебалось в пределах 15—300; количество
колоний специфических групи бактерий (например, колиформных) — 15—150; плесеней 5—50.

3.1.2 Степень разведения навески продукта для посева в жидкие среды выбирают так, чтобы
хотя бы в одной пробирке наибольшего разведения отсутствовали микроорганизмы.

3.1.3. Количество продукта, которое необходимо профильтровать для получения изолирован-
ных колоний на фильтре, должно быть указано в нормативно-технической документации на методы
анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов микроорганизмов.

3.2. Объем навески продукта или его разведения для посева

3.2.1. При посеве глубинным методом 1 см? жидкого продукта или разведения навески
продукта смешивают с расплавленной питательной средой.

3.2.2 При посеве поверхностным методом 0,1 или 0,2 см* жидкого продукта или разведения
навески продукта вносят на поверхность плотной среды.

3.2.3. Для выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов и определения их таксоно-
мических свойств в жидкие среды вносят до 50 г (cM?) продукта; при определении количества
микроорганизмов в жидкие среды вносят до 100 см? жидкого продукта или разведения навески.

Издание официальное Перепечатка воспрещена.

* © Издательство стандартов, 1992

© Стандартинформ, 2008

ГОСТ 26670—91 C. 2
4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Глубинный метод посева в плотные среды

Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и
заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры (45 + 1) °С
питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4—5 мм.

4.1.2. Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми дви-
жениями чашки так, чтобы ‘среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. После застывания
среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

42. Поверхностный метод посева на плотные среды

4. ‘Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. При подсушивании
для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдержи-
вают в течение 30 мин при 48—50 °С или в ламинарном боксе 1—2 4, или в других условиях,
обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.

4.2.2. На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно
равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.

4.2.3. Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении
в течение 15 мин.

4.3. Метод посева в жидкие среды

4.. В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведение
навески.

4.3.2. При определении наиболее вероятного числа (НВЧ) микроорганизмов из навески
продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было
определить предполагаемое НВЧ микроорганизмов.

Самое низкое разведение и высеваемые объемы его инокулума выбирают в зависимости от
предполагаемого количества микроорганизмов и чувствительности метода следующим образом:

по 1 см? из разведения 10-' и высших разведений, если надо определить количество микроор-
ганизмов, превышающее 3 клетки в 1,0 г (смз) продукта;

по 10 смз из разведения 10-! или 1 см? неразведенного продукта и по 1 см? из разведения 10-1
и более высокого разведения, если надо опрелелить количество микроорганизмов, превышающее 3
клетки в 10,0 г (см') продукта;

по 10 и 1 см? неразведенного продукта и ряда его разведений, если надо определить количество
микроорганизмов, превышающее 3 клетки в 100 см? продукта.

4.3.3. Все разведения и неразведенный продукт высевают параллельно в три пробирки с
питательной средой. Инокулум объемом 1 см? высевают в 10 cM} среды нормальной концентрации,
инокулумы объемом 10 см? — в 10 смз срелы двойной концентрации.

4.4. Метод мембранных фильтров

Метод мембранных фильтров применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов
или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим давлением.

4. Подготовка фильтров

4 При работе с мембранными фильтрами следует соблюдать следующие условия:

выбирают фильтры, размеры пор которых позволяют осадить на нем основное количество
микроорганизмов определенных видов или групп; для улавливания бактерий применяют фильтры
со средним диаметром пор 0,3 мкм:

визуально контролируют отсутствие механических повреждений фильтров, и во избежание
повреждений фильтры берут пинцетом, не имеющим рубчиков;

фильтры хранят в сухом состоянии;

перед использованием фильтры освобождают от остатков растворителей, пузырьков воздуха и
загрязнений кипячением по ГОСТ 18963 в дистиллированной воде:

для фильтрации жидкостей применяют аппарат Зейтца, прибор Гробара и другие установки;

части установки для фильтрации, соприкасающиеся с фильтруемым раствором, стерилизуют
или кипятят;

стерильный влажный фильтр осторожно помещают блестящей стороной вверх на подкладку
из пористого материала или сетку фильтрующей аппаратуры.

