ГОСТ 25999-83

ГОСТ 25999-83

             М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й         С Т А Н Д А Р Т




                 ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ
                          И ОВОЩЕЙ
                   МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ В, И В2



                                  Издание официальное




                                            Москва
                                        Стандартинформ
                                              2010




шарфы фото

УДК 664.841:543.06:006.354                                                                    Группа 1159

М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                                         С Т А Н Д А Р Т


 ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ
          Методы определения витаминов В, и В,                                   ГОСТ
                                                                              25999-83
          Products o f fruits and vegetables processing.
         Methods of determination of vitamins B( and Bi

MKC 67.080.01
ОКСТУ 9109

                                                                                   Дата введения 01.01.85


     Настоящий стандарт распространяется на пищевые консервированные продукты из овощей,
фруктов, ягод, овощей с мясом, крупами, молоком и устанавливает методы определения витаминов
В,и В2.
     Предел обнаружения массовой доли витамина В, составляет 0.008 10-3 %. витамина В, —
0,005 10“ 3 % при доверительной вероятности Р = 0,95.
                                              1. ОТБОР ПРОБ
      1.1. Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 8756.0.
                     2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В, (ТИАМИНА)
     2.1. С у щ н о с т ь м е т о д а
     Сущность метода основана на кислотном и ферментативном гидролизе связанных форм
витамина, очистке гидролизата на колонке с катионитом, окислении тиамина втиохром и измерении
интенсивности флуоресценини при длинах волн 320-390 нм возбуждающего и 400—580 нм излуча­
емого света.
     2.2. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы
      Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*. 1 класса точности, с наибольшим
пределом взвешивания 200 г.
      Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*. с наибольшим пределом взвешивания
500 г и допускаемой погрешностью ±0.01 г.
     pH-метр лабораторный с диапазоном измерений величины pH от 4 до 9 и допускаемой
погрешностью ±0.05 pH в диапазоне измерений.
     Термостат, обеспечивающий поддерживание температуры 37 'С , с погрешностью ±0,5 *С.
     Флуорометр, с основной приведенной погрешностью не более 2 %.
      Электрошкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание температуры 100 "С,
с погрешностью ±8 *С.
      Баня водяная.
      Воронки делительные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50 или 100 см3.
      Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром от 56 до 150 мм.
      Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100. 250. 1000 см3.
      Колбы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 250 см3.
      Колонки для хроматографии. Состоят из соединенных между собой стеклянных трубок
различного диаметра. Верхняя часть колонки должна быть дтиной 9—10 см и внутренним диаметром
2,5—3.0 см, нижняя — длиной 14—15 см, внутренним диаметром 0,6—0,7 см. Колонку должны
закрывать краном. При отсутствии крана в колонке она должна состоять из трех трубок: две верхние

      * С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104—2001. С 1 января 2010 г. на территории Российской Федераиии
действует ГОСТ Р 53228-2008.
Издание официальное                                                               Перепечатка воспрещена
                                                                      ©> Издательство стандартов, 1983
                                                                        © СТАНДАГГИНФОРМ, 2010

