ГОСТ 25311-82

Группа С19


                   М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                               С Т А Н Д А Р Т



                              МУКА КОРМОВАЯ ЖИВОТНОГО
                                   ПРОИСХОЖДЕНИЯ
                                                                                          гост
                             Методы бактериологического анализа                        2 5 3 1 1 _82
                                   Feeding flour of animal origin.
                                  Methods of bacteriological analysis

                   О КСГГУ 9209

                                                                                           Дата введения 01.07.83


                        Настоящий стандарт распространяется на кормовую муку животного происхождения и уста­
                   навливает методы бактериологического анализа:
                        определение общего количества микробов;
                        определение присутствия бактерий группы кишечной палочки;
                       определение присутствия бактерий из рода сальмонелл;
                        определение присутствия бактерий анаэробов.

                                                      1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
                        1.1. Отбор проб для бактериологического анализа проводят по ГОСТ 17536 сухим стерильным
                   щупом в сухую стерильную стеклянную банку.
                        1.2. Масса точечной пробы должна быть не менее 100 г. Масса объединенной пробы должна
                   быть не менее 500 г.
                        1.3. Объединенную пробу тщательно перемешивают и делят пополам. Каждую часть упаковы­
                   вают в стерильную стеклянную банку. Одну банку направляют в лабораторию, а другую сохраняют
                   на предприятии до окончания анализа.
                        1.4. При отборе проб составляют акты в двух экземплярах, которые должны содержать
                   следующие данные: наименование предприятия-изготовителя, номер партии, вид и массу продукта,
                   количество упаковочных единиц, дату изготовления продукции и отбора проб.
                                               2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ
                        2.1.      Для проведения бактериологических анализов применяют следующие аппаратуру, мате­
                   риалы и реактивы:
                        автоклав;
                        анаэростат;
                        весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* 2-го класса точности с наибольшим
                   пределом взвешивания 200 г;
                        гомогенизатор бактериологический, смеситель или аппарат для измельчения тканей с частотой
                   вращения не менее 8000 об/мин:
                        дистиллятор;
                        лупы измерительные с увеличением 3х и 5х по ГОСТ 25706;
                        лампы ртутно-кварцевые;
                        микроскоп марок МБИ и МБР по НТД или других аналогичных марок;
                        мясорубку бытовую по ГОСТ 4025;
                        потенциометр по ГОСТ 7164;
                        прибор для подсчета колоний;
                        термостат электрический с автоматическим терморегулятором;
                        * С 1 июля 2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104—2001.
                   Издание официальное                                                    Перепечатка воспрещена

                                                                        68




авторский надзор

ГОСТ 25311-82 С. 2

     холодильник электрический бытовой по ГОСТ 16317;
     шкаф сушильный лабораторный;
     агар микробиологический по ГОСТ 17206;
     агар сухой с эозином метиленовым синим (среда Левина);
     агар Эндо сухой бактериологический;
     агар Плоскнрева сухой бактериологический;
     агар сухой висмут-сульфит;
     альфаиафтиламин по НТД;
     алхилбензол сульфонат;
     баню водяную с терморегулятором;
     бульон мясо-пептонный по ГОСТ 20730;
     бумагу парафинированную по ГОСТ 9569;
     бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;
     вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;
     воду мясную по ГОСТ 20729;
     воду дистиллированную по ГОСГ 6709;
     воронки стеклянные по ГОСТ 25336;
     дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171;
     желатин пищевой по ГОСТ 11293;
     колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336;
     кристаллизатор с мостиком;
     марлю бытовую по ГОСТ 11109;
     марлю медицинскую по ГОСТ 9412;
     масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;
     масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164;
     мел химический осажденный по ГОСТ 8253;
     мясо-говядину по ГОСТ 779;
     набор углеводов для исследования ферментации микробов кишечной группы (большой);
     набор адсорбированных поливалентных сазьмонеллезных 0-сывороток основных пяти групп
(А, В, С, Д, Е) и редких групп;
     набор 0-моно и поливалентных агглютинирующих колисывороток:
     наточки стеклянные;
     парафин по ГОСТ 23683;
     пептон венгерский фирмы «Рихтер*, чешский «Спофа*;
     пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805;
     песок кварцевый для тонкой керамики по ГОСТ 7031;
     печень говяжью:
     пинцеты для предметных стекол:
     пипетки вместимостью 1. 2, 5, 10 см3 с ценой деления 0.1 см3 с широким концом;
     пипетки Мора вместимостью 25, 50 см3;
     пипетки пастеровские;
     поплавки для пробирок и колб длиной 20, 45 и 75 мм и диаметром 5. 9 и К) мм соответственно;
     препарат с индикатором ВР и глюкозой;
     пробирки стеклянные бактериологические по ГОСТ 25336;
     пробки корковые по ГОСТ 5541;
     пробки резиновые конусные по НТД;
     проволоку из никелевых сплавов диаметром 0,3—0,5 мм по ГОСТ 1791;
     стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672;
     стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;
     ступки фарфоровые с пестиком по ГОСТ 9147;
     среду КОДА сухую питательную;
     флаконы Сокслета:

