ГОСТ 26176-91

Группа С19


                 М   Е   Ж    Г   О    С    У   Д   А   Р   С   Т   В   Е      Н   Н   Ы   Й   С Т А Н Д А Р Т


                                            КОРМА, КОМБИКОРМА

                                       Методы определения растворимых                                  ГОСТ
                                        и легкогидролнзуемых углеводов
                                                                                                     26176-91
                                           Fodders, mixed feeds. Methods for
                                             determination of soluble and
                                              hydrolysablc carbohydrates
                 ОКСТУ 9809

                                                                                                   Дата ввелення 01.01.93


                      Настоящий стандарт распространяется на все виды кормов растительного происхождения,
                 комбикорма и устанавливает методы определения растворимых (сахаров) и легкогидролизуемых
                 углеводов (крахмала) с антроновым реактивом и растворимых углеводов по Бертрану.

                                                                1. ОТБОР ПРОБ
                      Отбор проб - по ГОСТ 27262, ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0.

                          2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ РАСТВОРИМЫХ И ЛЕГКОГИДРОЛИЗУЕМЫХ
                                     УГЛЕВОДОВ С АНТРОНОВЫМ РЕАКТИВОМ

                       Сущность метода заключается в экстракции из продукта дистиллированной водой при темпе­
                 ратуре 50—60 "С растворимых углеводов (сахаров), последующем гидролизе I %-ным раствором
                 серной кислоты легкогидролизуемых углеводов (крахмала) в остатке, дегидратации сахаров экстра­
                 кта и гидролизата, окрашивании растворов антроновым реактивом и фотометрическом определении
                 оптической плотности растворов.
                       2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
                       Фотоэлектроколориметр.
                       Аппарат для встряхивания марки АВУ-ба или других аналогичных марок.
                        Микроизмельчитель для тканей типа РТ-2.
                       Весы лабораторные по ГОСТ 24104 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания
                 200 г.
                       Весы лабораторные по ГОСТ 24104 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания
                 500 г.
                        Весы лабораторные по ГОСТ 24104 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания
                 500 г.
                        Измельчитель проб растений марки ИГ1Р-2, соломорезка марки ИСР-I или других аналогич­
                 ных марок.
                        Шкаф сушильный лабораторный типа СЭШ-ЗМ.
                        Мельница лабораторная марки МРП-2 или других аналогичных марок.
                       Сито с отверстиями диаметром 1 мм.
                       Плитка электрическая.
                       Баня водяная.
                        Штативы металлические с гнездами для пробирок.
                        Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336 с притертыми пробками диаметром 2 см, высотой 20 см.




                 Издание официальное                                                              Перепечатка воспрещена
                                                                         9




кружева москва

С. 2 ГОСТ 26176-91                                                              Электронная версия