                                                      113

С. 2 ГОСТ 25999-83

трубки должны иметь те же параметры, нижняя является капиллярной трубкой длиной 2,5—3,0 см,
внутренним диаметром 0.10—0,15 см.
      Палочки стеклянные по ГОСТ 25336.
      Пипетки мерные лабораторные стеклянные по НТД вместимостью 1, 2. 5. 10, 20 см3.
      Прибор для перегонки на шлифах.
      Пробирки градуированные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 20, 25 см3.
      Стаканы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50, 200 см3.
      Цилиндры мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 10. 25, 50, 100,
250 см3.
      Бумага индикаторная универсальная.
      Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
      Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
     Аммоний роданистый по ГОСТ 27067, раствор с массовой долей 50 %.
      Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206, раствор с массовой долей 1 %. Хранят в темной
склянке в течение двух дней.
      Кислота соляная по ГОСТ 3118, растворы с молярной концентрацией с (НС1) = 0,1 моль/дм3
и объемной долей 50 %.
      Калий хлористый по ГОСТ 4234, раствор с массовой долей 25 % в растворе соляной кислоты
с (Н О ) = 0,1 моль/дм3.
      Кислота уксусная по ГОСТ 61, ледяная и раствор с массовой долей 3 %.
      Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, растворы с массовой долей К) и 30 %.
      Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199, насыщенный раствор. Готовят растворением
200 г соли в 300 см3 дистиллированной воды.
      Катионит КРС-1п, КРС-ЗпТ40 или КРС-Хп, фракция 0,5—1,0 мм.
      Препарат ферментный амилоризин НЮХ по ГОСТ 26142.
      Препарат ферментный пектаваморин П10Х по НТД.
      Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016 (или «-бутиловый, изоамиловый). Перед использованием
измеряют интенсивность флуоресценции. При наличии флуоресценции спирт очищают перегонкой.
     Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*.
     Тиамина хлорид (или тиамина бромид), растворы с массовыми концентрациями 0.1; 0,001;
0,0001 г/дм3.
      Фермент пепсин.
      2.3. П о д г о т о в к а к а н а л и з у
      2.3.1. //риготов, teiiue стандартного раствора тиамина
      Раствор готовят из тиамина следующим образом: тиамин предварительно высушивают в
течение 2 ч в сушильном шкафу при 100 *С. Раствор с массовой концентрацией 0,1 г/дм3 хранят в
темной склянке в холодильнике в течение месяца. Растворы с массовыми концентрациями 0,01 и
0.0001 г/дм3 готовят вдень проведения анализа.
     Для приготовления раствора с массовой концентрацией 0,1 г/дм3 растворяют 0,100 г тиамина
в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см3, прибавляют 10 капель концент­
рированной соляной кислоты, доводят до метки водой и перемешивают.
     Для приготовления раствора тиамина с массовой концентрацией 0.001 г/дм3 1,0 см3 раствора
с концентрацией 0.1 г/дм3 отбирают в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки
дистиллированной водой и перемешивают.
     Для приготовления раствора тиамина с массовой концентрацией 0.0001 г/дм3 10,0 см3 раствора
с концентрацией 0,001 г/дм3 отбирают в мерную колбу вместимостью ИХ) см3, доводят до метки
дистиллированной водой и перемешивают.
      2.3.2. Обработка, регенерация катионита и заполнение каюнок
      Неиспользованный катионит предварительно запивают раствором соляной кислоты с объемной
долей 50 %, выдерживают в течение суток и промывают декантацией дистиллированной водой до
удаления ионов железа. Отсутствие ионов железа проверяют по раствору роданистого аммония. Для
этого в стакан вместимостью 50 см3 прибавляют 5—10 см3 воды после промывания катионита,
К) капель раствора соляной кислоты с объемной долей 50 %, 3 см3 раствора роданистого аммония.
Промытый катионит должен иметь бесцветную реакцию промывной воды.

     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652—2000.

