ГОСТ 16445-78

ГОСТ 16445—78

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СЫВОРОТКА ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ
ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ
КОМПЛЕМЕНТА

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

Издание официальное

Б3 1-9

ИПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ
Москва

Группа P31

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СЫВОРОТКА ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ ДЛЯ РЕАКЦИИ
СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

roct

Технические условия 16445—178

Haemolytic serum for the comphment fixation test.
Specifications

Дата введения 01.01.79

Настоящий стандарт распространяется на гемолитическую сыворотку (гемолизин). представ-
ляющую собой консервированную глицерином сыворотку крови кролика, иммунизированного
эритроцитами барана.

Гемолитическая сыворотка предназначена для применения в качестве компонента реакции
связывания комплемента (РСК) в ветеринарии.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Гемолитическую сыворотку (гемолизин) готовят в соответствии с требованиями настоя-
щего стандарта по технологическим правилам, утвержденным в установленном порядке.

1.2. По физико-химическим и биологическим свойствам гемолитическая сыворотка должна
соответствовать требован ям и нормам, указанным в табл. 1.

Таблица 1

Наименование показателя Характеристика и норма

Внешний вид Прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость желтовато-розово-
го цвета, без плесени, хлопьев. осадка и посторонней примеси.
Допускается образование на поверхности сыворотки пристеночного
белого кольца

Массовая доля глицерина, % 5045

Стерильность Посевы на питательные среды не должны давать роста бактериаль-
ной микрофлоры и грибов в течение десятисуточного вылерживания
в термостате при температуре 37—38 °С

Безвредность Не должна вызывать темолиза эритроцитов барана

Активность (титр). не ниже 1:1000

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Гемолитическую сыворотку принимают сериями. Под серией гемолитической сыворотки.
следует понимать определенное количество препарата, изготовленное в процессе одноразового
(одновременного) смешивания в одной емкости исходного сырья и специальной обработки его в
одних производственных условиях, фасованное в течение одного рабочего ANA, получившее свой
номер и оформленное одним документом о качестве.

2.2. Каждая серия гемолитической сыворотки должна быть принята на предприятии-изгото-
вителе государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного инсти-
тута ветеринарных препаратов Госагропрома.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

Издание официальное Перепечатка воспрещена

© Издательство стандартов, 1978
© ИПК Издательство стандартов, 1999
Переиздание с Изменениями

С. 2 ГОСТ 16445—78

2.3. Для контроля качества гемолитической сыворотки от каждой серии отбирают 20
ампул.

2.4. При получении неудовлетворительных результатов хотя бы по одному из показателей по
нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве ампул, отобранных от той же серии
темолитической сыворотки.

Результаты повторных испытаний распространяют на всю серию.

2.5. Контроль качества определенной серии гемолитической сыворотки по требованию потре-
бителя проводит государственный контролер на предприятии-изготовителе или Всесоюзный госу-
дарственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Госагропрома.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Метод отбора проб

3.1.1. Ампулы отбирают из разных мест упаковочных единиц. 10 ампул используют для
‘анализа, а 10 оставляют в архиве государственного контролера.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

3.2. Для определения внешнего вида, наличия или отсутствия посторонней примеси, плесени,
хлопьев и осадка ампулы с темолитической сывороткой встряхивают и просматривают в проходящем
свете.

3.3. Определение массовой доли глицерина

Массовую долю глицерина в гемолитической сыворотке в процентах устанавливают по
плотности сыворотки, соответствующей определенной плотности раствора глицерин:

3.3.1. Annapamypa, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

пикнометр вместимостью 1—2 см? по ГОСТ 22524;

баню водяную или термостат;

термометр технический стеклянный ртутный со шкалой от 0 до 100 °С по ГОСТ 28498;

весы лабораторные аналитические с разновесом;

эксикатор по ГОСТ 25336;

пипетки для отбора жидкости по ГОСТ 29227;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709, кипяченую или бидистиллированную.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

3.3.2. Подготовка к испытанию

Пикнометр тщательно очищают хромовой смесью, промывают водой, ополаскивают спир-
том, затем эфиром, высушивают продуванием воздуха или в сушильном шкафу и охлаждают в
эксикаторе.

