ГОСТ 20264.3-81

УДК        5 -13 . 0 6 : 006.3 54                                              Группа CM

                         Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                  С Т А Н Д А Р Т


                                         ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ
                                                                                                ГОСТ
                                    Методы определения активности
                                     псктопитмческого комплекса
                                                                                            2 0 264.3-81
                                                                                                   Взамен
                                              Enzyme preparations.                             ГОСТ 20264. J —74
                         Methods for determination of pcrtolylic complex activity


                         Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 1J апреля
                         1W1 г. Н? 1973 срок действия установлен
                                                                                         с 0t.07.8J
                                                                                                         до 01.07.87

                                          Н есобподеиие стандарта преследуется по закону

                            Настоящий стандарт распространяется на ферментные пре­
                         параты микробного происхождения н устанавливает методы оп­
                         ределения активности пектолитиясского комплекса.
                                                              1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

                               1.1 Отбор проб — по ГОСТ 20264.0—74.
                         Издание Официальное                                               Перепечатка воспрещена
                                                             Переиздание Февраль 1985 г.

                                                                                                                   31




сертификация продукции

Стр. 2    ГОСТ   202Д4.3— 81

         1. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕКТОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ |ПкС|
                        (интерферометрический метод)

   2.1. С у щ н о с т ь м е т о д а
   Метод основан на определении пектолитнческих ферментов
при каталитическом расщеплении пектина.
   За единицу пектолнтической активности должно быть приня­
то количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 г пек­
тина до продуктов, не осаждаемых сернокислым цинком при
проведении гидролиза в строго бпределенных условиях: темпера­
тура 30 °С, время, гидролиза 1 ч, величина pH реакционной сре­
ды 4.0; соотношение фермент-субстрат в реакционной среде, обес­
печивающее гидролиз 30 %-ного пектина, взятого на реакцию.
   Пектолитическую активность выражают числом указанных
единиц в 1 г испытуемого препарата.
   Количество продуктов гидролиза пектина, не осаждаемых
сернокислым цинком, определяют на интерферометре.
   2.2. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы , р е а к т и в ы
   Весы лабораторные аналитические 3-го класса точности любой
марки
   Весы технические 2—3-го класса точности.
   Мешалка любой марки.
   Интерферометр типа ИТР-2 или ЛИР-2.
   Прибор для измерения pH среды любой марки.
   Термометры ртутные стеклянные лабораторные по ГОСТ
215-73.
   Стаканы к колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ
25336-82.
   Стаканчики для взвешивания (бюксы высотой 40—50 мм) по
ГОСТ 25336-82.
   Термостат водяной любой марки.
   Воронки стеклянные по ГОСТ 25336—82.
   Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026—76.
   Приборы мерные лабораторные стеклянные, бюретки, пипетки
по ГОСТ 20292—74.
   Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336—82.
   Фильтры обеззоленные. Синяя лента.
   Марля медицинская по ГОСТ 9412—77.
   Пектин свекловичный со степенью метоксилирования не ме­
нее 35 % и содержанием основного вещества не менее 70 %.
   Сахароза по ГОСТ 5833—75.
   Цинк сернокислый по ГОСТ 4174—77, 15%-ный раствор.
   Аммиак водный по ГОСТ 3760 79
   Баня водяная.
   Вода дистиллированная по ГОСТ 6709—72.
   Все реактивы должны быть х. ч. или ч. д. а.
32

ГОСТ 102&4.3—I t      Стр.    3

   2.3. П о д г о т о в к а к а н а л и з у
   2.3.1.    Приготовление основного ферментного раствора из очи­
щенных порошкообразных препаратов
   0.1 г (или 1 г) исследуемого препарата взвешивают на анали­
тических весах с погрешностью не более 0,0001 г в стаканчике
вместимостью 25—30 см3. Навеску тщательно растирают стеклян­
ной палочкой с небольшим количеством дистиллированной воды.
Затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью
50 см3 (500 см3), доводят водой до метки и перемешивают. С
целью избежания адсорбции фермента на наполнителе необходи­
мо процессы растворения и фильтрации проводить неразрывно:
после растворения стандартизованных препаратов раствор сра­
зу же фильтруют через беззольный фильтр. Из фильтрата отби­
рают определенное количество раствора в зависимости от актив­
ности препарата для проведения анализа в соответствии с табл. I.
                                                                           Та блица 1