                                                114

ГОСТ 25999-83 С. 3

      Перед заполнением колонки катионитом в нижнюю часть колонки над краном или над
капиллярной трубкой помешают небольшое количество стеклянной ваты. Для заполнения колонки
в нее наливают смесь катионита с водой после взбалтывания. Высота слоя катионита в колонке —
9—10 см.
     Для регенерации катионита после проведения анализа в колонку наливают раствор гидроокиси
натрия с массовой долей 10 %, пропускают его до выхода из колонки и затем, закрыв кран,
выдерживают 20—30 мин. При отсутствии в колонке крана на нижний конец ее должна быть надета
резиновая трубка внутренним диаметром 0,3—0.4 см и поднята на уровень слоя жидкости в колонке.
Катионит на колонке промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции по универсаль­
ной индикаторной бумаге.
      2.3.3. Приготовление окислительной смеси
      Окислительную смесь готовят смешиванием 2,0 см3 раствора железосинеродистого калия с
10.0 см3 раствора гидроокиси натрия с массовой долей 30 %.
      2.3.4. 11риготовление гидратзато
      Навеску пробы массой 50,0 г — для консервированного продукта без добавления витаминов,
20.0 г — с добавлением витаминов переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, прибавляют
150 см3 раствора соляной кислоты с (Н О ) = 0.1 моль/дм3 и нагревают на кипящей водяной бане
в течение 40 мин. Затем охлаждают до комнатной температуры и проводят ферментативный
гидролиз.
      При анализе фруктовых и ягодных консервов с большим содержанием пектиновых веществ (из
яблок, крыжовника, черной смородины и лр.) используют ферментный препарат амилоризин П I0X
и пектаваморин П10Х.
      В остальных случаях используют только амилоризин Г110Х.
      Г1редварительно устанавливают величину pH 4,2—4,5. Для этого содержимое колбы поме­
шают в стакан вместимостью 200 см3, прибавляют при постоянном перемешивании раствор
уксуснокислого натрия до нужной величины pH. Измерение величины pH производят pH-мет­
ром, после этого содержимое стакана переносят в ту же колбу вместимостью 250 см3. Затем
прибавляют 0,10 г амилоризина П10Х, или по 0,10 гамилоризина Г110Х и пектаваморина НЮХ
перемешивают, закрывают пробкой и выдерживают в термостате при 37 *С в течение 12—16 ч.
Гидролизат охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки дистиллированной водой,
перемешивают и фильтруют.
      Овошные консервы с мясом обрабатывают ферментами пепсином и амилорнзииом Л10Х. Для
этого в колбу помешают 0,10 г пепсина и выдерживают в термостате при 37 *С в течение 4 ч. Затем
устанавливают величину pH 4.2—4.5, прибапляют 0,10 г амилоризина НЮХ. перемешивают и снова
выдерживают в термостате при той же температуре в течение 12—16 ч. После этого гидролизат
охлаждают, доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют.
      2.4. П р о в е д е н и е а н а л и з а
      2.4.1. Очистка гидролизата
      Перед очисткой гидролизата катионит на колонке переводят в Н-форму. Для этого через
колонку пропускают 20,0 см3 раствора уксусной кислоты, нагретой до температуры 60—70 ‘С.
Затем в одну колонку вносят 20,0 см3 гидролизата, в другую 20.0 см3 стандартного раствора
тиамина с массовой концентрацией 0.0001 г/дм3. Скорость пропускания через колонку— не
менее 15 капель в I мин. После прохождения раствора катионит на колонке промывают
дистиллированной водой три раза по 10 см 3 и вносят 20,0 см3 раствора хлористого калия,
нагретого до температуры 60—70 “С. Собирают 20,0 см3 элюата в градуированные пробирки или
цилиндры вместимостью 20 или 25 см3.
      2.4.2. Окисление тиамина в тиох/юм
      В две делительные воронки помешают по 5.0 см3 элюата, полученного после очистки гидро­
лизата пробы. В две другие — по 5,0 см3 элюата. полученного после пропускания через колонку
стандартного раствора тиамина. 'Затем в две воронки (с элюатамн пробы и стандартного раствора)
прибавляют по 1,20 см ' окислительной смеси (окисленная форма), в две другие (с теми же
растворами) — по 1,20 см3 раствора гидроокиси натрия с массовой долей 30 % (неокисленпая
форма). Содержимое воронок перемешивают, прибавляют по 10,0 см3 изобутилового спирта и
встряхивают в течение 1 мин. Для ускорения расслаивания после взбалтывания прибавляют по
0,50 см3 этилового спирта. После расслаивания жидкостей нижний водный слой удаляют, а верхний


                                              115