    Стаканы химические термостойкие по ГОСТ 25336 вместимостью 250 см3, диаметром 6.5 см.
высотой 11 см.
     Колбы мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 100. 10(H) см3 с притертыми
пробками.
     Воронка Бюхнера по ГОСТ 25336.
     Колба Бунзена по ГОСТ 25336 вместимостью 1 дм3.
     Воронки стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром 7 см.
     Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 100, 250. 500, 1000 см3.
    Эксикатор с краном по ГОСТ 25336.
     Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 150 см3.
     Промы валка лабораторная стеклянная или полиэтиленовая.
    Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
     Ножницы.
     Пипетки по ГОСТ 29227 2-го класса точности вместимостью 1, 2. 5. 10. 20. 25 см3.
     Палочки стеклянные длиной 18—20 см.
    Дозаторы вместимостью 10 см ’ с погрешностью не более I %.
     Карандаш восковой по стеклу.
     Бумага фильтровальная лабораторная марки ФОБ по ГОСТ 12026.
     Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174, х. ч. или ч. д. а. или
     Цинк уксуснокислый 2-водпый по ГОСТ 5823, х. ч. или ч. д. а.
    Лнтрон по ТУ 6 -0 9 -0 8 -1 8 3 3 , ч.
    Тиомочевина по ГОСТ 6344, ч. д. а. или х. ч.
     Кислота серная по ГОСТ 4204. х. ч.
     Глюкоза безводная по ГОСТ 6038, ч. или ч. д. а.
     Калий железистосннеродистый 3-водный по ГОСТ 4207, х. ч. или ч. д. а.
     Кальций хлористый, ч. д. а или х. ч.
    Толуол по ГОСТ 5789.
     Бензол по ГОСТ 5955.
    Эфир петролейный по ТУ 6—02—1244.
     Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
      П р и м е ч а н и е . Допускается применение импортной лабораторной посуды по классу точности и
реактивов по качеству нс ниже отечественных.
      2.2. Подготовка к испытанию
      2.2.1. Подготовка проб к испытанию
      Объединенные пробы сена, силоса, сенажа, соломы или зеленых кормов измельчают на
отрезки длиной 1—Зсм. Корнеплоды и клубнеплоды измельчают на пластинки (ломтики) толщиной
до 0,8 см.
      Из объединенной пробы выделяют среднюю пробу, масса которой после высушивания должна
быть не менее 100 г. Пробы высушивают в сушильном шкафу при температуре 60—65 ‘С до
воздушно-сухого состояния. Воздушно-сухую пробу измельчают на мельнице и просеивают через
сито. Трудноизмельчимый остаток на сите после измельчения ножницами или в ступке добавляют
к просеянной части и тщательно перемешивают.
      Средние пробы комбикормов, зерна, жмыхов, шротов, гранул травяной муки или витаминной
муки из древесной зелени размалывают и просеивают через сито без предварительного подсушива­
ния или в случае необходимости после предварительного высушивания до воздушно-сухого состо­
яния.
      Подготоатенные пробы хранят в стеклянной или пластмассовой банке с притертой пробкой
(крышкой) в сухом месте и используют для проведения анализов.
      2.2.2. Подготовка реактивов и растворов
      2.2.2.1. Перекристаллизация антрона
      Перекристатлизацню антрона проводят в вытяжном шкафу.
      Растворяют 10 г антрона, взвешенного с погрешностью не более 0,05 г, в 90 см3 горячего
бензола и к полученному прозрачному раствору, окрашенному в коричневый цвет, прибавляют
медленно по каплям при перемешивании 30 см3 холодного петролейного эфира. Выпавшие свет­
ло-зеленые кристаллы отфильтровывают на воронке Бюхнера и высушивают вначале в вытяжном
шкафу, а затем в эксикаторе с краном над хлористым кальцием до исчезновения запаха раствори-
                                                 10

Электронная версия                                                                             ГОСТ 26176-91 С. 3

