ГОСТ 25581-91

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                 С Т А НД А Р Т
                                                СОЮЗ А ССР




                                            ПТИЦА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ,
                                                СИНАНТРОПНАЯ, ДИКАЯ
                                                  И ЭКЗОТИЧЕСКАЯ
                                           МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА

                                                        ГОСТ 25581-91
БЗ 9-91/1009




                                                        Издание официальное
24 руб.




                                             КОМИТЕТ СТАНДАРТИЗАЦИИ И МЕТРОЛОГИИ СССР
                                                             Москва

               инженерное проектирование

УДК 636.5.001.4 : 008.354                                         Группа С79

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й          С Т А Н Д А Р Т   СОЮЗА        ССР


      ПТИЦА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ.
   СИНАНТРОПНЛЯ, ДИКАЯ И ЭКЗОТИЧЕСКАЯ
       Метопы лабораторной диагностам гриппа                 ГОСТ
    Birds, poultry, synanthropos. game and exotic.         25681—91
   Methods of Avian Influenza laboratory diagnostics

ОКСТУ 9209

                                                       Дата введения 01.01.93


   Настоящий стандарт распространяется на сельскохозяйствен­
ную, еннантропную, дикую и экзотическую птицу и устанавливает
методы лабораторной диагностики гриппа.

                               I. ОТБОР ПРОБ

    1.1. Для проведения исследований отбирают пробы патологи­
ческого материала:
    головной мозг н селезенку или гортанные и клоакальные смывы
от больной птицы в первые два дня заболевания или от птицы
в агональном состоянии. Патологический материал помещают в тер­
мос со льдом или раствор глицерина с массовой долей 50 %, при­
готовленный на физиологическом растворе с pH 7,2—7,4;
   сыворотку крови больной н переболевшей птицы в количестве
1—2 см* (не менее 20 проб).
    1.2. Пробы крови для определения антител в сыворотке берут
стерильно из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физи­
ологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгу­
стка при комнатной температуре или термостате при 37°С в те­
чение 1—2 ч, затем осторожно обводят иглой или пастеровской пи­
петкой по стенке пробирки и оставляют на 16—18 ч при темпера­
туре 2—4°С Образовавшуюся прозрачную без гемолиза сыворот­
ку отсасывают пипеткой в стерильные пробирки.



Издание официальное
                                     <g) Издательство стандартов, 1992
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен,
       тиражирован и распространен без разрешения Госстандарта СССР

С 2 ГОСТ 25381-91

    Для ретроспективной диагностики используют парные пробы
сывороток крови, полученные от больных и подозреваемых п за­
болевании птиц в начале заболевания и через 4—10 сут.
    1.3. Пробы патологического материала и сывороток крови до­
ставляют в лабораторию в термосе со льдом. К пробам прилагают
сопроводительный документ, содержащий сведения о клинике, эпи­
зоотологии заболевания, а также данные о результатах вскрытия
трупов.
    1.4. До начала лабораторного исследования патологический ма­
териал хранят в рефрижераторе при температуре 2—4®С не более
24 ч.
    1.5. Сыворотку крови исследуют в течение 3 сут со дня взятия
крови. 8 случае исследования сыворотки в более позднкс сроки
ее замораживают или консервируют путем добавления мертнолата
натрия до концентрации 1 : 10000

                    2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

    2.1. Метод выделения вируса
    Сущность метода заключается в выделении вируса на эмбри­
 онах кур и последующей его идентификации.
    2.1.1. Аппаратура, материалы и реактипы
    Термостат с температурой нагрева 37—38 °С.
    Центрифуга с частотой вращения 3000- '.
    Центрифужные стаканы вместимостью 50—100 см3.
    Весы лабораторные с погрешностью взвешивания не более
0.1 г.
    Размельчитсль тканей.
    Овоскоп.
    Колбы конические стеклянные вместимостью 100 см3 по ГОСТ
 1770.
    Пробирки стеклянные вместимостью 10, 15, 20 см3 по ГОСТ
25336.
    Пипетки пастеровские или пипетки стеклянные измерительные
вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 по ГОСТ 20292.
    Ступка фарфоровая.
    Шприцы с иглами.
    Стекло кварцевое.
    Натрий хлористый по ГОСТ 4233, раствор с массовой долей
0.8 % или другие дезинфицирующие средства.
    Натрий лимонно-кислый 3 х замещенный по ГОСТ 22280, ра­
створ с массовой долей 5 %.
    Иод по ГОСТ 4159. раствор с массовой долей 5 % на физиоло­
гическом растворе.
    Антибиотики — пенициллин и стрептомицин.
    Среды питательные МПБ и МПА.

ГОСТ 25581-91 С. 3

    Парафин.
   Развивающиеся эмбрионы кур 9—10-суточного возраста.
   Эритроциты кур на физиологическом растворе. 0.7 и I %-ная
взвесь, которую готовят следующим образом: кровь берут у пе­
тухов или кур в возрасте старше б мес из подкрыльцовой вены
в колбу с физиологическим раствором в равных объемах с ра­
створом лимонно-кислого натрия.
   Полученную кровь трижды отмывают физиологическим раство­
ром. осаждая эритроциты центрифугированием с частотой враще­
ния 1500_! в течение 10 мин Из осадка эритроцитов готовят 0,7
или 1 %-ную суспензию на физиологическом растворе и хранят не
более 5 сут при температуре 4 °С.
   2.1.2. Подготовка к исследованию.
   2.1.2.1.    Обработка          органов     патологического
материала
    Патологический материал стерильно извлекают из глицериново­
го раствора, трехкратно ополаскивают стерильным физиологичес­
ким раствором и гомогенизируют с помощью размельчителя тка­
ней или размельчают в ступке с кварцевым стеклом. Гомогенат
разводят I : 10 стерильным физиологическим раствором и центри­
фугируют с частотой вращения 1500—2000-’ в течение 15 мин.
Надосадочную жидкость переносят в стерильные пробирки, добав­
ляют 1000 ед/см3 стрептомицина и выдерживают при комнатной
температуре 60 мин.
   2.1.3. Проведение исследования
   Д ля исследования одной пробы материала (надосадочная
10%-.нля суспензия) заражают не менее 10 эмбрионов. Перед за­
ражением "эмбрионы предварительно овосколируют, отмечая гра­
ницу пуги и участок между кровеносными сосудами для прокола
скорлупы и инокуляции исследуемого материала. Скорлупу со сто­
роны пуги и место прокола дезинфицируют раствором йода и
фламбнруют. В центре воздушного пространства и в месте введе­
ния исследуемого материала делают пробойником отверстия, за­
тем через боковое отверстие вводят 0,2 см3 исследуемого матери­
ала на глубину 2—3 мм в аллантоисную полость. Одновременно
делают его высевы по 0,2 см3 на питательные среды МПБ и МПА,
которые помещают в термостат при 37—38 °С. Контролем служат
5 незараженных эмбрионов. После заражения эмбрионов отвер­
стия в скорлупе заливают парафином. Зараженные и контрольные
эмбрионы инкубируют в термостате в течение 24—96 ч при тем­
пературе 37—38 °С и относительной влажности 60—70% . В про­
цессе инкубации эмбрионы овоскопнруют два раза в сутки, по­
гибшие— сохраняют в холодильнике при 4°С. Через 96 ч инкуба­
ции все эмбрионы вскрывают после предварительного охлаждения
в холодильнике при 4°С в течение 10—12 ч.