ГОСТ 17.1.4.02-90

ГОСТ 17.1.4.02-90


               М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й         С Т А Н Д А Р Т




                                       ВОДА

                 МЕТОДИКА СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО
                     ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОФИЛЛА а



                                  Издание официальное




                             ИНК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ
                                       М о сква

декор платья

УДК 663.6.01:006.354                                                 Группа Т32


М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й                        С Т А Н Д А Р Т


                            ВОДА

      Методика спсктрофотометрического определении                   ГОСТ
                         хлорофилла а                           1 7 .1 .4 .0 2 —90
          Water. Spectrophotomclric determination
                      of chlorophyll a

ОКСТУ 2209

                                                           Дата введения 01.01.91


                                        ВВЕДЕНИЕ

   Хлорофилл а — основной пигмент зеленых растений, в том числе однокле­
точных водорослей (фитопланктона). Из нескольких десятков пигментов, со­
держащихся в фотосинтетическом аппарате водорослей, хлорофиллу а отведена
важнейшая роль в процессе фотосинтеза. Информация о концентрации хлоро­
филла а и ее изменчивости в водном объекте служит критерием при оценке
запасов биомассы фитопланктона и его продукции, а также индикатором
загрязнения вод. Соотношение между концентрацией хлорофилла а и продук­
тами его превращений, а также другими пигментами (хлорофилл Ь, хлорофилл
е,+с2, каротиноиды) характеризует физиологическое состояние водорослей.

              1. НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ РАСПРОСТРАНЕНИЯ

   1.1. Методика регламентирует определение содержания хлорофилла а фи­
топланктона в пробах вод морских и поверхностных суши. Допускается исполь­
зовать данную методику для определения хлорофилла а микрофитобентоса и
микрофлоры льда. Результаты определений по данному стандарту могут быть
использованы для калибровки непрямых методов оценки содержания хлоро­
филла а , в том числе при космическом зондировании состояния водных
объектов, а также при регистрации роста водорослей в биохимических экспе­
риментах.
   1.2. Методика предназначена для органов государственного контроля за
состоянием водных объектов, ведомственных научно-исследовательских эколо­
гических и промысловых работ.
   1.3. Диапазон определяемых концентраций хлорофилла а, для которого
устанавливаются пределы допускаемой погрешности определений, выполняе­
мых по данной методике, составляет от 0,05 м г-м '3 до любых максимальных
значении, встречающихся в природных водах.

Издание официальное                                       Перепечатка воспрещена

                                               © Издательство стандартов. 1990
                                           © И ПК Издательство стандартов, 1999
                                          791

С. 2 ГОСТ 17.1.4.02-90


   1.4. Основными компонентами, мешающими анализу, являются хлоро­
филл Ь. хлорофилл С|+с,, феофитин а, феофорбид а и хлорофиллнд а. Содер­
жание хлорофилла Л. хлорофилла с,+сг, суммарное содержание феофитина а и
феофорбида а соизмеримо с содержанием хлорофилла а , поэтому поправка на
присутствие этих пигментов вносится при расчете концентрации хлорофилла и.
Содержание хлорофиллнда а обычно несоизмеримо мало по сравнению с
содержанием хлорофилла а, поэтому поправка на его присутствие не вносится.
   1.5. Определяемое вещество — хлорофилл а —легко разрушается под воз­
действием света, при повышении температуры и в кислой среде, поэтому при
проведении любых процедур, начиная с момента отбора пробы и до окончания
спектрофотометрнрования, следует обеспечить нахождение объекта анализа
(пробы, фильтра с осадком или экстракта) в затемненном прохладном месте
при отсутствии паров кислоты.
   1.6. Продолжительность анализа одной пробы от момента ее отбора до
окончания спектрофотометрнрования без учета времени хранения пробы,
фильтра с осадком и экстракта не должна превышать 3 ч.

     2. ССЫЛКИ НА СТАНДАРТЫ, СОВМЕСТНО С КОТОРЫМИ ДОЛЖЕН
               ПРИМЕНЯТЬСЯ НАСТОЯЩИЙ СТАНДАРТ

   ГОСТ 17.1.5.04 Охрана природы. Гидросфера. Приборы и устройства для
отбора, первичной обработки и хранения проб природных вод. Общие техни­
ческие условия.
   ИСО 5667-2 Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по методам
отбора проб.

