ГОСТ 13496.6-71

ГОСТ 13496.6-71

                        М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й        С Т А Н Д А Р Т




                                          КОМБИКОРМ
                           МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ



                                            Издание официальное




                                                      Москва
                                                  Стандартинформ
                                                        2011




перечень сертификатов

УДК 636.085.3:006.354                                                                         Группа С19

М   Е   Ж    Г   О   С   У   Д   А    Р   С   Т    В   Е   Н    Н   Ы   Й      С Т А Н Д А Р Т


                                 КОМБИКОРМ
                                                                                    ГОСТ
                 Метод выделения микроскопических (рибов
                                                                                 13496.6-71
                     Mixed feed. Method of detachment of fungi

МКС 65.120
ОКСТУ 9209

                                                                                    Дата введения 01.01.72

     Настоящий стандарт распространяется на все виды комбикормов и устанавливает метод выде­
ления микроскопических грибов из них.
     Сущность метода заключается в посеве разбавленных взвесей комбикормов на питательные
среды (метод разливки).
     Метод основан на свойстве микроскопических грибов расти при определенных условиях на
специально приготовленных питательных средах (агаре Чапека или сусловом агаре).
     (Измененная редакция. Изм. № 1).

                                              I.   ОТБОР ПРОБ
     1.1. Отбор проб комбикормов производят по ГОСТ 13496.0.

                                     2.   АППАРАТУРА И РЕАКТИВЫ
    2.1. Д'1я проведения испытания применяют:
    автоклав;
    шкаф сушильный;
    мельницу лабораторную электрическую;
    весы лабораторные по ГОСТ 24104*, 2-го класса точности с пределом взвешивания до 0,01 г;
    аппарат для встряхивания жидкостей (шюттель-аппарат):
    термостат с автоматическим терморегулятором;
    бокс для посевов;
    баню водяную;
    чашки стеклянные лабораторные типа чБН (чашки Петри) по ГОСТ 25336;
    колбы стеклянные вместимостью 500 см3 по ГОСТ 25336;
    мензурки или цилиндры мерные вместимостью 500 см3, 1000 см3 по ГОСТ 1770;
    пипетки химические градуированные вместимостью 1 см3, 2 см3 с ценой деления 0.1 см3 с ши­
роким концом по ГОСТ 29227;
    пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
    воронки стеклянные диаметром 100 мм по ГОСТ 25336:
    ареометр Баллинга;
    горелку газовую или спиртовую;
    бумагу универсальную индикаторную:
    вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;
    марлю медицинскую по ГОСТ 9412;
    глюкозу по ГОСТ 6038;
    калий фосфорнокислый однозамешенный по ГОСТ 4198;

      ♦ С I июля 2002 г. «водится в действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации дей­
ствует ГОСТ Р 53228-2008.

Издание официальное                                                               Перепечатка воспрещена


                                                                            <£> СТАНДАРТИНФОРМ. 2011
                                                           63

С. 2 ГОСТ 13496.6-71

     натрий азотнокислый по ГОСТ 4168:
     магний сернокислый по ГОСТ 4523;
     калий хлористый по ГОСТ 4234;
     железо сернокислое закисное, по ГОСТ 4148;
     агар-агар по ГОСТ 17206;
     воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
     воду водопроводную;
     пенициллин (натриевая и калиевая соль бензилпенициллина);
     стрептомицин (стрептомицина сульфат);
     сусло пивное неохмеленное с 12—14 % сахаров:
     поверхностно-активное вещество ОП-7;
     поверхностно-активное вещество ОП-Ю;
     поверхностно-активное вещество Твин-80.
     (Измененная редакция, Изм. № 1, 2).