3.3.3. Проведение испытания

Пикнометр взвешивают на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Наполняют
его дистиллированной водой до метки, выдерживают на водяной бане или в термостате при 20°C
в течение 20—30 мин и вновь корректируют заполнение водой до метки. Затем пикнометр обтирают
и взвешивают на аналитических весах. Освобождают пикнометр от воды, сушат, как указано выше,
и заполняют испытуемой гемолитической сывороткой. Дальнейшие операции проводят так же, как
при определении массы воды.

3.3.4. Обработка результатов

Плотность гемолитической сыворотки (4), содержащей глицерин, в г/см?, вычисляют по
формуле

где т — масса пробы сыворотки в объеме пикнометра, г;
т, — масса пробы воды в объеме пикиометра, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух
параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать
0.0008 г/см.

Плотность гемолитической сыворотки (4) должна составлять 1,115—1,145 r/c, что соответ-
ствует 45—55 % массовой доли глицерина в сыворотке.

ГОСТ 16445—78 С. 3

3.4. Определение стерильности

3.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

термостат с температурой нагрева 37—38

автоклав;

пипетки вместимостью 10 см*;

пипетки пастеровские;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;

воронки стеклянные;

пробки ватно-марлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805;

arap микробиологический по ГОСТ 17206;

вазелин медицинский по ГОСТ 3582.

3.4.2. Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой мясопептонный бульон (МПБ). отвечаю-
щий требованиям ГОСТ 20730, мясопептонный агар (МПА) и мясопептонно-печеночный бульон
{МППБ) под вазелиновым маслом и среду Сабуро. Среды разливают по 8—10 см’ в пробирки,
закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в
течение 30 мин при 0,15 МПа.

3.4.1, 3.4.2. (Измененная редакция, Изм. 1).

3.4.3. Проведение испытания

Посев производят из трех ампул, используя по две пробирки каждой среды на одну ампулу
темолизина. Для этого содержимое ампулы над пламенем горелки предварительно вносят в
пробирку с мясопептонным бульоном. тщательно перемешивают и затем рассевают по остальным
пробиркам со средами. Посевы на МПБ, MITA, МППБ выдерживают в термостате при 37—38 °С,
а на среде Сабуро — при 20—22 °С в течение 10 суг.

3.4.4. Обработка результатов

Среды в пробирках должны оставаться стерильными.

3.5. Определение активности (титра) и безвредности

Активность гемолитической сыворотки определяют по 100 %-ному гемолизу эритроцитов
барана в гемолитической системе. Титрация гемолизина производится комплементом с титром
0.19—0,25 по ГОСТ 16446 в гемолитической системе.

Под титром гемолитической сыворотки следует понимать наименьшее количество его (наи-
большее разведение), при котором в течение 10 мин при 37—38 °С наступает полный (100 %-ный)
гемолиз 0,5 см? 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0.5 см? комплемента в
разведении 1:20 в общем объеме жилкости 2,5 смз.

Безвредность гемолитической сыворотки характеризуется полным отсутствием гемолиза эрит-
роцитов барана в пробирке без комплемента.

3.5.1. Оборудование и реактивы

Для проведения испытания применяют:

штативы;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;

стаканы лабораторные, колбы по ГОСТ 25336;

колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см? по ГОСТ 1770;

пипетки вместимостью ло 10 см? с ценой деления 0,1 см? по ГОСТ 29227;

пипетки вместимостью 1 см? с ценой деления 0,01 см*;

баню водяную;

карандаши восковые;

физиологический раствор рН 6,3-7,2.

3.5, 3.5.1. (Измененная редакция, Изм. № 1).

3.5.2. Подготовка к испытанию

3.5.2.1. Приготовление разведений гемолитической сыворотки.

Готовят основное разведение гемолитической сыворотки 1:100, для чего берут 0,1 см? гемоли-
тической сыворотки и 9,9 см? физиологического раствора.

Из основного разведения сыворотки (1:100) готовят разведения от 1:500 до 1:2000, как указано
в табл. 2.