ГОСТ 10444.9-88

ГОСТ 10444.9-88


                                   М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й               С Т А Н Д А Р Т




                                               ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
                                                   МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ
                                                 CLOSTRIDIUM PERFRINGENS



                                                        Издание официальное




                                                              С 1 Ш Щ * р т ^ О |И
                                                                    2010




арматура сертификат соответствия

УДК 663/.664:543.9:006.354                                                                       Группа 1109

М   Е   Ж    Г     О   С   У   Д   А    Р   С   Т   В   Е   Н   Н   Ы   Й        С Т А Н Д А Р Т


                           ПРОДУКТЫ ПИЩ ЕВЫ Е

                   Метод определения Clostridium perfringens
                                                                                            ГОСТ
                                   Food products.
                 Method for determination of Clostridium perfringens                    10444.9 -8 8

МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109

                                                                                      Дата введения 01.01.90


       Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод определения
Clostridium perfringens.
       Метод основан на выделении С. perfringens из колоний, полученных при глубинном посеве про­
дукта. его разведения или культуральной жидкости в селективные среды. Принадлежность выделенных
колоний к С. perfringens определяют по морфологическим и биохимическим свойствам. В зависимости
от требований нормативно-технической документации подсчитывают количество или учитывают при­
сутствие (отсутствие) С. perfringens в исследуемом продукте.
       Метод предназначен для:
      устаноатения соответствия микробиологических показателей качества пищевого продукта требо­
ваниям нормативно-технической документации;
       исследования продукта по санитарно-эпидемиологическим показаниям:
      анализа микрофлоры посевов (культуральной жидкости), в которых обнаружены мезофиль-
ные анаэробные клостридии. при необходимости подтверждения присутствия в посевах С.
perfringens.

                                       1. О ТБО Р И ПОДГОТОВКА П РО Б

       1.1. Отбор проб пищевых продуктов — по ГОСТ 26668. ГОСТ 26809.
       1.2. Подготовка проб пищевых продуктов к анализу по ГОСТ 26669.
      Консервы проверяют на герметичность по ГОСТ 8756.18.
      Полные консервы, нормальные по внешнему виду, перед испытанием термостатируют при
30—37 'С в таре вместимостью до 1 дм ’ включительно не менее 5 сут. в таре вместимостью свыше
I дм ’ - не менее 7 сут.
      Пищевые продукты, в которых нормируется допустимое количество С. perfringens, термостатиро-
вапию не подлежат.
      Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления гомогената продукта или исход­
ного разведения - не менее (10,0±0,1) г (см3).
      Исходные разведения продуктов с массовой долей NaCI более 5 % готовят с использованием
пептонной ю лы : исходные разведения мясных, молочных продуктов и молока готовят с использова­
нием физиологического раствора. Для приготовления последующих десятикратных разведений исполь­
зуют пептонмо-солевой раствор. Пептонную воду и пептонно-солевой раствор готовят по ГОС Т 26669.
физиологический раствор - по ГОСТ 10444.1.
      Из пробы пищевого продукта, в котором нормируется количество С. perfringens, или его исход­
ного разведения готовят ряд разведений в соответствии с допустимым количеством С. perfringens.
указанном в нормативно-технической документации на конкретный вид пищевого продукта. Культу­
ральную жидкость разводят так, чтобы получить при высеве раздельные колонии.

Издание официальное                                                                   Перепечатка воспрещена
         ★
                                                                            © Издательство стандартов. 1988
                                                                             © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010
                                                        275

