ГОСТ 25755-91

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й   С Т А НД А Р Т
                                                         СОЮЗА       ССР




                                                 КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ СКОТ
                                              МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
                                                ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА

                                                         ГОСТ 2 5 7 5 5 -9 1
                                                                                     ,
                                                        Издание официальное
БЗ 1-92/18
32 р. 8 0 s.




                                              КОМИТЕТ СТАНДАРТИЗАЦИИ И МЕТРОЛОГИИ СССР
                                                              Москва

               геодезические изыскания

У Д К 636.9.001.4:006.354                                            Группа С79

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й            с т а н д а р т    С О Ю З А     ССР


              крупны й      ро гаты й   скот


           Методы лабораторной диагностики
             инфекционного ринотрахеига                          ГОСТ
                                                               25755-91
    Meat catilc. Methods of laboratory diagnostics
             of infectious rynotracheitis
ОКСТУ 9809

                                                           Дата введения 01.01.93


   Настоящий стандарт распространяется на крупный рогатый
скот и устанавливает методы диагностики инфекционного рино-
трахеита (ИРТ). вызываемого вирусом бычьего герпеса типа 1.

                                 I. ОТБОР      ПРОБ

   1.1. Пробы патологического материала берут от больных, вы­
нужденно убитых и павших животных и от абортированных пло­
дов.
    1.2. Пробы патологического материала от подозреваемых в
заболевании животных берут в период максимального проявления
у них клинических признаков (температурная реакция, угнетение,
воспалительные процессы в верхних дыхательных путях, серозные
истечения из носовой полости и глаз, вульвовагиниты и аборты
у коров, баланопастнты у быков), от вынужденно убитых и пав­
ших животных — не позднее 2 ч после убоя или падежа.
    1.3. От больных животных берут смывы со слизистых оболо­
чек носовой полости, глаз, влагалища, препуция, а также пробы
спермы, от вынужденно убитых и павших животных — кусочки
носовой перегородки, трахеи, гортани, легких, селезенки, средо­
стенные лимфоузлы, от абортированных плодов — кусочки парен­
химатозных органов и плаценты.
   1.4. Смывы берут стерильными тампонами во флаконы с 2—
5 см3 питательной среды или раствора Хенкса с добавлением ан­
тибиотиков. Кусочки органов массой до 20 г помещают в стериль­
ную посуду.

Издание официальное
                                         (6) Издательство стандартов, 1992
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен,
      тиражирован н распространен без разрешения Госстандарта СССР

С. 2 ГОСТ 23755-91

   Флаконы с пробами патологического материала (смывы и
органы), а также пробы спермы помещают в термос со льдом или
углекислотой и доставляют в лабораторию не позднее I сут с
момента их взятия.
    1.5. Допускается хранение патологического материала до нача­
ла исследований при температуре -1—б°С в течение 2—3 сут. При
температуре минус 3 0 СС и ниже патологический материал хранят
нс более 10 еут.
    1.6. Пробы спермы хранят при температуре минус 20°С не бо­
лее 5 сут.
    1.7. Для ретроспективной диагностики от 15—20 животных
берут стерильно парные пробы кровн объемом не менее 5 см*.
Первую пробу отбирают на 2—3 сут болезни, вторую от тех же
животных через 18 21 сут.
   Из крови методом отстоя получают сыворотку, замораживают
при минус 10—30 СС и хранят до получения второй пробы.
   1.8. Сыворотки должны быть исследованы одновременно, нс
позднее 3 сут после последнего взятия крови. Сыворотки кропи,
замороженные при температуре минус 2 0 °С и ниже, хранящие
более 3 мес.

