ГОСТ 13496.22-90

ГОСТ 13496.22-90

                            М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й        С Т А Н Д А Р Т




                                      КОРМА, КОМБИКОРМА,
                                     КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
                                МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСТИНА И МЕТИОНИНА



                                                Издание официальное




                                                          Москва
                                                      Стандартинформ
                                                            2011




капитальное строительство

УДК 636.085.3:006.354                                                                              Группа С 19

М   Е     Ж   Г   О   С   У   Д   А    Р   С   Т   В   Е   Н   Н   Ы     Й         С Т А Н Д А Р Т


          КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
                                                                                         ГОСТ
                      Метод определения цистина и метионина
                                                                                     13496.2 2 -9 0
                  Fodder, mixed fodder and mixed fodder raw materials.
                  Method for determination of cistinum and mettoninum
M КС 65.120
ОКСТУ 9209

                                                                                         Дата ваеления 01.01.92

     Настоящий стандарт распространяется на все виды кормов, комбикормов и комбикормовое
сырье и устанавливает метод определения цистина и метионина.
     Метод основан на окислении цистина и метионина смесью перекиси водорода с муравьиной
кислотой до цистеиновой кислоты и метионинсульфона и последующем их разделении на ионооб­
менной хроматографической колонке после гидролиза соляной кислотой концентрации с (НС1) =
= 6 моль/дм3. Интенсивность окрашенного комплекса при реакции с нингидриновым реактивом
пропорциональна содержанию аминокислоты в растворе.
     Стандарт применяют в научно-исследовательских учреждениях, лабораториях агрохимической
службы, республиканских и зональных лабораториях комбикормовой промышленности.

                                               1. ОТБОР ПРОБ
        Отбор проб - по ГОСТ 13496.0. ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0. ГОСТ 17681, ГОСТ 27262.

                                               2. АППАРАТУРА
     Измельчитель проб растений ИПР-2 или соломорезка марки ИСР-1.
     Сушилка проб кормов СК-2 или шкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержа­
ния температуры не более 5 "С.
     Шкаф сушильный типа СЭШ-ЗМ или аналогичный с рабочей температурой 110 ’С, макси­
мальным перепадом температуры 2 “С и периодическим колебанием температур в рабочей зоне не
более 0,5 *С.
     Мельница лабораторная МРП-2.
     Сито с круглыми отверстиями диаметром 1 мм.
     Весы лабораторные 2-го и 3-го классов точности с пределом взвешивания 200 и 500 г по
ГОСТ 24104*.
     Автоклав по ГОСТ 14106.
     Термоблок многопозиционный для пиролиза кормов Т.М-1.
     Автоанализатор аминокислот.
     Устройство для выпаривания гидролизатов УВГ-1 или баня водяная.
     pH-метр.
     Дозатор стеклянный вместимостью 10 см3.
     Ампулы стеклянные с перетяжкой вместимостью 20 см3 по ГОСТ 21400.
     Колбы мерные вместимостью 50, 100. 1000 см3 по ГОСТ 1770.
     Пробирки стеклянные вместимостью 20 см3 по ГОСТ 1770.
    ♦ С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации действует
ГОСТ Р 53228-2008.

Издание официальное                                                                    Перепечатка воспрещена
                                                                             £> Издательство стандартов. 1990
                                                                               £> СТАНДАРТИНФОРМ, 2011
                                                    180

ГОСТ 13496.22-90 С. 2

     Пипетки градуированные вместимостью 1. 2, 5, 10 см3 по ГОСТ 29227.
     Воронки стеклянные диаметром 2—3 см по ГОСТ 25336.
     Чашки фарфоровые по ГОСТ 9147.
     Бюксы стеклянные диаметром не менее 5 см по ГОСТ 25336.
     Палочки стеклянные оплавленные.
     Набор реактивов к автоанализатору.
     Стандартные растворы аминокислот.
     Кислота соляная концентрированная по ГОСТ 31IX, х. ч.
     Раствор соляной кислоты концентрации с (Н О ) = 6 моль/дм3; готовят смешиванием равных
объемов концентрированной соляной кислоты и дистиллированной воды.
     Натрий лимоннокислый трехзамешенный по ГОСТ 22280. х. ч. или ч. д. а.
     Фенол.
     Натрия гидроокись по ГОСТ 4328. х. ч., раствор с массовой долей 50 %.
     Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч. д. а.
     Водорода перекись по ГОСТ 10929.
     Вола дистиллированная по ГОСТ 6709 двойного перегона.
     Фильтры беззольные с синей полосой по ГОСТ 12026.
     Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду и другие средства измерений, имеющие
такие же или лучшие метрологические характеристики.