Мембранные фильтры не применимы для фильтрации суспензий или гомогенатов продуктов,
загрязняющих при фильтрации поры фильтров.

4.4.2. Проведение фильтрации

4.4.2.1. Для фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно

С. 3 ГОСТ 26670—91

разводят дистиллированной или пептонной водой в соотношении, позволяющем легко профильт-
ровать разведенные растворы.

Жидкий продукт, солержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этапа.
Для освобождения от взвешенных частиц его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор
4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой
или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях.

После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давле-
нием или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной
водой или пептонно-солевым раствором.

4.4.2.2. Фильтрацию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра.
Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные
среды. На плотную срелу фильтр накладывают нижней стороной Tak, чтобы она полностью
соприкасалась с поверхностью срелы.

4.5. Посевы термостатируют в благоприятных для роста микроорганизмов условиях, указанных
в нормативно-технической документации, устанавливающей метолы анализа соответствующей
группы, семейства, рода или вида микроорганизмов.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.41. Подсчет микроорганизмов на плотных средах

541. В посевах на плотных питательных средах, полученных глубинным и поверхностным
методами или методом мембранных фильтров:

для подсчета общего числа жизнеспособных микроорганизмов учитывают все выросшие
колонии;

для подсчета количества микроорганизмов определенных таксономических групп на селектив-
ных средах учитывают колонии, характерные по морфологии для выявляемой группы;

для подсчета количества определенных групп или видов микроорганизмов на селективно-диа-
гностических или диагностических средах учитывают колонии характерной морфологии, показав-
шие характерную цветную реакцию с присутствующим в среде индикатором.

Колонии подсчитывают невооруженным глазом или с помощью линзы с шестикратным
увеличением, или с помошью специально предназначенного для подсчета колоний прибора.

5.2. Выявление и подсчет микроорганизмов в жидких средах

5.2.1. Живые микроорганизмы в жидких средах выявляют по помутнению среды, появлению
осадка, пленки, газообразованию или по наличию роста микроорганизмов в пересевах на плотных
питательных средах.

Микроорганизмы определенных физиологических или таксономических групп выявляют по
изменению цвета индикаторов, образованию газа из определенных веществ и по другим признакам,
специфическим для метаболизма выявляемой группы или видов микроорганизмов.

5.2.2. Для пересева на плотные питательные среды в жидкую питательную среду погружают
стерильную стеклянную палочку или ‘бактериологическую петлю, или иглу и наносят взятую каплю
культуральной жидкости на предварительно подсушенную по п. 4.2.1 плотную питательную среду и
сразу же равномерно растирают по поверхности шпателем.

Для получения изолированных коло! ий внесенную каплю распределяют по поверхности среды
петлей в виде штриха, как показано на чертеже.

5.3. Подтверждение характерных колоний

5.3.1. При необходимости подтверждения принадлежности характерных колоний к выявляе-
мым микроорганизмам отбирают не менее 5 отдельных колоний для получения чистой культуры.

5.3.2. Каждую выбранную колонию микроорганизмов пересевают на неселективиую питатель-
ную среду, для чего кончиком стерильной петли (диаметр до 2 мм) отбирают небольшое количество
верхней части колонии микроорганизмов.

На питательную среду высеивают непосредственно отобранные микроорганизмы или из них
готовят сначала суспензию, которую потом высевают петлей на поверхность срелы в чашке Петри
или на скошенную поверхность среды в пробирк‹

Для приготовления суспензии микроорган
раствора.

5.3.3. Посевы инкубируют в условиях, указаяных в нормативно-технической документации,
устанавливающей методы анализа соответствующих групп, семейств, родов или видов.

После инкубирования отмечают колонии одного типа. Затем из каждого пересева отбирают по

мы суспензируют в 1—2 см? пептонно-солевого