ГОСТ 23454-79

ГОСТ 23454-79


                      М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й       С Т А Н Д А Р Т




                                          МОЛОКО

                        МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ



                                          Издание официальное




                                                 Стшдарпшфщт
                                                      2009




эксклюзивные жакеты

УДК 637.127.6:006.354                                                                                    Группа И 19

М   Е   Ж   Г     О    С   У    Д   А   Р    С   Т   В   Е    Н   Н    Ы    Й        С Т А Н Д А Р Т


                                     МОЛОКО

                  Мегоды определения ингибирующих веществ                                           ГОСТ
                                                                                                 23454-79
                                        Milk.
                      Methods far determination of the inhibitors

МКС 67.100.10
ОКСТУ 9209


Постановлением Государственного комитета СССР но стандартам ог 30 января 1979 г. .Nb 334 дата введения
установлена
                                                                                                          с 01.01.80
Ограничение срока действия снято но протоколу № 3—93 Межгосударственного совета по стандаргитании.
метрологии и сертификации (ИУС 5-6—93)

     Настоящий стандарт распространяется на молоко it устанавливает методы определения ингибиру­
ющих веществ, к которым относятся: антибиотики, формалин, перекись водорода и другие моющие,
дезинфицирующие и консервирующие вещества.
                                            I. М ЕТОД ОТБОРА П РО Б
     1.1. Методы отбора проб молока и подготовки их к анализу — по ГОСТ 9225—S4.
     До проведения анализа пробы хранят в холодильнике при температуре (6±2) *С не более суток.
     (Измененная редакция, Изм. № 2).
                       2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИ БИ РУЮ Щ И Х ВЕЩЕСТВ
                                    С ИНДИКАТОРОМ РЕЗАЗУРИНОМ
      2.1. С у щ н о с т ь м е т о д а
      Метод основан на восстановлении резазурина при развитии в молоке чувствительных к ингиби­
рующим веществам микроорганизма вида Streptococcus thermophilus.
      Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке содержание пенициллина 0.01 М Е/см';
массовую долю формалина 0.005 %; массовую долю перекиси водорода 0.01% ; стрептомицина
10 м кг/см 5; тетрациклина I м кг/см 5.
      (Измененная редакция, Изм. № 2, 3).
      2.2. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы
      Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569—89* или стерилизаторы аналогичного типа.
      Редуктаэник по нормативному документу или баня водяная, обеспечивающая регулирование
температуры от 30 до 50 *С, или баня водяная без терморегуляции, помещаемая в термостат.
      Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 30 до 50 *С с отклонением от заданной
±1 "С.
      Холодильник бытовой по ГОСТ 16217—83.
      Термометры стеклянные жидкостные (нертутные) типа Б. диапазон измерения температуры от
0 до 100 *С по ГОСТ 28498-90.
      Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешива­
ния 200 г по ГОСТ 24104-88**.
     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935—2002 (ЕН 285—%).
     ** С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104—2001.
И манне официальное                                                          Перепечатка воспрещена
                Издание (август 200() г .) с Изменениями № / . 2, J, 4. утвержденными в январе 1985г.,
                  сентябре 1987г., декабре 1991 г., августе 1997г. (ИУС 4 -8 5 . 1-88. 4 -9 2 . 11-97)
                                                                                © Издательство стандартов. 1979
                                                                                 © СТАНДАРТИНФОРМ , 2009