                                               69

С. 3 ГОСТ 25311-82

     цилиндры мерные наливные I—ИЮ. 1—250, 1—500 по ГОСТ 1770;
     колбы мерные наливные 1—100—2, 1—250—2, 1—500—2 по ГОСТ 1770;
     часы песочные на I, 2, 5 мин;
     чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336 типа ЧБН (чашки Петри);
     шпатели Дригальского;
     штативы для пробирок;
     шумовку;
     яйца куриные;
     бриллиантовый зеленый:
     бром крезол пурпур:
     бромтимоловыЙ синий;
     генииианвиолет;
     глицерин по ГОСТ 6259, х.ч.;
     глюкозу кристаллическую гидратную по ГОСТ 975. х.ч.;
     железо хлористое по ГОСТ 4147;
     йод по ГОСТ 4159, х.ч.;
     калий йодистый по ГОСТ 4232;
     калий фосфорнокислый однозамещепный по ГОСТ 4198. х.ч.;
     калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493, ч.д.а.;
     калий едкий;
     кальций углекислый по ГОСТ 4530;
     кислоту розоловую;
     кислоту щавелевую;
     кислоту сульфаниловую по ГОСТ 5821;
     лактозу, х.ч.;
     магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209. х.ч.;
     магний сернокислый 7-водный по ГОСТ 4523;
     маннит по НТД, х.ч.;
     метиленовый голубой;
     мочевину по ГОСТ 6691, х.ч.;
     натрия гидроокись по ГОСТ 4328;
     сахарозу по ГОСТ 5833, х.ч.;
     спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*:
     спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300;
     фенол рот:
     фуксин основной для микробиологических целей;
     фуксин (основной и кислый) для микробиологических целей;
     хинозол;
     натрий сернистокислый безводный по ГОСТ 195.
     (Измененная редакция, Изм. .\е 1).

                                   3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
     3.1.       П р и г о т о в л е н и е п и т а т е л ь н ы х с р е д : пептон ной воды, мясо-пептонного агара
(МПА), сред Эндо, Крумвиде—Олькенникого в модификации Ковальчука, Киллиана. Кауфмана,
Мюллера, магниевой среды, селенитового бульона, Гнсса, «ХБ» (хинозол-бромкрезол-пурпуровый),
хлористо-магниевой среды «М* (модифицированной), среды Хейфеца. Булира, Кесслера, Эйкмана,
Левина, Ресселя, Плоскирева, висмут-сульфит агара, КОДА, Крумвиде—Олькеннцкого, полужид­
кого агара, кровяного агара по Цейслеру, среды Китг—'Тароцци, короткого пестрого ряда среды
Вильсон—Блера — производят по ГОСТ 9958. ГОСТ 18963, ГОСТ 21237 и по методикам, утверж­
денным в установленном порядке.
     (Измененная редакция, Изм. Ss 1).
     * В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652—2000.