                              3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

      3.1. П о д г о т о в к а п р о б
      Среднюю пробу сена, сенажа, зеленой массы измельчают на отрезки длиной 1—3 см. Корнеп­
лоды разрезают на пластинки (ломтики) толщиной до 0,8 см. Методом квартования выделяют часть
средней пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 100 г. Высушивание проб
проводят в сушильном шкафу при температуре 60—65 *С до воздушно-сухого состояния. После вы­
сушивания пробу размалывают на мельнице и просеивают через сито. Остаток на сите дополнитель­
но измельчают, добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.
      Средние пробы комбикормов, зерна, жмыхов, шротов, гранул травяной муки или витаминной
муки из древесной зелени размалывают без предварительного подсушивания и просеивают через
сито. Корма с содержанием жира более И) % предварительно обезжиривают.
      Подготовленные пробы хранят в стеклянной или пластмассовой банке с крышкой в сухом тем­
пом месте не более двух лет.
      3.2. П р и г о т о в л е н и е о к и с л и т е л ь н о й с м е с и
      Окислительную смесь готовят смешиванием перекиси водорода и муравьиной кислоты в соот­
ношении 1:9: готовят вдень проведения испытания.
      3.3. П р и г о т о в л е н и е б у ф е р н о г о р а с т в о р а (2,203.0,02) ед. pH
      19,6 г лимоннокислого трехзамещенного натрия растворяют в 200—300 см3 дистиллированной
воды, приливают 16,6 см3 концентрированной соляной кислоты, I см3 фенола и доводят объем до
1 дм3 в мерной колбе дистиллированной водой. Концентрацию водородных ионов контролируют на
pH-метре и при необходимости корректируют раствором гидроокиси натрия с массовой долей 50 %
или концентрированной соляной кислотой.
      3.4. П р и г о т о в л е н и е с т а н д а р т н о г о р а с т в о р а а м и н о к и с л о т
      Готовят из основного раствора, содержащего 187 мг цистеиновой кислоты и 181 мг метионин-
сульфона в 100 см3 раствора соляной кислоты концентрации с (НС1) = 0,1 моль/дм3.
      Стандартный раствор аминокислот готовят разведением 25 см3 основного раствора в 100 см3
раствора соляной кислоты концентрации с (НС1) = 0.1 моль/дм3. 1 см3 такого раствора содержит
0.47 мг цистеиновой кислоты и 0.45 кг метиопипсульфона, что соответствует 2,5 мкмоль каждой
кислоты в стандартном растворе, прилагаемом к автоанализаторам. Стандартный раствор хранят в
герметично закрытых флаконах в холодильнике в течение нескольких лет.
      Рабочий раствор аминокислот готовят разведением стандартного раствора аминокислот в бу­
фере 2.20 ед. pH до концентрации, рекомендуемой для конкретного типа аминокислотного анализа­
тора.
                                                  181

С. 3 ГОСТ 13496.22-90

                              4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

       Навеску воздушно-сухого корма массой (100,040,1) мг помещают в чашку устройства для вы­
паривания гидролизатов УВГ-1 (или фарфоровую чашку при выпаривании на водяной бане), при­
ливают 5 см-1 свежеприготовленной окислительной смеси и выпаривают при постоянном помеши­
вании при температуре 60 *С. Сухой остаток количественно переносят в ампулу термоблока ТМ-1
или в пробирку с перетяжкой, используя 10 см1 раствора соляной кислоты концентрации с (НС1) =
= 6 моль/дм3. Ампулу термоблока герметично закрывают тефлоновой крышкой и устанавливают в
термоблок для гидролизата при температуре 110 С. На блоке управления включают тумблер •Пере­
мешивание* и устанавливают время гидролиза 4 ч.
       При гидролизе в термостате ампулу запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки и
помещают в предварительно нагретый до температуры 110 *С сушильный шкаф на 16 ч.
       При гидролизе в автоклаве содержимое количественно переносят в пробирки вместимостью
20 см1, закрывают стеклянными колпачками или воронками для предотвращения разбрызгивания
кислоты во время гидролиза и устанавливают в автоклав. Гидрол из проводят при температуре 137 'С
и давлении 0,25 МПа в течение 3 ч.
       После завершения гидролиза гидролизаты охлаждают до комнатной температуры, перемеши­
вают и содержимое фильтруют через беззольный фильтр (первую порцию фильтрата для анализа не
используют). 1—2 см3 фильтрата выпаривают досуха на УВГ-1 или водяной бане и осадок растворя­
ют в 10 см3 буферного раствора 2,20 сд. pH. Раствор гидролизата хранят в течение месяца в холо­
дильнике в герметично закрытых пробирках.
       Испытуемый гидролизат пробы вводят автоматически или при помощи шприца в верхнюю
часть колонки анализатора аминокислот. Для идентификации аминокислот и их количественного
определения на колонку наносят стандартный раствор аминокислот. Порядок работы на аминоана-
л и заторах регламентируется прилагаемой инструкцией.

                               5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

     Содержание аминокислот рассчитывают по соотношению площадей пиков на хроматограмме
соответствующих кислот в стандартном растворе и гидролизатах испытуемых проб.
     5.1. Массу аминокислоты (А) в граммах на 1 кг воздушно-сухого вещества корма вычисляют
по формуле
                                       X = c SI V -1000
                                              S2 т

где с — концентрация стандартного рабочего раствора, мг/см3;
    5| — интегрируемая величина площади пика аминокислоты испытуемой пробы:
     V — объем гидролизата, см3;
    S: — интегрируемая величина площади пика аминокислоты стандартного рабочего раствора;
    т — масса навески пробы, мг.
      Полученный результат корректируют с учетом разведения гидролизата и потери массы навес­
ки корма после обезжиривания.
      Для пересчета цистеиновой кислоты и метнонинсульфона в цистин и метионин используют
переводные коэффициенты 0.710 и 0,023 соответственно.
      За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух
параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до
второго десятичного знака. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных
определений (А ,) при доверительной вероятности Р = 0.95 не должны превышать значений:
      для цистеина А* = 0.132 + 0,058 А;
      для метионина As — 0,06 + 0.088 X,
где А' — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений.
      Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии в партии испы­
туемых проб стандартных образцов (СО). В этом случае за результат испытания принимают резуль-
                                           182