ГОСТ 2 3 4 5 4 -7 9 С. 2

      Пробирки стеклянные типов 111 и Г12, высотой <150±5) мм и диаметром (16±1) мм по ГОСТ
25336-82.
      П ипетки 1- 1 - 1 ; 4— 1- 1 ; 2— 1- 1 0 по ГОСТ 29169-91.
      Колбы мерные вместимостью 200 см ' по ГОСТ 25336—82.
      Штатив для пробирок.
      Петля бактериологическая.
      Тара стеклянная типа IV, вместимостью 200 см ’ по ГОСТ 15844—92.
      Пробки ре типовые конусные по нормативному документу.
      Резазурино-натриевая соль по нормативному документу, основной раствор.
      Препарат сухой для контроля определения ингибирующих веществ в молоке (СКИВ) по норма­
тивному документу.
      Тест-культу ра для определения ингибирующих веществ (Streptococcus thermophilus штамм 2 КС)
по нормативному документу.
      Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72.
      Молоко обезжиренное кислотностью не более 19 Т , получаемое из коровьего молока не ниже
2-го сорта по ГОСТ 13264—88* или молоко сухое обезжиренное по ГОСТ 10970—87**, предваритель­
но восстановленное и проверенное на отсутствие ингибирующих веществ.
      Препарат бактериальный термофильного молочнокислого стрептококка (S. thermophilus штамм
Ви ) дтя определения ингибирующих веществ по нормативному документу.
      Препарат бактериальный молочнокислого термофильного стрептококка для определения ингиби­
рующих веществ в молоке «Интест» — по нормативному документу.
      (Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3, 4).
      2.3. П о д г о т о в к а к а н а л и з у
      2.3.1а. Пригото&шше стерильного обезжиренного молока
      Обезжиренное молоко разливают по 100 см3 в бутылочки или по 10 см3 в пробирки и стерилизу­
ют при температуре ( 12 1± 1) ‘С в течение (10±1) мин.
      (Введен дополнительно, Изм. № 3).
      2.3.1. Основной раствор резазурина массовой концентрации 0.0005 г/см3 готовят по ГОСТ
9225-84.
      (Измененная редакция, Изм. № 2).
      2.3.2. Приготовление коллекционной тест-культуры
      2.3.2.1. Для восстановления активности культуры бутылочку со 100 см3обезжиренного стерилизо­
ванного молока подогревают до температуры (43± I ) "С. Во флакон с сухой тест-культурой добавляют
от 5 до 7 см ' стерилизованного молока и тщательно перемешивают. Содержимое флакона вносят в
бутылочку с молоком, подготовленным как указано выше, и перемешивают.
      Термостатируют при температуре (41 ± 1) *С в течение 12— 18 ч до образования плотного сгустка,
затем охлаждают до температуры (6±2) *С и используют для приготовления коллекционной тест-
культуры.
      2.3.2.2. Для приготовления коллекционной тест-культуры в пробирку с 10 см ' стерильного обез­
жиренного молока вносят 1 петлю культуры, приготовленной по п. 2.3.2.1, и выдерживают в термос­
тате при температуре (41 ± 1) ’С в течение 16—18 ч.
      Коллекционную культуру хранят при температуре (6±2) ’С и перевивают через 10—14 сут.
      Через 3—4 переедлки ее снова готовят из сухой.
      Допускается использовать культуру дольше, если она не утратила своей активности и по микро­
скопическому препарату соответствует предъявленным требованиям (продолжительность сквашивания
при перевивке 16—18 ч, сгусток плотный: консистенция однородная, допускается мягкая крупитча-
тостъ или вязкая; в поле зрения микроскопа в препарате тест-культуры — диплококки одиночные или
собранные в цепочки).
      2.3.3. Приготовление рабочей тест-культуры
      2.3.3.1.       Рабочую тест-культуру готовят из коллекционной в пробирках или бутылочках в зависи­
мости от необходимого количества или из сухого бактериального препарата термофильного молочно­
кислого стрептококка для определения ингибирующих веществ.


     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52054—2003.
     м На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52791-2007.