                     2. М ЕТО ДЫ   И С С ЛЕД О ВАН И И

   2.1. М е т о д в ы д е л е н и я в и р у с а
   Сущность метода заключается в выявлении иитопатнчсского
действия (ЦПД) вируса в культуре клеток и его последующей
идентификации.
   2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы
   Центрифуга с частотой вращения 5000 мни-1.
   Холодильник, обеспечивающий температуру 4 и 8 СС.
   Пробирки бактериологические вместимостью 20 см1.
   Пробирки центрифужные вместимостью 10 см3.
   Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 н 10 см3 по
ГОСТ 25336.
   Флаконы пенициллиновые вместимостью 10—15 см3.
   Термостат, обеспечивающий температуру (37±0,5) °С.
   Раствор Хенкса. .
   Питательная среда для культуры клеток — 0.5 %-ный раствор
гидролизата лактальбумнна на растворе Хснкса или среда Ле 199.
   Антибиотики (стрептомицин сульфат, бензнлпенициллин на­
триевая соль).
   Культура клеток первично трипсиннзнрованнон почки эмбриона
коровы или овцы, почки теленка или овцы, тсстикул бычка и их
субкультуры или перевиваемые линии клеток ПТ-80, ПТ, МДВК,
ТР. ЛЭК.

ГОСТ 2 3755-91 С. 3

    Вирус инфекционного ринотрахеита с титром не ниже 1040
ТЦД 50/см8.
    Сыворотка гилернммунная специфическая к вирусу инфекци­
онного ринотрахеита с титром не ниже 1:64.
    Сыворотка отрицательная, нс содержащая антител к вирусу
инфекционного ринотрахеита.
    2.1.2. Подготовка к исследованию
    2.1.2 1. О б р а б о т к а с м ы в о в
    Флаконы с тампонами встряхивают в течение 2—3 мин. там­
поны отжимают во флаконы и удаляют. Содержимое флакона
встряхивают и затем            центрифугируют с частотой вращения
3000 мин 1 в течение 10—15 мин. Надосадочную жидкость пипет­
кой переносят в пробирку, добавляют антибиотики, выдерживают
от 2 до 4 ч при 4 X и используют для заражения культуры кле­
ток.
    2.1.22. О б р а б о т к а о р г а н о в
    Из кусочков органов готовит 10—20 %-ную суспензию на ра­
створе Хс-нкса, содержащем антибиотики. Суспензию центрифуги­
руют с частотой вращения 5000 мин 1 в течение 20 мин. Надоса­
дочную жидкость пипеткой переносят в стерильную пробирку,
выдерживают при 4 —6°С в течение 16—18 ч. затем используют
для заражения культуры клеток..
    2.1.2.3. О б р а б о т к а с п е р м ы
    Пробы спермы размораживают, разбавляют 1:10 питательной
средой для культур клеток с добавлением антибиотиков, замора­
живают 2—3 раза при минус 15—40 °С, оттаивают при 37—38 °С.
центрифугируют с частотой вращения 2000 мин-1 в течение
 10 мин. надосадочную жидкость используют для заражения куль­
туры клеток.
    2.1.3. Проведение исследовании
    Для выделения вируса из пробирок с монослоем культуры кле­
ток удаляют росгоную среду и вносят по 0,2—0,3 см5 каждого
испытуемого материала — по 4 --5 пробирок на каждую пробу.
 Пробирки выдерживают при 37°С в течение 1 ч, затем из них
удаляют внесенную испытуемую жидкость. Монослой 2—3 раза
ополаскивают питательной средой для культур клеток с антибио­
тиками и добавляют по 1,0 cmj той же среды.
     Контролем служат 4 —5 пробирок с незаряженной культурой
клеток, в которых проводят смену ростовой питательной среды.
 Пробирки с испытуемым материалом и контрольные инкубируют
 при 37 X о течение 5—6 сут, ежедневно мнкроскопируя для учета
 ЦПД вируса.
    Для выделения вируса проводят три последовательных пасса­
жа с интервалом 5—6 сут. Перед проведением повторного пассажа
 пробирки с испытуемым материалом замораживают при минус
2 З а х 361 '