ГОСТ 20909.2-75

У Д К t i t : 41М 1Э.11 : 576.8. 093.4( 03J 74)                               Груооа P 39

                       Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                     С Т А Н Д А Р Т     С О Ю З А   ССР



                                   СПЕРМА БЫКОВ НЕРАЗБАВЛЕННАЯ
                              Методы микробнологичвсякт исследования                           ГОСТ
                                        Non-dilutcd sperm of built
                                        Methods of microbiological                         20909 . 2 - 75 *
                                                   tests



                      Постановлением Государственного ком итет стандартов Сокета Министров СССР
                      от 1J июня 1t75 г. N9 1557 срок «ведения установлен
                                                                                           с 01.07.76
                      Проверен • 1995 г. 91остамоаленмем Госстандарта от 10.10.15 Не 5300
                      срок действия продлен                                               до 01.07.91

                                         Несоблюдение стандарта преследуется по закону

                         Настоящий стандарт распространяется на неразбавленную све-
                      жеполученную сперму быков н устанавливает методы микробио­
                      логических исследований с целью определения общего количества
                      бактерий в сперме и се колн-ткгра (коли-ирдекса).

                                                        1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

                          1.1. Отбор проб — по ГОСТ 20909.1—75.

                                          2. ОБОРУДОВАНИЕ. МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

                          2.1. Для проведения испытаний применяют:
                          потенциометр pH-340 или другой марки того же класса точ­
                      ности;
                          автоклав вертикальный;
                          шкаф сушильный;
                          термостаты;
                          микроскопы биологические марки МБИ или МРБ по ГОСТ
                      (•284—78;
                          часы песочные;
                          лупу с увеличением 8— 10х или камеру Вольфпогеля для под­
                      счета колоний;
                          прибор для подсчета колоний;
                          груши резиновые;
                  Издание официальное                                                  Перепечатка воспрещена
                              * Переиздание (август 19S8 г.) с Изменением AS 1. утвержденным
                                                в июне 1988 г. (И У С 8 -8 1 ).
                                                                                                             4

образец сертификата

С 2 ГОСТ 2М М .2—75

     чашки биологические (Петри);
    стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284—75;
    стаканчики (бюксы) по ГОСТ 25336—82;
    пипетки по ГОСТ 20292—74, колбы по ГОСТ 1770—74;
   * пробирки стеклянные по ГОСТ 25336—82;
    поплавки стеклянные;
    агар по ГОСТ 17206—84;
    пептон по ГОСТ 13805—76;
    лактозу;
    глюкозу медицинскую но ГОСТ 6038—79;
    бульон мясоиептонный (МПБ);
    маннит;
    насыщенный водный раствор нейтральрота; .
    фуксин основной, 5 и 10%-ньгй спиртовые растворы;
    нейтральный красный (нейтральрот), насыщенный водный
раствор;
    аммиак водный по ГОСТ 3760—79;
    натрий хлористый по ГОСТ 4233—77;
    натрий сернистокислый (сульфит натрия) кристаллический.
10%-ный водный раствор;
    метиленовый голубой;
    натрий углекислый безводный (кальцинированная сода) по
ГОСТ 8 3 -7 9 ;
    двухромовокислый калий по ГОСТ 4220—75;
    спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67,96% -ныв
клн спирт "этиловый гидролизный высшей очистки, 96%-ный;
    кислоту серную по ГОСТ 4204—77;
    калия гидроокись по ГОСТ 24363—80;
    калий йодистый но ГОСТ 4232—74, 0,5%-ный спнртовый р а с т ­
вор;
    йод по ГОСТ 4159-79;
  . кислоту соляную по ГОСТ 3118—77;
    генцианвиолст, 1%-ный водный раствор;
    кристаллический фиолетовый;
    масло иммерсионное по ГОСТ 13739—78;
    воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;
    порошок стиральный для хлопчатобумажной и льняной ткани;
    мыло хозяйственное 72%-ное;
    эфир петролейный.
    (Измененная редакция, Изм. Л* 1).

                      з. п о д го т о в к а к ИСПЫТАНИЯМ

  3.1. П о д г о т о в к а лабораторной    посуды и ма­
териалов
  3.1.1. Новую лабораторную посуду кипятят в течение 15 мин
5

