ГОСТ 20264.4-89

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й   С Т А Н Д А Р Т
                                      С О Ю З А    ССР




                           ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ
                     МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИЛОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

                                      ГОСТ 20264.4— 89


                                      Издание официальное
БЗ 3—39/249
5 коп.




                            ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ
                                             М о ск а а
  вязаные скатерти

У Д К SJt.i 5.001.4 : 006.154                                        Группе С®9

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й           С Т А Н Д А Р Т     С О Ю З А       С С>



                  ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

          Методы определенна емилояитической
                                                                   ГОСТ
                      активности
                                                              20264.4—89
           Enzyme preparations Methods for the
             determination оi amylase activity
ОКСТУ 9291

                                                    Срок действии        с 01.07.ТО
                                                                        до 01.07.95

                   Несоблюдение стандарта преследуется по закону

   Настоящий стандарт распространяется на фермснтпьге препа­
раты и устанавливает методы определения активности амнлолн-
тического комплекса ферментных препаратов микробного проис­
хождения.

                                1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

    Методы отбора проб — по ГОСТ 20264.0.

             2.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИЛОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ (АС)

   2.1. Метод основан на гидролизе крахмала ферментами ами­
лолитического комплекса до декстринов различной молекулярной
массы.
   Амилолитическая активность характеризует способность ами-
лолитических ферментов катализировать гидролиз крахмала до
декстринов различной молекулярной массы и выражается числом
единиц указанных ферментов в 1 г препарата.
   За единицу амилолитической активности (АС) принята спо­
собность фермента при определенных значениях температуры,
pH и времени действия катализировать до декстринов различной
молекулярной массы 1 г крахмала, что составляет 30% крахма­
ла. введенного в реакцию.
   2.2. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы , р е а к т и в ы


Издание официальное                                       Перепечатка воспрещена
    ★
                                          © Издательство стандартов, 1989

С. 2 ГОСТ 20264.4—Н


    Весы лабораторные общего назначения не ниже 2-го класса
точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ
24104.
   Колориметр фотоэлектрический лабораторный (фотоэлектро­
колориметр) по ГОСТ 12083, обеспечивающий измерения в ин­
тервалах длин волн 434—450 нм и 630—670 нм с погрешностью
± 1% абс. (по коэффициенту пропускания) или 0,01 Д (по опти­
ческой плотности) или спектоофотометр.
   Прибор для измерения pH среды в диапазоне 0—14 с погреш­
ностью измерения ±0,1 pH.
   Термостат или ультратермостат, обеспечивающий температуру
нагрева (30,0±0,2)оС.
   Баня водяная.
   Мешалка магнитная.
   Термометры по ГОСТ 215 с пределами измерения 0—55°С и
ценой деления шкалы не более 0,1°С.
   Холодильник бытовой.
   Стаканчики для взвешивания по ГОСТ 25336.
   Стаканы вместимостью от 100 до 2000 см3 по ГОСТ 25336.
   Колбы типа Кн вместимостью от 100 до 2000 см3 по ГОСТ
25336.
   Колбы мерные наливные 1 или 2-го исполнения вместимостью
100, 200, 250 н 1000 см» по ГОСТ 1770.
   Воронки типа В по ГОСТ 25336.
   Пипетки 1, 2 и 3-го исполнения вместимостью от 0,5 до 20 см*
и 100 см3 по ГОСТ 20292.
   Пробирки П1—21—200, или П 1— 16— 150. или П2—19—180.
или П2—16—150(180) по ГОСТ 25336.
   Бюретка типа I; 1, 2 или 3-го исполнения по ГОСТ 20292.
   Эксикатор по ГОСТ 25336.
   Секундомер по ГОСТ 5072.
   Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
   Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.
   Ацетатный буферный раствор с pH 4,7, приготовленный по
ГОСТ 4919.2.
   Натрий фосфорнокислый двузамешенный 12-водный по ГОСТ
4172, раствор молярной концентрацией Vis моль/дм*.
    Калий фосфорнокислый однозамсщенный по ГОСТ 4198, ра­
створ солярной концентрацией Vis моль/дм*.
   Кислота соляная по ГОСТ 3118, расгвор молярной концентра­
цией вещества эквивалента 0,1 моль/дм3, приготовленный по ГОСТ
4919.2.
   Иод по ГОСТ 4159.
   Калий йодистый по ГОСТ 4232.

ГОСТ 11364.4—И С. 3

   Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
    Примечания:
    1. Все реактивы должны быть квалификации ч., х. ч. или ч. д. и.
    2. Допускается исполыованис импортной посуды и приборов с метрологи­
ческими характеристиками и реактивов с квалификацией не ниже отечественных.
   2.3. П о д г о т о в к а к а н а л и з у
   2.3.1. Приготовление раствора крахмала с массовой долей /%
(субстратаj
    (1.00± 0,01) г крахмала, взятого с учетом влажности, поме­
щают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 25 см*
воды и перемешивают. Затем добавляют в колбу еще 25 см3 во
ды, помещают колбу в кипящую водяную баню не менее чем на
10—15 мни, непрерывно перемешивая содержимое до полного ра­
створения крахмала. После этого содержимое колбы охлаждают,
добавляют 10 см3 ацетатного буферного раствора с pH 4,7 (для
препаратов грибного происхождения), фосфатного буферного ра­
створа с pH о,0 (для препаратов бактериального происхождения)
или фосфатного буферного раствора с pH 5,6 (для препаратов из
дрожжевых микроорганизмов). Объем жидкости доводят до мет­
ки дистиллированной водой и содержимое колбы перемешивают.
Раствор должен быть прозрачным.
    Раствор крахмала готовят в день проведения анализа.
    2.3.2. Приготовление фосфатного буферного раствора с pH 5,6
и pH 6,0
    Смешивают растворы фосфорнокислого натрия и фосфорнокис­
лого калия концентрацией Vis моль/дм3 в соотношении 0,5:9,5
(для pH 5,6) и 1 :9 (для pH 6.0).
    Величину pH проверяют на приборе. В случае отклонения pH
буфера от требуемого, соответствующими растворами доводят его
до нормы.
    2.3.3. Приготовление основного раствора йода
    0,50 г йода и 5,00 г йодистого калия растворяют в бюксе с
притертой крышкой в небольшом количестве воды.
    Содержимое перемешивают на магнитной мешалке при плотно
закрытой крышке бюксы.
    Раствор после полного растворения йода переносят в мерную
колбу с притертой крышкой вместимостью 200 см3 и объем до­
водят дистиллированной водой до метки.
    Основной раствор йода хранят в течение 1 мес в склянке из
темного стекла с притертой пробкой.
    2.3.4. Приготовление рабочего раствора йода
    2 см3 основного раствора йода разводят раствором соляной
кислоты концентрацией 0,1 моль/дм1 при анализе препаратов
грибного происхождения н концентрацией 0,5 моль/дм3 — препа­
ратов бактериального происхождения с предполагаемой актив­
ностью больше 50 ед/см3 в меркой колбе вместимостью 100 см3.