                      KeauweiM pactropt,       Об*«м, *о которого     Количество препара­
  Количество «Д. ПК*   которое необходимо     необходим'- разбавят*   та, <ОА»р».П1С«ССЗ й
тяавоотк и ! г препа­ a . а вторичяяго paa-     взятое количество     10 см* ферментного
    рат» (од. ПиС)         банлеиие, ем'          раствора, см*       распора, взятое на
                                                                            авадиз. г

          2—5           Без разведения          Без разведения               0.02
         5— 10                20                       50                   0.008
        1 0 -2 0 -            10                       50                   0.004
        20— 10                 5                       50                   0.002
      40— 100                 2.5                      50                   0.001
     100—20)                  2.5                     100                   0.0005
     2 0 0 -5 0 0             2.5                     250                   0,0002


   2.3.2. Приготовление основного ферментного раствора из по­
верхностной культуры гриба
    I г измельченной воздушно-сухой культуры гриба взвешива­
ют на технических весах, переносят в стакан вместимостью
250 см3, заливают 100 см3 дистиллированной воды и выдерживают
в течение 1 ч при 30°С при периодическом перемешивании. По­
лученный ферментный экстракт фильтруют через бумажный
фильтр и из фильтрата, в зависимости от активности культуры,
в соответствии с табл. 2 отбирают определенное количество в
колбу вместимостью 50 см3 и доводят водой до метки. Содержи­
мое перемешивают и используют для определения псктолитнческой
активности.
   2.3.3. Приготовление I %-ного раствора пектина (субстрат)
   Навеску пектина, взятую с таким расчетом, чтобы в 250 см3
раствора было 2,5 г чистого пектина (см. обязательное прило­
жение), тонкой струей всыпают при непрерывном перемешивании
                                                                                       33

Crp.   4     ГОСТ 20364J —81

на мешалке в .коническую колбу вместимостью 300 см* куда
предварительно наливают около 130 см* дистиллированной воды.
Раствор перемешивают в течение 3 ч на мешалке при комнат­
ной температуре. По истечении этого времени в раствор добавля­
ют при перемешивании определенное количество концентрирован­
ного раствора аммиака для установления pH 4.0. Затем объем
раствора доводят дистиллированной водой до 250 см*, тщательно
перемешивают и фильтруют через два слоя марли.
                                                                        Таблица 2

Колячестяо условии» единиц Количество фильтрата вы-      Количестю хультури. содер­
 активиосги • 1 е культуры твжки, олвтое ля» рвлблале-   жащееся а ’.0 см4 ферментного
                                         см*             рлстаора. оаятое ял аналил, г


           0.4— 1,0                                                   0.1
           1 .0 -2 .6                     20                         0.04
           2,5—5,0                        10                         0.02
           5 .0 - 1 0                      5                         0.01
            Св. 10                        2.5                       0,005

   Раствор пектина готовят не менее чем за 4 ч до проведения
анализа. Окраска раствора должна быть светло-серой.
   Раствор пектина можно использовать в течение 2—3 сут при
условии хранения в холодильнике.
   2.3.4. Проверка интерферометра
   Интерферометр проверяют 0,25%-ным раствором сахарозы. В
правую секцию кюветы интерферометра с длиной грани 4 см
наливают дистиллированную воду, в левую — приготовленный
раствор сахарозы.
   Поправочный коэффициент (К ) вычисляют по формуле
                                     Ь'     780


где 780 — показание прибора;
      X — показание прибора при проверке 0,25 %-ным раствором
           сахарозы.
   2.4. П р о в е д е н и е а н а л и з а
   Для анализа берут несколько пробирок диаметром 2 см и вы­
сотой 18 см по количеству исследуемых проб. В каждую пробирку
наливают по 20 см* субстрата и ставят их в термостат с темпера­
турой (30±0,2)°С . В термостате пробирки выдерживают в течение
10 мин для того, чтобы растворы приняли постоянную температу­
ру. Затем наливают в каждую по 10 см* испытуемого ферментного
раствора, предварительно подогретого до 30°С, содержимое каж­
дой пробирки тщательно перемешивают и оставляют в термоста­
те при 30 °С на 1 ч для проведения гидролиза.
34