                           3. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

   В основе метода — спектрофотометрированне экстракта пигментов до и
после его подкисления раствором соляной кислоты. Расчеты концентрации
хлорофилла а основаны на известных удельных спектральных показателях
поглощения света хлорофиллом а и основными компонентами, мешающими
анализу.
   Для приготовления экстракта пробу воды фильтруют через мембранный фильтр
с нанесенным на нем слоем углекислого бария или магния, осадок размельчают
(гомогенизируют), пигменты экстрагируют водным ацетоном из гомогената и
удаляют центрифугированием из экстракта светорассеиваюшую взвесь.

                         4. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ

  4.1. Силикагель по ГОСТ 3956.
  4.2. Ацетон ч.д.а. по ГОСТ 2603.
  4.3. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
  4.4. Кислота соляная х.ч. по ГОСТ 3118.
  4.5. Барий углекислый ч.д.а. по ГОСТ 4158.
  4.6. Магний углекислый основной чл.а. по ГОСТ 6419.
  4.7. Бумага фильтровальная — по нормативно-технической документации
(НТД).
                                    792

ГОСТ 17.1.4.02-90 С. 3


   4.8.     Фильтры мембранные размерами пор 0.6—0.9 мкм: отечественного про­
изводства «Владипор» типа МФА-МА №№ 6—9 (0.6—0.9 мкм) (см. приложение
I, п. 2) или типа МФЦ № 4 (0.6 мкм) по НТД; производства зарубежных фирм
Synpor № 4 (0,85 мкм) или № 5 (0.6 мкм), Milllpore НА, Whatman GF/F.

               5. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ И ОБОРУДОВАНИЕ

   5.1. Спектрофотометр. Выделяемый спектральный интервал должен быть не
более 2—3 нм. точность установки длин волн в диапазоне 430—750 нм не ниже
±2 нм, погрешность измерений по шкале оптических плотностей не более
0.01 Б. Например спектрофотометры: двухлучевой типа СФ-18 или однолучевой
типа СФ-46 по НТД.
   5.2. Центрифуга лабораторная. Вместимость пробирок 10 см3, число гнезд
6(12), ускорение 4000—5000 g. Например, типа ЦЛН-2 или ОПн-ВУХЛ 4.2 по
НТД.
   5.3. Установка фильтровальная с воронками под фильтры мембранные диа­
метром от 35 до 142 мм (см. приложения 3 и 4).
   5.4. Гомогенизатор механический вместимостью 10—15 см3. Ступка фарфо­
ровая № 1—3 (диаметр 50—90 мм) с пестиком № 2 (диаметр 22—34 мм) по
ГОСТ 9147. Рекомендуется также устройство из стекла, схема которого дана в
приложении 5.
   5.5. Насос вакуумный, типа НВР-1 или ЗНВР-1Д. или отсасыватель хирур­
гический ОХ-К) по НТД.
   5.6. Батометр (см. приложение 1, п. 1).
   5.7. Канистры полиэтиленовые черного цвета вместимостью 3.5. 10 и 20 дм3.
   5.8. Ведро полиэтиленовое или эмалированное.
   5.9. Эксикатор диаметром 140. 190 или 250 мм по ГОСТ 25336.
   5.10. Пробирки стеклянные градуированные с притертой пробкой на К) см3
с ценой деления 0,1 см3 по ГОСТ 1770 и НТД.

                6. ПОДГОТОВКА РЕАКТИВОВ И ФИЛЬТРОВ

   6.1. Порошок углекислого бария (ВаСО?) тщательно растирают в фарфоро­
вой ступке с добавлением небольшого количества дистиллированной воды или
фильтрованной природной. Из полученной массы удаляют самую грубую фрак­
цию. оседающую со скоростью более 0.5 см с -1 , после чего эту массу исполь­
зуют для приготовления суспензии. Рекомендуемая концентрация BaCOj в
суспензии 30 гдх|“ 3. Порция суспензии, добавляемой в фильтровальную ворон­
ку перед фильтрованием, берется из расчета 20 мг ВаСО, на 1 см2 поверхности
фильтра.
   6.2. Мембранные фильтры готовят в зависимости от типа материала фильт­
ра. Некоторые типы фильтров выпускают готовыми к использованию (напри­
мер, стеклополокннстые фильтры типа G F/F ). другие требу ют предварительного
вымачивания или даже кипячения в поде. Например, фильтры типа Synpor
необходимо трижды прокипятить по 10—15 мин в свежих порциях дистиллиро­
ванной воды. После кипячения следует провести выбраковку деформированных
фильтров. Готовые фильтры хранят в сухом состоянии.
                                     793