ГОСТ 20909.4-75

УД К 619:611-012.11:620.193.1(081.74)                                 .Группа Р39

   Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й            С Т А Н Д А Р Т      С О Ю З А     ССР




             СПЕРМА БЫКОВ НЕРАЗБАВЛЕННАЯ
             Методы биологических исследований                       ГОСТ
                    Non-diluted sperm of bulls.
                    Methods of biological tests                20909.4-75


    Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР
    от 19 сентябре 197J г. Не 2440 срои действия установлен
                                                                     с 01.07.76
                                                                    до 01.07.81

                    Несоблюдение стандарта преследуется по закону

     Настоящий стандарт распространяется на неразбавленную све-
  жепол ученную сперму быков и устанавливает методы испытаний
  биологических свойств спермы — подвижности -сперм неа. абсо­
  лютной выживаемости и выжлваомосгн спермнев в часах, осмоти­
  ческой (физиологической) резистентности, активности дегидроге­
  наз и резистентности спермнев к холодовому шоку.

                                  1.   МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

     1.1. Отбор проб — по ГОСТ 20909.1—75.
     1.2. Д ля проведения испытаний используют сперму, хранившу­
  юся при температуре 30—35*0 не более 30 мин с момента ее по­
  лучения.

                      2.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМНЕВ

     Сущность метода заключается в определении количества спер-
  миев с прямолинейным .поступательным движением.
     2.1.     О б о р у д о в а « и е -и р е а к т и в ы
     2.1:1. Для проведения испытания применяют:
     микроскоп биологический            марки МБИ или МБР по
  ГОСТ 8284—67;
     термостат ТМ-1 или другой конструкции, снабженный стандарт­
  ным контактным или нестандартным однотемпературным термо­
  метром;

 Издание официальное                                          Перепечатка воспрещена

блуза

ГОСТ 20М М —7SCrp. 2

    стерта покровные по ГОСТ 6672 —59;
    стекла предметные по ГОСТ 9284—59;
    стекла предметные с углублением;
    палочки стеклянные или пипетки пастеровские;
    натрий лимоннокислый трехза мешенный по ГОСТ 5.1314—72,
3%-ный раствор;
    «атрий хлористый по ГОСТ4233—66, 1%-ный раствор.
    2.2. П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю
    2.2.1. Подготовка и стерилизация лабораторной посуды — по
 ГОС Т 20939.2—75.
    2.2.2. Термостат включают за 20—30 мин до качала работы.
Температура л термостате должна быть 40—42°С.
    2.2.3. Предметные и покровные стекла, стеклянные палочки,
пипетки и растворы подогревают до 35—40°С.
    2.3. П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я
    2.3.1. Подвижность спермиев определяют в раздавленной капле
спермы под микроскопом в проходящем свете при увеличении
 100—180*. Более точно количество живых и мертвых спермине оп­
ределяют в счетной камере по ГОСТ 20909.3—75.
    2.3.2. Пр« определении подвижности оиермиев иод микроскопом
наносят на предметное стекло теплой стерильной стеклянной па­
лочкой или пастеровской пипеткой небольшую каплю спермы, к ко­
торой добавляют двух-четырех кратное количество 3% -«ого рачт-
пора лимоннокислого натрия. Сперму с раствором лимоннокисло­
го натрия тщательно перемешивают и накрывают покровным
стеклом. Просматривают под микроскопом весь препарат. Под­
счет •шеротев производят не менее чем в трех полях эреш я мик­
роскопа с наибольшей подвижностью спермиев. Подсчитывают ко­
личество спермиев с прямолинейным поступательным движением н
отдельно — количество спермиев с неправильным движением —
манежным (перемещение по кругу). колебательным (спермин не
перемещаются, но производят движение головкой или хвости­
ком) и мертвых спермиев.
   2.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в
    2.4.1.     Подвижность спермиев (Пс ) в баллах вычисляют по
формуле


где л — общее число подсчитанных спермиев;
    Я] — число подсчитанных спермиев с прямолинейным посту­
           пательным движением;
     10— постоянный коэффициент.
   За окончательный результат испытания принимают среднее
арифметическое результатов двух параллельных определений. Ми­
нимальной подвижностью спермиев принято считать подвижность,
равную 0,5 балла.
                                                             13

Стр   3 ГОСТ 20909.4--7S

               3.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ АБСОЛЮТНОЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ
                     И ВРЕМЕНИ ВЫЖИВАЕМОСТИ СЛЕРМИЕ8