теля. Если при растворении антрона в бензоле получают мутный раствор, то антрон для работы не
пригоден.
      2.2.2.2. Приготовление антронового реактива
      Для приготовления антронового реактива готовят растворы № I и 2.
      Раствор № 1: смешивают 330 см3 дистиллированной воды с 660 см3 концентрированной
серной кислоты в термостойкой посуде, вливая постепенно кислоту в воду. Раствор охлаждают.
      Раствор № 2: растворяют в 100 см1 концентрированной серной кислоты 1 г тиомочевины
и затем 1 г перекристаллизованного антрона, взвешенных с точностью до 0.01 г. Раствор
охлаждают.
      Растворы       1 и 2 сливают вместе, тщательно перемешивают и охлаждают до комнатной
температуры. Полученный прозрачный желто-зеленый раствор переливают в темную склянку и
хранят не более двух недель в холодильнике.
      2.2.2.3. Приготовление осветляющих растворов
      Растворяют в дистиллированной воде 300 г сернокислого цинка или 230 г уксуснокислого
цинка, взвешенных с точностью до 0.05 г. в мерной колбе вместимостью 1000 см3.
       Растворяют в дистиллированной воде 150 г железистосинеродистого калия, взвешенного с
точностью до 0,05 г, в мерной колбе вместимостью 1000 см3. Раствор в колбе доводят дистиллиро­
ванной водой до 1000 см3.
      2.2.2А Приготовление раствора серной кислоты с массовой концентрацией 1 %.
      5.6 см3 концентрированной серной кислоты смешивают с дистиллированной водой в мерной
колбе вместимостью КИК) см3, вливая кислоту в воду. Раствор охлаждают и доводят до 1000 см3
дистиллированной водой и затем тщательно перемешивают.
      2.2.2.5. Приготовление основного раствора глюкозы с массовой концентрацией 0,3 мг/см3.
      Растворяют в дистиллированной воде, предварительно прокипяченной и охлажденной до
20 ‘С. 0.3 г глюкозы в мерной колбе вместимостью 1000 см3. Раствор доводят до метки дистилли­
рованной водой и перемешивают. В раствор добавляют несколько капель толуола и хранят в
холодильнике не более одной недели.
      2.2.2.6. Приготовление растворов сравнения                                                     Таблица 1
глюкозы
                                                   О бъем о с н о в н о г о р ас Vвор л  М асса гл ю ко зы и 2 с м 3
       В мерные колбы вместимостью 100 см3 при­           ГЛЮКОШ. СМ                    р л сгворои с р а в н е н и и , мг
ливают основной раствор глюкозы в объемах,
указанных в табл. I, доводят объем растворов                         0                              0
дистиллированной водой до метки и тщательно                          5                              0 .0 3
                                                                   10                               0 .0 6
перемешивают.
                                                                   15                               0 .0 9
      2.3.    Проведение испытания                                 20                              0 .1 2
      2.3.1. Получение экстрактов растворимых                      25                               0 .1 5
углеводов
       Навеску испытуемой пробы массой около
0,5 г, взвешенную с точностью до 0.001 г, помешают в стеклянный стакан вместимостью 250 см3 с
метками на 50 и 60 см3 и заливают 60 см3 дистиллированной воды, нагретой до температуры 50 *С.
      Стакан помешают в микроизмельчитель типа РТ-2 и содержимое гомогенизируют в течение
2 мин при 3000 мин- 1 . При отсутствии микроизмельчителя навеску пробы встряхивают с тем же
количеством воды, нагретой до 60 “С, в колбах вместимостью 150 см3 на встряхивающем аппарате
с частотой встряхивания 200 колебаний в минуту в течение 15—20 мин. После гомогенизации
мешалку размельчителя обмывают дистиллированной водой в тот же стакан и раствор фильтруют
через стеклянную воронку с бумажным фильтром в мерную колбу вместимостью 100 см3. Осадок
переносят количественно на фильтр и промывают небольшим количеством дистиллированной воды.
После охлаждения раствор доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Получают исходный неосветленный экстракт растворимых углеводов.
      2.3.2. Получение гидролизатов легкогидролизуемых углеводов
      Осадок с фильтра после удаления растворимых углеводов тщательно смывают с помощью
промывалки I %-ным раствором серной кислоты, подогретым до 70—Х0 "С, в тот же стакан, где
проводилась гомогенизация. Общий объем в стакане доводят до метки 50 см3 1 %-ным раствором
серной кислоты и кипятят содержимое стакана в течение 5 мин при периодическом перемешивании
стеклянной палочкой. Затем содержимое стакана в горячем состоянии фильтруют через стеклянную
воронку с бумажным фильтром в мерную колбу вместимостью 100 см3. Стакан и осадок на фильтре
промывают дистиллированной водой. После охлаждения фильтрата объем в колбе доводят до метки
                                                            И

С. 4 ГОСТ 26176-91                                                          Электронная версия

дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Получают неосветлепный гидролизат легко-
гидролизуемых углеводов. Экстракт и гидролизат хранят в холодильнике не более суток.
      2.3.3. Осветление растворов
      Для осветления растворов в мерные колбы вместимостью 100 см3 отбирают в зависимости от
содержания углеводов в анализируемой пробе 5—10 см3 из экстракта концентратов, сочных или
грубых кормов, 1—2 см3 из экстракта свеклы, 5—20 см3 из гидролизата сочных, грубых кормов и
от 1 до 5 см3 из гидролизата концентратов. Приливают дистиллированную воду до заполнения около
2/ 3 объема колбы. Затем в эти же колбы добавляют по 2 см3 растворов сернокислого или
уксуснокислого цинка и раствора железистосинеродистого калия. Растворы с выпавшим аморфным
осадком доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и оставляют на
20 мин при периодическом перемешивании. Растворы фильтруют через бумажный фильтр в сухие
конические колбы вместимостью 100 см3, отбрасывая первые порпии фильтрата. При анализе
пробы, содержащей небольшое количество углеводов, осветление проводят непосредственно после
экстракции и гидролиза, добавляя осветляющие растворы в колбы с исходным раствором. Обьем
доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Осветленные растворы
хранят в холодильнике не более суток.
      2.3.4. Окрашивание растворов и измерение их оптической плотности
      Окрашивание осветленных растворов экстракта и гидролизата, а также растворов сравнения
проводят в термостойких пробирках с притертыми пробками.
      В пробирки дозатором, шприцем или пипеткой с резиновым баллончиком вливают К) см3
антронового реактива. 'Затем в одну серию пробирок вносят по 2 см3 осветленных растворов
экстракта, в другую — гидролизата и в третью — растворов сравнения глюкозы. Пробирки закры­
вают притертыми пробками и содержимое тщательно встряхивают. Растворы должны быть прозрач­
ными. Если раствор мутный, то вместо 10 см3 антронового реактива используют 15 см-3, повторяя
окрашивание. Затем пробирки открывают и помешают в кипящую водяную баню, устанавливая
штатив с пробирками так, чтобы его дно не касалось дна бани. При нагревании следят, чтобы в
пробирки не попала вода. При нагревании появляется голубовато-зеленое или зеленое окрашива­
ние. Через 20 мин пробирки вынимают из бани, охлаждают в водопроводной воде и через 30 мин
измеряют оптическую плотность растворов относительно нулевого раствора сравнения при длине
волны 625 им (красный светофильтр), используя кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10
или 20 мм.
      Содержание углеводов в исследуемой пробе определяют по градуировочному графику, постро­
енному по результатам измерения оптической плотности растворов сравнения глюкозы. Язя
построения градуировочного графика по оси абсцисс откладывают массу глюкозы в миллиграммах,
содержащуюся в 2 см3 растворов сравнения, на оси ординат — соответствующую ей оптическую
плотность. Измерения проводят в диапазоне оптической плотности 0.15—0.60. Если исходные
растворы, приготовленные без разведения, при измерении имеют очень низкую оптическую
плотность, анализ повторяют, увеличивая навеску пробы или объем растворов экстракта, гидроли­
зата, используемых для осветления. Если получают высокую оптическую азотность, исследуемые
растворы перед окрашиванием разбавзяют нулевым раствором.
      2.3.5. Обработка результатов
      2.3.5.1 Массовую долю растворимых углеводов (сахаров) в испытуемой пробе (Л) в процентах
вычисляют по формуле

                                           т V - Уг 100
                                      X=
                                            ЯгЪ-2       ’

где от — масса сахара, содержащаяся в 2 см’ экстракта, определенная по градуировочному графику,
         мг;
     V — объем исходного неос ветле иного экстракта, см3;
    У, — объем осветленного экстракта, см3 (100 см3);
    У2 — объем исходного экстракта, взятого для осветления, см3;
     2 — объем осветленного экстракта, взятого для окрашивания, см3;
   от, — масса навески, мг;
  100 — коэффициент пересчета в проценты.
                                               12