ГОСТ 20264.2-88

т   м     -   т




                           Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й  с т а н д а р т
                                          СО ЮЗ А     ССР




                                        ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ
                                     Л1ЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ
                                                   АКТИВНОСТИ

                                                ГОСТ 2 0 2 6 4 .2 - 8 8

                                                  Издание официальное
БЛ 1 - 8,4133
 Цоиа 5 поп.




                                      ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР 110 СТАНДАРТАМ
                красивые воротники
                                                        Москва

УДК 574.15.001.4: 006.354                                         Группа С09
Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й         С Т А Н Д А Р Т   СОЮЗА            ССР



             ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ
   Методы определения протеолитической активности               ГОСТ
    Enzyme preparations. Methods for determination       2 0 2 6 4 .2 - 88
                of proteolytic activity


ОКСТУ 9291

                                                     Срок действия с 01.01.89
                                                                  до 01.01.94
                Несоблюдение стандарта преследуется по закону

   Настоящий стандарт распространяется на ферментные препара­
ты и устанавливает методы определения протеолитической актив­
ности ферментных препаратов микробного происхождения.

              I МЕТОД ОТБОРА ПРОБ - по ГОСТ 20204 0 -7 4 .

  2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОП АКТИВНОСТИ (ПС)
                 (модифицированный метод Айсона)

   2.1.       Метод основан на гидролизе казеината натрия исследуемым
ферментным препаратом до пептидов и аминокислот с последую­
щим их определением.
   За единицу протеолитической активности принята способность
фермента превращать за I мин при температуре 30°С казеинат
натрия в неоеаждаемое трнхлоруксусной кислотой состояние в ко­
личестве, соответствующем 1 мкмолю тирозина.
   Протеолитическую активность выражают числом указанных
единиц в I г испытуемого препарата.
   Активность грибных и бактериальных протенназ определяют
при значениях pH в следующих диапазонах:
   2,5±0.2 и 5.5±0,2 — кислые протенназы;
    7 ,2 ± 0.2 — нейтральные протеинаэы;
   9,5± 0,2 — щелочные протенназы.


Издание официальное                                  Перепечатка воспрещена
         ★
                                      © Издательство стандартов, 1988

С 2 ГОСТ 202М .2-88

      2.2.   Аппаратура,     материалы,       реактивы,     раство­
 ры
      Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104—80:
      2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания
 200 г;
      1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания
 200 г или 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешива­
 ния 20 г.
     Прибор для определения pH среды в диапазоне от 0 до 14 с по­
 грешностью измерения ±0,1 единиц pH.
     Мешалка магнитная любого типа, обеспечивающая 3000 об/мин.
     Термостат любого типа, обеспечивающим температуру нагрева
 40±0.2°С.
     Колориметр фотоэлектрический лабораторный по ГОСТ
 12083—78, обеспечивающий измерения в интервалах длин волн
 630—670 нм с погрешностью ±1% (по коэффициенту пропускания)
 или 0,01 I) (по оптической плотности).
     Секундомер по ГОСТ 5072—79.
    Термометры О—150ЭС но ГОСТ 215—73 е ценой деления ГС.
    Холодильник бытовой любой марки.
    Электроплитка с терморегулятором по ГОСТ 14919—83.
    Банн водяная любого типа.
    Холодильник ХСВО 10 ХС по ГОСТ 25336—82.
    Стаканы любого типа и исполнения вместимостью 100, 250, 600,
 1000 и 2000 см3 по ГОСТ 25336—82.
    Стаканчики для взвешивания СВ-19/9 или СВ-24/10 по ГОСТ
25336- 82.
    Колбы типов П и К» любого исполнения вместимостью 100, 250,
500. 1000 см3 по ГОСТ 25336-82.
    Колбы типов К—1—2000—45/40 ТС, К—12—200—45/40 ТС по
ГОСТ 25336—82.
    Колбы мерные исполнения 1 или 2. любого класса точности, на­
ливные вместимостью 50. 100, 200, 250, 500. 1000 и 2000 см3 по
ГОСТ 1770-74.
    Пробирки П1— 16-150 ХС, 1 1 2 -1 6 -1 8 0 ХС по ГОСТ 25336-82.
    Цилиндры любого исполнения вместимостью 50 и 100 см3 по
ГОСТ 1770-74.
    Пипетки любого исполнения вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 по
ГОСТ 20292 -74.
    Бюретки по ГОСТ 20292—74.
    Воронки стеклянные типа В по ГОСТ 25336—82.
    Бумага фильтровальная лабораторная но ГОСТ I202G—76.
    Кислота уксусная по ГОСТ 61 75. раствор концентрацией
0,1 моль тм'.
    Кяс.-оп ортофосфорная по ГОСТ 6552 - 80, раствор с массовой
долей колоты 85% и раствор концентрацией 0,1 моль/дм3.

ГОСТ 202B4.2-RS С. 3

    Кислота борная по ГОСТ 9656—75. раствор концентрацией
0,1 моль/дм*.
    Натрий вольфрамовокнелый 2-водный по ГОСТ 18289—78.
    Натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931—74.
   Литий сернокислый.
    Кислота соляная по ГОСТ 3118—77, концентрированная, рас­
твор концентрацией 1 моль/дм* и 0.2 моль/дм3.
    Бром по ГОСТ 4109-79
   Натрия гидроокись по ГОСТ 4328—77, раствор концентрацией
1 моль/дм* и 0,1 моль/дм3.
    Натрий казскнонокислын (казеинат натрия).
    Натрий углекислый но ГОСТ 83—79, раствор концентрацией
0,5 моль/дм*.
    Тирозин.
    Кислота трихлоруксуснзя (ТХУ).
    Фенолфталеин но ГОСТ 5850—72.
    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 —72.
    Примечания:
    1. Вое реактивы должны быть марки х. ч. или ч. д. а . кроме трихлоруксус-
иой кислоты, которая используется марки ч
    2. Допускается использование импортной посуды и прнбороз с аналогичны­
ми техническими характеристиками
    2.3. П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю
    2.3.1. Приготовление универсального буферного раствора Уб |
концентрацией 0,1 моль /д/л3.
    Для приготовления универсального буферного раствора Уб>
готовят растворы концентрацией 0,1 моль/дм*: уксусной кислоты
 (раствор А), ортофосфорной кислоты (раствор В) и борной кис­
лоты (раствор С) и смешивают их в равных соотношениях. Полу­
чают буферный раствор с pH 1.8. Добавляя к этой смеси различ­
ные объемы раствора гидроокиси натрия концентрацией 1 моль/дм3
получают буферные растворы:
    а) pH реакционной смеси 2,5±0,2 н 5,5±0.2 (для кислых иро-
тенназ);
    б) pH реакционной смеси 7,2±0.2 (для нейтральных протеи-
наз);
    в) pH реакционной смеси 9,5±0.2 (для щелочных протенназ).
    2.3.2. Приготовление универсального буферного раствора Уб2
концентрацией 0.5 моль/дм3.
    Для приготовления универсального буферного раствора Уб2 го­
товят растворы А, В и С концентрацией 0.5 моль/дм3 и смешивают
их в равных соотношениях.
    2.3.3. Приготовление универсального буферного раствора Уб$
концентрацией 0,01 моль/дм3