    'Сущность метода заключается в установлении подвижттоста
спсрмисв за каждый последовательный интервал времени в про­
цессе хранения спермы после ее разбавления.
     Выживаемость спсрмисв в часах определяют но количеству
Времени, прошедшего от начала хранения спермы до ее гибели.
    3.1. О б о р у д о в а н и е и р е а к т и в ы
     3.1.1. Оборудование « реактивы — по п. 2.1:
    «глкхкоэо- нитратно -желточм а я среда — «о ГОСТ 14746—69.
     3.2. П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я
     3.2.1.Отбирают из одного эякулята или серии спермы не менее
двух проб для анализа, которые разбавляют глюкоэо-<цитратио-
желточной средой, приготавливая одно из .разведений от 1:8 до
 1:32, и сохраняют при 2—оьС.
     Подвижность сперм ней определяют через каждые 24 ч (в на­
чале хранения можно через 48 ч) по -п. 2.3. Последним днем ис­
пытания считают день, когда наблюдается единичная подвижность
слермиев и нельзя установить минимальную «подвижность спер-
миев в баллах.
     3.3. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в
     3.3.1. Абсолютную выживаемость «спермиев (S) вычисляют по
формуле
                           5==я1/| + Oj/j-f-tfj/j-K” +
где ai, а2, а3 . . . а п — подвижность спермнев за интервалы вре­
                                мени, баллы;
           <а, /г. 13. . .   — последовательные интервалы времени, в
                                течение которых подвижность спермнев со­
                                ответственно равна а,, о2. а 3. . . о „ , ч, вы­
                                числяемые но л. 3.3.2;
a J и аг12, a3l3 ...a „ t„ — выживаемость слермиев за последователь­
                                ные интервалы времени.
     За окончательный результат испытания принимают среднее
арифметическое результатов двух или -более параллельных опре­
делений. Допускаемые расхождения между двумя параллельны­
ми определениями «е должны превышать *10%. Бели из трех ил»
четырех определений одно имеет расхождение более чем на *10% .
то среднее аротфмегнческое вычисляют соответственно по двум
или трем определениям. Если из трех или четырех определений
два имеют расхождение более чем на *10% , то испытание повто­
ряют.
     При проведении пяти определений среднее зр<иф<метическое вы­
числяют по трем определениям, при шести или семи определени­
ях — по четырем, -при восьми « девяти определениях — сю пята
определениям, имеющим расхождение не более *10% .
Н

ГОСТ 20909.4—75 Crp. 4

   3.32. Интервалы времени </|, ti, / 3 . . . ) в часах вычисляют по
формуле
                      ti.ад..=»Г«41ГХ"г-«. ,
где Г — время, прошедшее от начала испытания до дня следую­
         щего испытания, ч;
    п — порядковый номер дня испытания.
   При определении выживаемости спер мне а в день испытания,
когда нельзя установить минимальную подвижность слермиев, ин­
тервал времени ( / „) в часах вычисляют по формуле


где Тнс — время выживаемости спермиев, ч, вычисляемое но
           н. 3.3.3;
   Та I — время, прошедшее от начала нспытэния до предпослед­
           него дня испытания, когда была установлена мини­
           мальная подвижность слермиев в 'баллах, ч.
   3.35. Время выживаемости cnepMOiee (Г ,;е ) в часах вычисля­
ют по формуле
                     т
                     -КС
                         — Та~ Тп~1         -т ,
                               ------------ Г I n - t .

где Т п — время, прошедшее от начала испытания до :юслед«»его
           дня ИСПЫТ8ЯВ1Я, ч.
   Результаты испытании .по определению -подвижности сиермиев
при вычислении абсолютной выживаемости и выживаемости снер-
миев в часах записывают в журнале испытаний. Форма журнала
для записи результатов .испытаний, а также примеры вычислений
абсолютной выживаемости спсрмиев, интервала времени и выжи­
ваемости слермиев в часах приведены в приложениях 1 и 2.
         4.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ (ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ)
                      РЕЗИСТЕНТНОСТИ СПЕРМИЕВ

   Сущность метода заключается в определении устойчивости
слермиев к действию гипотонического раствора хлористого натрия.
   4.1. О б о р у д о в а н и е и р е а к т и в ы
   4.1.1. Для проведения испытания применяют:
   микроскоп биологический             марки      Л1БИ или МБ!1 по
ГОСТ 8284" 67;
   термостат ТМ-1 для микроскопа;
   флаконы вместнмостыю 10—15 мл или пробирки;
   михросгипетюи стеклянные по ГОСТ 12487—67;
   колбы стеклянные            вместимостью 100—500 мл но ГОСТ
12487—67;
   стекла предметные ж> ГОСТ 9284—59;
   стекла покровные по ГОСТ 6672—59;
                                                                  15