                                                    70

ГОСТ 25311-82 С. 4

     3.2. П р и г о т о в л е н и е и с п ы т у е м о й в з в е с и и р а з в е д е н и й
     От обшей пробы отвешивают на лабораторных весах навеску массой 50 г и помешают ее в
стерильную колбу или стакан гомогенизатора, содержащий 450 см3 стерильного физиологического
раствора, и тщательно перемешивают в течение 30 мин, получая основное десятикратное разведение.
После отстаивания в течение 10—15 мин из надосадочного слоя берут пипеткой 1 см3 жидкости,
вносят в пробирку с 9 см3 стерильного физиологического раствора и получают последующее
разведение. Из этой пробирки готовят последующие разведения (тысячекратное и т.д.).

                                      4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

     4.1. О п р е д е л е н и е о б щ е г о к о л и ч е с т в а м и к р о б о в в I г м у к и
     4.1.1. Метод основан па способности живых бактериальных клеток образовывать макроколо­
нии при оптимальных условиях культивирования на питательных средах.
     4.1.2. По 1 см3 каждого разведения вносят в стерильные бактериологические чашки и заливают
10—15 см3 стерильного, расшгааленного и охлажденного до 45 *С мясо-пептонного агара. После
застывания среды чашки помещают (вверх дном) в термостат при температуре (30.0±0,5) "С на 72 ч.
     (Измененная редакция, Изм. .\ь 1).
     4.1.3. Обработка результатов
     Выросшие на чашках колонии подсчитывают, умножают на кратность соответствующего
разведения. За общее количество микроорганизмов в 1 г муки принимают среднее арифметическое
результатов двух смежных разведений.
     4.2. О п р е д е л е н и е п р и с у т с т в и я б а к т е р и й г р у п п ы к и ш е ч н о й п а л о ч к и
     4.2.1. Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки расщеплять маннит
и лактозу, образовывать на средах «ХБ» и Хейфеца кислые продукты, изменяющие цвет индикаторов,
входящих в состав этих сред.
     (Измененная редакция, Изм. № 1).
     4.2.2. По I см3 каждого разведения вносят (по выбору) в пробирки, содержащие по 5 см3 среды:
Эикмана, Кесслер. Булира. Хейфеца, «ХБ* или КОДА. Посевы помешают в термостат при темпе­
ратуре 43 *С для первых пяти сред и 37 'С для последней.
     4.2.3. Через 24 ч учитывают рост на средах Эйкмана, Булира по помутнению среды и образо­
ванию газа, на средах Хейфеца, «ХБ» и КОДА — по изменению цвета сред.
     (Измененная редакция, Изм. № 1).
     4.2.4. Из пробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев в количестве 0.1 —0.2 см3
на плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо. Левина) и выдерживают в термостате
при температуре 37 ’С в течение 18—24 ч.
     Типичные колонии Е. Coli характеризуются круглой формой, выпуклой или слегка приподня­
той в центре поверхностью, ровными краями, розового, красного или малинового цвета с металли­
ческим блеском или без него на среде Эндо и фиолетового или черного — на среде Левина.
      Выросшие изолированные колонии (не менее 4) пересевают на мясо-пептонный бульон,
выдерживают в термостате при температуре 37 *С в течение 18—24 ч. После этого одну часть
пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические
среды, заражения мышей, вторую —для приготовления кипяченого антигена.
     4.2.5. У выделенных культу р изучают морфологические, культурально-биохимические и пато­
генные свойства с целью проведения их родовой дифференциации. Культурально-биохимические
свойства изучают по комплексу ЛИМАЦ (лактоза+иидол+метилрот+реакция фогес Проскауэра-,
цитратно-аммонийные соли +).
     Одновременно с определением морфологических, культурально-биохимических и патоген­
ных свойств бактерий проводят серологическую типизацию культур кишечной палочки по
0-антигену.
     Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую
культуру (пробирку со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором,
доводят суспензию бактерий до концентрации 5—6 млрд/см3, кипятят в водяной бане в течение I ч

                                                      71