С. 3 ГОСТ 2345 4 -7 9

     2.3.3.2. При приготовлении рабочей тест-культуры из коллекционной в пробирку с 10 см1
стерильного обезжиренного молока вносят I петлю коллекционной тест-культуры, а в бутылочку со
100 см5 стерильного обезжиренного молока вносят 1 каплю коллекционной тест-культуры и выдержи­
вают в термостате при температуре (4 1± 1) *С 16— I8 ч до образования плотного сгустка.
      Полученную рабочую тест-культуру используют для проведения анализа.
      В случае необходимости культуру пом етаю т в холодильник при температуре (6±2) *С и исполь­
зуют в течение суток.
      Непосредственно перед применением рабочую культуру перемешивают путем интенсивного встря­
хивания.
     (Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3).
     2.3.3.3. При приготовлении рабочей культуры из сухого бактериального препарата во флакон с
препаратом добавляют стерильной пипеткой 10 см3 стерильной или кипяченой дистиллированной
воды. Флакон закрывают пробкой и его содержимое тщательно перемешивают до получения однород­
ной взвеси.
      Культуру используют для проведения анализа.
     Одна порция (флакон) культуры, приготовленной из препарата, предназначена для анализа
30 проб исследуемого молока. При необходимости культуру хранят при температуре (6±2) *С и исполь­
зуют в течение не более 8 ч.
      При приготовлении рабочей культу ры из сухого бактериального препарата «Интест* во флакон с
препаратом добавляют стерильной пипеткой 10 см3 стерильной или кипяченой дистиллированной
волы, подогретой до температу ры (45± 1) “С. Флакон закрывают пробкой и его содержимое тщательно
перемешивают до получения однородной взвеси.
      Полученную бактериальную суспензию используют для проведения анализов спустя 30 мин с
целью полного растворения и активизации препарата.
     Одна порция (флакон) культуры, приготовленной из препарата «Интест* предназначена для
анализа 30 проб исследуемого молока.
      При необходимости культуру хранят при температуре (6±2) *С и используют для проведения
анализов в течение не более 72 ч.
     (Измененная редакция, Изм. № 1, 2, 3, 4).
     2.3.4. Подготовка посуды и резиновых пробок
      Новую посуду кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с массовой долей соляной
кислоты от I до 2%) в течение 15 мин.
      В один конец пипетки, предназначенной для внесения тест-культу ры, вкладывают кусочек ваты.
      Посуду, предназначенную для приготовления и внесения тест-культуры, стерилизуют по ГОСТ
9225-84.
      Резиновые пробки помещают в стеклянную посуду с дистиллированной водой и стерилизуют в
автоклаве при 0,1 МПа в течение 20 мин. При отсутствии автоклава резиновые пробки кипятят непос­
редственно перед испытанием в дистиллированной воде или конденсате в течение 30 мин.
     (Измененная редакция, Изм. № 2).
     2.4. П р о в е д е н и е а н а л и з а
     2.4.1. В чистые пробирки наливают по 10 см3 исследуемого молока и закрывают стерильными
резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы сохраняют до конца анализа в холодильнике при
температуре (6±2) 'С .
      При наличии большого количества проб исследуемого молока анализ проводят сериями. Количе­
ство пробирок с исследуемым молоком в каждой серии не более 20.
     (Измененная редакция, Изм. № 2).
     2.4.2. Одновременно проводят контрольный анализ. Для этого в пробирку наливают 10 см3 восста­
новленного препарата СКИВ. Ятя получения восстановленного препарата вскрывают колпачок и проб­
ку флакона с сухим препаратом. Во флакон вносят пипеткой 10 см5 дистиллированной воды,
подогретой до температуры (50± 10) ’С, закрывают пробкой и встряхивают до полного растворения.
     2.4.3. Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой нагревают в водяной бане до
(87±2) ‘С с выдержкой К) мин, затем охлаждают до (47±1) ‘С. Затем в пробирки стерильной пипет­
кой вносят рабочую тест-культуру: 0,5 см3 приготовленной из коллекционной тест-культуры и 0.3 см 5
— из бактериального препарата.
     Содержимое пробирок тщательно перемешивают трехкратным перевертыванием. Затем пробирки
выдерживают в течение 1 ч 15 м ин при температуре (46±1) ‘С в редуктазнике или водяной бане.
     (Измененная редакция, Изм. № 3).