С. 2 ГОСТ 10444.9-88

                         2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

     2.1. Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы, реактивы по ГОСТ 10444.1,
а также аппаратуру, материалы, реактивы, указанные ниже:
     анаэростат или другое оборудование, обеспечивающее анаэробные условия культивирования;
     весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104",
с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной ценой деления не более 2 мг (для
взвешивания реактивов);
     весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104".
с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и поверочной иеной деления не более 20 мг (для
взвешивания продукта);
     микроскоп световой биологический с приспособлением для фазовоконтрастного ммкроскопиро-
вания;
     стекла покровные по ГОСТ 6672;
     стекла предметные по ГОСТ 9284;
     петлю бактериологическую;
     термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 *С, позволяющий поддерживать задан­
ную температуру с погрешностью ±1 “С;
     кислоту 5-амиио-2-нафтален сульфоновую;
     галактозу;
     квасцы железоаммонийные;
     натрий сернистокислый:
     натрий тиосульфит (1Ча^>05 безводный);
     неомицина сульфат в таблетках по 0,25 г и 0.1 г;
     неомицина сульфат во флаконах по 0.5 г (50000 ЕД);
     полимиксни В сульфат во флаконах по 25 мг (250000 ЕД) и по 50 мг (500000 ЕД);
     полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;
     кислота судьфаниловая;
     циклосерин в таблетках по 0.25 г;
     феноловый красный, индикатор;
     цинк -- порошок по ГОСТ 3640:
     цитрат аммонийного железа.

                                3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

      3.1. Приготовление растворов
      3.1.1. Раствор массовой концентрации неомицина сульфата 50 г/дм3: во флакон с 0,5 г неомицина
сульфата (для инъекций) доливают до 10 см5 стерильную дистиллированную воду.
      При приготовлении раствора массовой концентрации неомицина сульфата 10 г/дм ' из таблеток:
2 таблетки по 0,25 г или 5 таблеток по 0,1 г растирают в ступке, порошок переносят в мерную посуду
вместимостью 50 см5, смывая дистиллированной ю лой, объем доводят до метки. Раствор стерилизуют
методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.
      3.1.2. Раствор массовой концентрации полимиксина В сульфата 2,5 и 5 г/дм ' или иолимиксина М
сульфата 5 г/дм ’: во флакон с 25 мг или 50 мг полимиксина Сияя инъекций) вносят до 10 см5
стерильную дистиллированную воду, получая растворы массовых концентраций 2.5 и 5 г/дм'.
      3.1.3. Раствор массовой концентрации циклосерина 40 г/дм3: 4 таблетки циклосерина по
0.25 г растирают в ступке, порошок переносят в мерную посуду вместимостью 25 см ', смывая дистил­
лированной водой, объем доводят до метки.
      Раствор стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670.
      3.2. Приготовление питательных сред
      3.2.1.       Агар трнптозо-сульфит-цнклосериновый: основу питательной среды готовят следующим
образом: 15,0 г триптозы, 5.0 г ферментативного пептона, 25 см5 дрожжевого экстракта, 1,0 г безвод­
ного тиосульфата натрия, 1.0 г цитрата аммонийного железа. 20,0 г агара растворяют в 1 дм ' кипящей
дистиллированной воды. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял
при температуре 25*С7,6±0,1. Основу среды стерилизуют при температуре (121 ±1.0) "С в течение
20 мин и хранят при температуре (4+2) "С не более 14 сут.

     * С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001. На территории Российской Федерации действует
ГОСТ Р 53228—2008.
                                                 276