ГОСТ 20909.2-75 С. 3

 в дистиллированной воде, подкисленной соляной кислотой до
 1—2%, или выдерживают 3—4 ч н 10%-ном растворе соляной кис­
 лоты, а затем промывают водопроводной водой и моют с помощью
ерша о растворе, содержащем на 1000 мл дистиллированной воды:
стирального порошка — 30 г и нашатырного спирта 50 мл. или в
 растворе, содержащем на 1000 мл дистиллированной воду: хо­
зяйственного мыла — 80 г (нарезанного на мелкие кусочки),
.кальцинированной соды — 40 г.
    Раствор с хозяйственным мылом кипятят до полного растворе­
 ния мыла. Затем лабораторную посуду тщательно промывают во­
 допроводной, а затем дистиллированной водой, высушивают на
доске с колышками и стерилизуют.
    3.1.2. Лабораторную посуду, бывшую в употреблении и силь­
но загрязненную, моют 2—3%-ным раствором двууглекислой или
 1—1,5%-ным раствором кальцинированной соды, оставляют на
 24 ч в хромовой смеси (смесь двухромовокислого калия и серной
 кислоты), тщательно прохыявают водопроводной, а затем дистил­
лированной водой и подвергают стерилизации.
    Предметные и покровные стекла обезжиривают погружением
 их не менее чем на 24 ч -в смесь, состоящую из равных частей
 спирта и эфира.
    Чистоту стекла вымытой .ч высушенной посуды, контролируют
 нанесением на его поверхность капли воды. При достаточном
обезжиривании капля расплывается равномерно.
    Перед стерилизацией лабораторную посуду (чашки, пипетки,
 пробирки и т. п.) завертывают в пергаментную бумагу' или ук­
ладывают в металлические пеналы. В верхний конец пипетки
 вкладывают кусочек ваты.
    Вымытую лабораторную посуду после высушивания стерили­
зуют в автоклаве при 0.1 МПа (I кгс/см2) в течение 20 мин или
 в сушильном шкафу при 160—180Х в течение 2 ч.
     (Измененная редакция, Изм. № 1),
    3.2. П р н г о т о в л е н и е с р е д и р е а к т и в о в
    3.2.1. Приготовление мясо-пептонного бульона ( МПБ)
    Парное говяжье (или конское) мясо, освобожденное от жира и
сухожилий, пропускают через мясорубку, взвешивают и залива­
 ют двойным количеством водопроводной воды, отмечают первона­
 чальный объем смеси и ставят при температуре 4—6°С на
 12—24 ч и л и выдерживают в термостате при температуре 50°С
 в течение 1 ч. Затем кипятят 30—60 мни. Мясную воду охлаж­
 дают (жир застывает и легко удаляется), фильтруют через ват­
 но-марлевый или двойной бумажный фильтр до полной прозрач­
 ности и доводят до первоначального объема, доливая водопровод­
 ную воду.
    К мясной воде добавляют 1% сухого пептона и 0,5% хлористо-
ю натрия. Устанавливают pH 7,2—7,4, добавляя насыщенный
                                                               6

С 4 ГОСТ 2V909.2— 7S

 раствор двууглекислой соды или 10%-ный раствор едкого натра.
 Раствор кипятят в течение 30 мин, доливают водой до первона­
 чального объема, фильтруют через двойной бумажный фильтр и
 окончательно устанавливают pH 7,2—7,4. Затем разливают в про­
 бирки или бутылки и стерилизуют в автоклаве 20 мин при 120°С.
 Если после стерилизации в МПБ выпадает осадок, то его фильт­
 руют вторично и снова стерилизуют.
     3.2.2. Приготовление мнсо-псптонного агара ( МПА)
     К мясо-пептон ному бульону добавляют 2% агара, предвари­
 тельно измельченного, замоченного и хорошо промытого водой, и
 киши tit на слабом огне при постоянном помешивании до полного
 растворения агара. При помутнении среды ее просветляют. Агар
 в горячем состоянии фильтруют через вату, разливают во флако­
 ны или колбы и стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение
 10—20 мин. К расплавленному МПА добавляют стерильный кон­
 центрированный (40%-ный и более) раствор глюкозы из расчета
 ее содержания в МПА в количестве 1% и дробно стерили­
зуют текучим паром по 30 мни каждый раз три дня подряд или
однократно в автоклаве в течение 30 мин при температуре
 105— 110°С.
    Вместо указанного МПА применяют также готовый сухой пи­
тательный агар, из которого готовят питательную среду в соответ­
ствии с )казаниямн, прилагаемыми к препарату, и добавляют 1%
глюкозы. Каждую новую серию сухого питательного агара обя­
зательно проверяют на качество (ростовые свойства) путем посева
разных бактериальных культур. Рост культур контролируют, вы­
севая те же культуры на МПА, который приготавливают в лабора­
торных условиях. Если рост на среде нз сухого питательного ага­
ра неудовлетворительный (колоний в посеве вырастает меньше
на 15% и более по сравнению с контролем), то к такой среде до­
бавляют в количестве 1/4—1/3 части от первоначально взятого-
объема МПБ и снова контролируют качество среды.
    3.2.3. Приготовление изотонического раствора хлористого нат­
рия
    В 1 л водопроводной воды растворяют 9,0 г хлористого натрия.
Раствор разливают в пробирки по 5 или 10 мл, учитывая, что-
после сгерилнзвцни объем в пробирках должен составлять соот­
ветственно 4,5 или 9 мл. Стерилизуют раствор при температуре
120°С в течение 20 мин.
    3.2.4. Приготовление среды Эндо
    К 100 мл 2%-ного МПА (pH 7,4—7,6), расплавленного и ох­
лажденного до 70°С, добавляют 1 г лактозы, растворенной в 5 мл
стерильной воды, прогретой в водяной бане при температуре
100СС в течение 5 мин.
7