                              3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
     3.1. В состав авизированной среды Чапека (агара Чапека) входят следующие компоненты:
     глюкоза — 30,0 г:
     натрий азотнокислый — 2.0 г;
     калий фосфорнокислый однозамещеиный — 1.0 г;
     магний сернокислый — 0,5 г;
     калий хлористый — 0.5 г;
     железо сернокислое закисное — 0.01 г;
     вода дистиллированная — 1000 см;
     агар-агар — 20—30 г.
     3.2. Дтя приготовления агара Чапека берут 20—30 г агар-агара, заливают его 1000 c mj водо­
проводной воды и вымачивают 2 ч при комнатной температуре. Воду сливают и измеряют ее объем
для определения количества воды, впитавшейся агаром. Затем агар промывают 2—3 раза дистилли­
рованной водой.
      Взвешивают остальные компоненты среды и растворяют их в таком объеме дистиллированной
воды, который составляла слитая при вымачивании агара вода. К полученному раствору добаатяют
отмытый агар-агар, после чего варят среду в автоклаве текучим паром в течение I ч.
     3.3. Полученную среду фильтруют, разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при дав­
лении 0,05 МПа в течение 20 мин: pH питательной среды должен быть в пределах 6,0—6.8.
     3.4. Ятя приготоатения суслового агара неохмеленное пивное сусло, содержащее 12—14 % са­
харов. фильтруют через тонкий слой ваты или 3—4 слоя марли, разбаатяют дистиллированной во­
дой (1:2 или 1:3) до 4—7* по ареометру Баллиига, затем добаатяют 2 % агар-агара. Рапивают по кол­
бам и стерилизуют в автоклаве при температуре 110— 112 *С и давлении 0.05 МПа в течение 20 мин.
     3.5. Перед посевом питательный агар расплаатяют в водяной бане, затем посте охлаждения до
45—50 ‘С для подавления сопутствующей бактериальной флоры добавляют антибиотики — пени­
циллина 50000 ЕД и стрептомицина 100000 ЕД на 1 дм3 среды. После этого агар разливают в сте­
рильные чашки Петри и дают остыть на горизонтальной поверхности. Стой агара должен быть не
менее 0,5 см.
     3.3—3.5. (Измененная редакция, Изм. № 1, 2).
     3.6. Размол образца гранулированного или брикетированного комбикорма производят на ла­
бораторной мельнице.
     3.7. Ячя приготовления разбавленной взвеси 10 г размельченного комбикорма помещают в
колбу с 100 см1 стерильного 0.1 %-ного раствора поверхностно-активного вещества (ОП-7, ОП-Ю,
Твин-80) в дистиллированной воде. Таким образом получают первичную взвесь I (1:10). Прежде чем
приступить к разбавлению первичной взвеси, проводят дезинтеграцию пробы в колбе встряхивани­
ем в течение 15—20 мин на шюттель-аппарате. Затем из взвеси 1 готовят последующие разведения,
используя также стерильные растворы вышеназванных поверхностно-активных веществ, следую­
щим способом: 1 см' взвеси берут стерильной градуированной пипеткой (конец пипетки следует от­
резать для свободного прохождения частиц комбикорма, после чего пипетка должна быть откалиб­
рована на 1 см5), приливают в пробирку с 9 см5 раствора и получают взвесь 2 (1:100). Из полученной
                                            64

ГОСТ 13496.6-71 С. 3

взвеси 2 готовят таким же образом взвесь 3 (1:1000). и, если необходимо, взвесь 4 (1:10000). Перед
взятием очередной порции взвеси как для получения дальнейшего разведения, так и для посева, не­
обходимо тщательно перемешивать взвесь пипеткой, а также промыть пипетку во взвеси не менее
5 раз.
      (Измененная редакция. Изм. № I).
      3.8. Степень разбавления основной взвеси зависит от органолептических показателей комби­
корма. Комбикорм с нормальными органолептическими показателями разбавляют 1:1000, подверг­
шийся порче — 1:10000.
      3.9. Для предупреждения загрязнения посевов применяемая посуда должна быть стерильной.
Стерилизацию чашек и пипеток, завернутых в бумагу, проводят в сушильном шкафу при температу­
ре 140—160 "С в течение 2 ч. Все процессы, связанные с разливкой питательных сред, приготовле­
нием разбавленной взвеси комбикорма, посевом ее на питательную среду, должны проводиться в
стерильных условиях — около пламени горелки в специальном боксе.
      (Измененная редакция, Изм. № 1).

                               4.   ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
     4.1. Посев производят сразу же после приготовления последней взвеси (3 или 4). не давая ей
отстояться, при этом I см-' ее равномерно распределяют по всей поверхности питательной среды,
слегка наклоняя чашки Петри в разные стороны.
     (Измененная редакция, Изм. № I).
     4.2. Число засеянных чашек зависит от выбранной степени разбавления: 5 чашек при разбав­
лении 1:1000 и 8 чашек — при разбавлении 1:10000.
     4.3. Посевы инкубируют в термостате при 22—25 "С в течение 5—7 сут. Рост и спороношение
большинства грибов, контаминирующих комбикорма, становится заметным уже через 2—3 сут.
     (Измененная редакция, Изм. № I, 2).
     4.4. (Исключен. Изм. № 1).

                                5. О БРА Б О Т К А РЕЗУ Л ЬТА ТО В
     5.1. Обработку результатов испытания и оценку санитарно-микологического качества комби­
корма проводят в соответствии с правилами санитарно-микологических исследований кормов,
утвержденными в установленном порядке.
     Разд. 5. (Введен дополнительно, Изм. № 1).




                                                   65