ГОСТ 10444.9-88 С. 3

       К 100 см* основы, расплавленной и охлажденной до 45—55 *С, добавляют непосредственно перед
употреблением I см3 раствора массовой концентрацией циклосерина 40 г/дм5.
      Допускается при отсутствии трнптозы заменять ее равным количеством ферментативного
пептона.
       3.2.2. Агар сульфит-полимиксин-неомиииновый; основу питательной среды готовят следую­
щим образом: 17.0 г ферментативного пептона. 15 см* дрожжевого экстракта, 5.0 г хлорида натрия.
1.0 г безводного тиосульфата натрия, 1.0 г цитрата аммонийного железа. 12.0-15,0 г агара добавля­
ют к 1 дм3 дистиллированной воды. Смесь, периодически перемешивая, подогревают до кипения и
кипятят до полного растворения всех составных частей. Устанааливают pH таким образом, чтобы
после стерилизации он соответствовал при температуре (25±!) 'С 7,6+0.1. Стерилизуют при
температуре (121±!) "С в течение 20 мин. Основу среды хранят при температуре (4±2) "С не более
14 сут.
       К 1 дм3 основы, расплавленной и охлажденной до 4 5 - 55 "С, непосредственно перед употребле­
нием добаатяют I см5 раствора массовой концентрации неомицина сульфата 50 г/дм3 или 5 см5
раствора массовой концентрации неомицина сульфата 10 г/дм3 (50 мкг/ см ' основы среды) и 8 см3
раствора массовой концентрации полимиксика 2,5 г/дм ' или 4 см ' раствора массовой концентрацией
полимнксина 5 г/дм3 (20 м кг/см ' основы среды).
       3.2.3. Среду Вильсон Блера, измененную для анаэробов, готовят по ГОСТ UW44.1.
      3.2.4. Среду для анаэробов готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2.5. Желатин-лактозная среда: 15,0 г триптозы или ферментативного пептона, 50 см5дрожжево­
го экстракта. 120.0 г желатина, 5,0 г дву замещенного фосфорнокислого натрия растворяют в 1 дм '
кипящей дистиллированной воды. Добавляют 10,0 г лактозы и 5 см ' 1 %-ного раствора индикатора
фенолового красного. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он соответствовал
при температуре (25±1) ‘С 7,4±0,1. Разливают в пробирки по 10 см ' и стерилизуют при температуре
(121± 1) *С в течение 15 мин. Хранят при температуре (4+2) "С не более 21 сут. Перед употреблением
среду кипятят в течение 10 мин на водяной бане.
       3.2.6. Среда для изучения редукции нитратов и подвижности бактерий: 5,0 г галактозы. 5,0 г
глицерина, 1,0 г нитрата калия (не содержащего нитрит), 2,5 г дву замещенного фосфорнокислого
натрия (безводного), 3.0 гагара расгворяют в 1 дм’ кипящего мясо-пептонногобульона. Устанавливают
pH раствора таким образом, чтобы после стерилизации он соответствоват при температуре (25±1) "С
7,3±0,1. Разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют при температуре (121 ± 1) "С в течение 20 мни.
В готовой питательной среде контролируют по ГОСТ 10444.8 отсутствие нитритов.
       Хранят при температуре (4±2) *С не более 28 сут. Перед употреблением среду кипятят в течение
10 мин в кипящей водяной бане и быстро охлаждают до комнатной температу ры. Среда должна иметь
студнеобразную консистенцию.
       3.2.7. Среду Роберта готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2.8. Молоко лакмусовое готовят по ГОСТ 10444.1.
       3.2.9. Сахарный кровяной агар по Цейсслеру с антибиотиками: к 100 см 3 сахарного кровяного
агара по Цейсслеру, приготовленного по ГОСТ 10444.1, перед розливом по чашкам Петри добавляют
1 см3 раствора массовой концентрации ииклосерина 40 г/дм5 или 0.5 см ' раствора массовой концентра­
цией неомицина сульфата 10 г/дм3.
       Хранят при температу ре (4+2) "С не более 3 сут.

                                4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

      4.1. Выявление характерных колоний.
      4.1.1. Для проведения испытания отбирают объем (1±0.1) см ’ подготовленной пробы продукта,
его разведения или разведения культуральной жидкости.
     Допускается для получения раздельных колоний проводить посев культуральной жидкости пет­
лей (штрихом) на поверхность питательной среды.
      4.1.2. Подготовите иную пробу продукта, его разведения или разведения культуральной жидкости
высевают глубинным методом по ГОСТ 26670 параллельно в две чашки Петри. Посевы залипают
триптозо-сульфит-никлосернновьш или сульфит-полимиксин-неомициноным агаром, или сахарным
кроняньш агаром по Цейсслеру, или агаром Вильсон-Блера. Содержимое чашек Петри быстро, осто­
рожными круговыми движениями перемешивают. После застывания среды чашки подсушивают и
заливают той же средой так. чтобы высота второго слоя питательной среды была не менее 4 мм.
                                                277